小鼠精子发生与相关基因调控研究进展

精子发生是一个生殖细胞不断增殖和分化的特殊历程,此过程中精原细胞进行自我更新和分化,产生的精母细胞经历2次减数分裂形成了圆形精子,而圆形精子最终经过形态和细胞学变化成为长形精子。文章阐述了这一复杂而有序的过程中受生精细胞内众多基因的调节,这些基因具有时间和空间上阶段性表达特征,在同源重组、染色体联会、染色质浓缩和精子头尾形成等精子发生的特殊过程中起决定性作用。并就近年来许多基因在精子发生中重要作用进行综述。

血清miRNA-146、LPS、ROS在早期妊娠胚胎丢失患者中的水平及临床意义

目的探讨血清微小RNA(miRNA)-146、脂多糖(LPS)和活性氧(ROS)在早期妊娠胚胎丢失(EPEL)患者中的水平及临床意义。方法选取2021年3月至2023年3月广东省东莞市妇幼保健院收治的100例EPEL患者作为研究组,另外选取同期在广东省东莞市妇幼保健院就诊的100例正常妊娠女性作为对照组,检测并比较研究组和对照组血清指标水平。培养HTR-8/SVneo细胞,按照不同转染方式分成miRNA-146抑制剂组、miRNA-146模拟物组及NC组。比较miRNA-146抑制剂组、miRNA-146模拟物组Toll样受体4(TLR4)蛋白和核因子-κB(NF-κB)蛋白水平,比较NC组、miRNA-146模拟物组和miRNA-146抑制剂组miRNA-146水平及HTR-8/SVneo细胞的凋亡率,比较不同水平LPS处理的HTR-8/SVneo细胞生长活力。采用Pearson相关分析EPEL患者miRNA-146水平与ROS、LPS、白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、TLR4蛋白和NF-κB蛋白水平的相关性。结果研究组LPS、ROS、IL-6和TNF-α水平高于对照组,且雌二醇、孕酮、miRNA-146水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。miRNA-146模拟物组miRNA-146水平高于miRNA-146抑制剂组和NC组,差异均有统计学意义(P<0.05)。miRNA-146模拟物组TLR4蛋白、NF-κB蛋白水平低于miRNA-146抑制剂组,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同水平LPS(8、12、16、20μg/mL)处理的HTR-8/SVneo细胞生长活力低于20μg/mL LPS+miRNA-146模拟物处理的HTR-8/SVneo细胞生长活力,差异均有统计学意义(P<0.05)。miRNA-146抑制剂组HTR-8/SVneo细胞的凋亡率高于NC组和miRNA-146模拟物组,且NC组高于miRNA-146模拟物组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,EPEL患者miRNA-146水平与ROS、LPS、IL-6、TNF-α、TLR4蛋白和NF-κB蛋白水平呈负相关(r=-0.737、-0.614、-0.712、-0.729、-0.739、-0.708,P<0.05)。结论EPEL患者血清中miRNA-146水平明显下降,并与LPS、ROS、IL-6、TNF-α的水平呈负相关,可能是EPEL发生的影响因素之一,有望为临床预测孕妇发生EPEL提供新思路。

高龄妊娠对子代大鼠前额叶皮层神经干细胞增殖及突触可塑性的影响

目的探究高龄妊娠对子代大鼠前额叶皮层神经干细胞增殖及突触可塑性的影响。方法选择3月龄与12月龄SD雌性大鼠,均与3月龄SD雄性大鼠合笼。子代鼠出生后,将其分为适龄子代组(Con组)和高龄子代组(AMA组)。取出生后1 d的子代大鼠脑组织,利用HE染色观察前额叶皮层神经元的形态变化;利用qRT-PCR和Western blot方法分别检测前额叶皮层中G蛋白信号调节蛋白2(RGS2)、巢蛋白(Nestin)、突触后致密区蛋白95(PSD95)、脑源性神经营养因子(BDNF)和突触素(SYN)的mRNA及其蛋白质表达变化情况。结果HE染色结果发现,与Con组比较,AMA组前额叶皮层的神经元数目减少,部分神经元发生变性,出现胞体肿胀、空泡化现象。qRT-PCR和Western blot结果发现,与Con组比较,AMA组Nestin、RGS2、PSD95、BDNF、SYN mRNA及蛋白质相对表达水平均显著下降(P<0.05)。结论高龄孕鼠子代前额叶皮层的神经干细胞增殖能力减弱,突触可塑性能力降低,可能是造成子代脑发育障碍和认知功能下降的原因之一。

孕期应激致卵巢恢复功能减弱及氧化应激水平增加

目的利用孕期束缚应激诱导的产后抑郁大鼠模型,探索孕期应激对卵巢生殖激素分泌水平及氧化应激反应等的影响。方法孕鼠随机分为两组,每组6只。对照组不做处理,实验组(PPD组)在孕8~21 d进行为期两周、每天2 h的束缚应激,产后1周内进行抑郁行为的检测。分娩后采用酶联免疫吸附法检测血浆卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)的水平;蛋白免疫印迹方法检测卵巢ERα、ERβ、ERK1/2、Nrf2、HO-1以及炎症因子IL-6的表达水平;HE染色观察卵泡发育情况。结果孕期束缚后,与对照组大鼠比较,PPD组的糖水偏好率显著降低(P<0.01)且强迫游泳不动时间显著延长(P<0.001),血浆FSH水平显著降低(P<0.001)、LH水平显著升高(P<0.01)。与对照组大鼠比较,PPD组的卵巢组织中ERβ、p-ERK1/2、Nrf2、HO-1蛋白相对表达量显著降低(P<0.05),而炎症因子IL-6蛋白相对表达量显著升高(P<0.05)。HE染色结果显示,PPD组大鼠卵巢组织中闭锁卵泡增多。结论孕期束缚应激可导致大鼠卵巢组织中氧化应激及炎性因子水平增加,闭锁卵泡增多,提示孕期束缚应激可致产后卵巢的恢复能力减弱。

多次超数排卵对小鼠和人卵母细胞发育潜能的影响

背景:超数排卵是辅助生殖技术中常见的治疗方法。在临床实践中,一些患者需要经过多次超数排卵怀孕。目的:探讨多次超数排卵对小鼠和人卵母细胞发育潜能的影响。方法:采用动物实验和临床回顾性研究。动物实验选择90只SPF级ICR 8周龄雌性小鼠,随机分为3组,分别进行1次、3次和5次超数排卵。在临床研究中共纳入306例接受3个体外受精周期的患者,比较不同周期的获卵数和胚胎发育情况。结果与结论:①在动物实验中,多次超数排卵不影响小鼠胚胎的发育率和发育速度,且对小鼠囊胚细胞凋亡、DNA损伤、内细胞团和滋养外胚层的形成均无显著影响(P>0.05);②在临床研究中,3个周期内获得的卵母细胞数(8.60±5.04,8.58±4.87及8.38±4.63,P=0.81)和可移植胚胎数(2.42±1.99,2.40±1.92及2.64±2.00,P=0.26)均无显著差异;③对于年轻组(<35岁)和高龄组(≥35岁),胚胎质量不受超数排卵次数的影响(P>0.05);④结果显示:多次超数排卵不影响小鼠和人卵母细胞的发育潜能。

银钟花根尖染色体制片及核型分析

以银钟花种子的初生根尖为材料,探讨不同预处理试剂、预处理时间和解离方法对银钟花根尖染色体压片的影响,获得了一套银钟花染色体制片技术,并以此为基础进行核型分析,揭示其核型特征。结果表明:用0.003 mol/L的8-羟基喹啉避光处理6 h,卡诺氏固定液固定10 h,1 mol/L HCl在60℃的恒温水浴锅中解离12 min,20%的卡宝品红染色,可获得分散较好、形态清晰的高质量银钟花染色体压片。银钟花的染色体数目为2n=24,核型公式为2n=24=20m+4Sm,核型不对称系数为55.77%,核型分类属于1B型。

枯叶蛱蝶非越冬雄成虫内生殖器官的形态与发育

通过对不同日龄枯叶蛱蝶雄成虫生殖系统进行解剖观察试验,系统地了解其内生殖器官的形态与发育。试验数据统计分析结果表明:雄性枯叶蛱蝶内生殖器官包括2个精巢、2个贮精囊、1对输精管、1对复射精管、1条单射精管和1对附腺;精巢和贮精囊的长径与短径随日龄的增加,先增后减;输精管长度和输精管基端宽、附腺长度和附腺最大宽随日龄的增加,先增加后趋于平稳;单射精管长度、双射精管长度及基端宽随日龄的增加而缓慢增加。

miRNA-146调控TLR4/NF-κB通路促进滋养层细胞增殖和迁移

目的探讨miRNA-146是否通过调控Toll样受体4/核因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路促进滋养层细胞HTR-8/SVneo增殖和迁移,以期为不明原因复发性流产(uRSA)的发病机制研究和防治提供参考。方法(1)细胞研究:将转染后的胎盘滋养层细胞HTR-8/SVneo分成miRNA-146抑制剂组、抑制剂对照组、miRNA-146模拟物组、模拟物对照组,检测各组HTR-8/SVneo细胞生长的活力、增殖、凋亡、迁移情况,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测各组TLR4、NF-κB、肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素-6(IL-6)的mRNA和蛋白相对表达水平。(2)动物研究:建立Dicer酶敲除的uRSA小鼠模型,将正常妊娠小鼠作为对照组,通过qRT-PCR检测胎盘组织的miRNA-146 mRNA表达情况,采用免疫组织化学法检测胎盘组织的TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-6蛋白表达情况。结果(1)细胞研究:与模拟物对照组比较,miRNA-146模拟物组HTR-8/SVneo细胞克隆形成率、增殖能力及迁移能力显著增加(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05);与抑制剂对照组和miRNA-146模拟物组比较,miRNA-146抑制剂组HTR-8/SVneo细胞克隆形成率、增殖能力及迁移能力显著降低(P<0.05),而细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。与模拟物对照组比较,miRNA-146模拟物组的TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-6蛋白和mRNA相对表达量显著降低(P<0.05);与抑制剂对照组和miRNA-146模拟物组比较,miRNA-146抑制剂组的TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-6蛋白和mRNA相对表达量显著增加(P<0.05)。不同浓度(10~80μmol/L)miRNA-146对HTR-8/SVneo细胞生长活力的增长均有显著影响(P<0.05),并呈浓度依赖性。(2)动物研究:与对照组比较,uRSA组小鼠胎盘组织中miRNA-146 mRNA的相对表达量显著降低[(0.32±0.19)vs.(0.96±0.24),t=12.473,P<0.05],而TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-6的蛋白表达有增高趋势。结论上调miRNA-146的表达具有促进胎盘滋养层细胞的增殖和迁移作用,其机制可能与负性调控TLR4/NF-κB通路相关。miRNA-146有望成为防治uRSA的潜在靶标。

心理应激大鼠卵巢内分泌功能降低模型的实验研究

目的 用心理应激方法建立大鼠卵巢内分泌功能减低模型。方法 采用声 光 电复合刺激引起心理应激获得大鼠卵巢内分泌功能降低模型。结果 模型大鼠动情周期紊乱 ;血清E2 、P水平、肾上腺抗坏血酸含量明显降低 ;垂体、卵巢、子宫重量明显降低 ;卵巢形态学变化明显。结论 这是一种有用的卵巢内分泌功能降低的动物模型。

番茄红素在雄性生殖领域上的研究进展

番茄红素是普遍存在于瓜果蔬菜中的一种类胡萝卜素,并因其具有抗氧化、抗炎、抗癌、降血脂和增强免疫力等作用而被广泛使用.对番茄红素在前列腺相关疾病、生殖毒性损伤以及精子冻存等雄性生殖方面的研究进展进行概述,为番茄红素在雄性生殖领域的应用提供参考.

氰戊菊酯通过诱导mPTP开放干扰小鼠睾丸间质细胞睾酮合成的机制

目的探讨氰戊菊酯(Fen)干扰小鼠睾丸间质细胞(TM3细胞)睾酮合成的机制。方法TM3细胞随机分为对照组(Control group,0μmol/L Fen)、25μmol/L Fen暴露组、25μmol/L Fen+5 mmol/L NAC组、25μmol/L Fen+10μmol/L BAPTA-AM组;采用CCK-8法检测染不同浓度及不同作用时间的细胞增殖情况;ELISA法检测小鼠睾酮(T)和cAMP的含量;DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)含量;Fluo-4/AM探针检测细胞内Ca^(2+)浓度;JC-1荧光探针检测线粒体膜电位(MMP)变化情况;生化比色法测定细胞ATP含量;Western blot检测3β-HSD、StAR、ANT4和CyPD表达水平。结果Fen暴露后,TM3细胞ROS水平和胞内Ca^(2+)浓度上升(P<0.01),线粒体膜通透性转运孔(mPTP)组成成分ANT4和CyPD表达水平上升(P<0.01),MMP水平下降(P<0.01),细胞ATP和cAMP合成能力降低(P<0.01),cAMP/PKA信号通路依赖性的StAR蛋白和3β-HSD表达水平下降(P<0.01),睾酮合成能力随之下降(P<0.01);与25μmol/L Fen暴露组比较,25μmol/L Fen+5 mmol/L NAC组和25μmol/L Fen+10μmol/L BAPTA-AM组TM3细胞睾酮合成水平显著上升(P<0.05)。结论Fen暴露后,TM3细胞ROS和胞浆Ca^(2+)浓度上升,二者通过协同效应引起mPTP开放,细胞ATP和cAMP合成障碍,cAMP/PKA信号通路依赖性的睾酮合成蛋白和酶表达下降,TM3细胞睾酮合成受阻。本研究的结果提示抑制ROS和Ca^(2+)的信号作用可能有助于抑制Fen诱导的TM3细胞mPTP开放并改善Fen暴露所致TM 3细胞睾酮合成障碍。

中国大鲵生殖生理研究进展

从1978年中国大鲵人工繁殖成功后,我国学者从生殖生理学的角度对大鲵人工繁殖的相关问题进行了系列工作,现将20多年的研究进展情况予以综述.

附睾中非编码小RNA(sncRNA)的研究进展

非编码小RNA(sncRNA)主要通过抑制性调控靶基因发挥作用。近年的研究发现sncRNA在哺乳动物附睾的各个部位均有表达,并且在调控附睾不同节段的基因表达方面起着非常关键的作用。附睾上皮细胞中sncRNA的多样性及其表达水平的时空差异会影响很多潜在的靶基因,从而调节附睾的生理功能,另外,这些sncRNA还可以通过附睾小体传递给精子,对精子产生一系列的调控作用。综述了附睾中sncRNA表达、sncRNA对附睾和附睾中精子功能调节方面的研究进展,以期为探究sncRNA对雄性生殖细胞调控作用的分子机制提供参考。

可的松慢性暴露对雌性斑马鱼的生殖毒性

为了评估可的松暴露对成年雌性斑马鱼的生殖毒性作用以及跨代效应,将成年雌性斑马鱼暴露于5、50和500 ng/L的可的松环境中,以未添加可的松的溶剂处理为对照,从形态学、病理组织学、行为学等方面评估糖皮质激素可的松对成年雌性斑马鱼以及子一代胚胎的毒理风险。结果表明:高浓度(500ng/L)暴露下的成年雌鱼性腺中卵泡发育明显被抑制,且此浓度下的成年雌鱼无法产卵;中浓度(50 ng/L)下的成年雌鱼产卵量以及胚胎孵化率都极显著低于对照,但从形态学上看,5~50 ng/L可的松处理对孵化出的子一代无明显的畸变现象。

小鼠输卵管上皮类器官的构建及表型验证

目的·构建野生型(wild type,WT)小鼠和miR-34b/c^(−/−)且miR-449^(−/−)双敲除(double knockout,dKO)小鼠输卵管上皮类器官的培养体系,并进行表型验证。方法·利用酶消化法和差速贴壁法分离纯化WT小鼠和dKO小鼠输卵管上皮细胞,并利用免疫荧光法鉴定得到的输卵管上皮细胞的纯度;通过计数和直径测量比较WT小鼠和dKO小鼠输卵管上皮类器官数量、生长速度和生长大小;利用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,H-E)染色和透射电子显微镜(透射电镜)对输卵管上皮类器官进行形态和结构观察;采用免疫荧光法观察并统计纤毛细胞和分泌细胞在WT小鼠和dKO小鼠输卵管上皮类器官中的比例;采用免疫组织化学法、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blotting检测分泌细胞、纤毛细胞相关基因在输卵管上皮类器官中的表达。结果·分离纯化得到的输卵管上皮细胞纯度较高。与WT小鼠相比,dKO小鼠输卵管上皮类器官生长更快,体积更大,数量也更多;但dKO小鼠输卵管上皮类器官发育较慢,于培养28 d时才出现上皮内陷,而WT小鼠的类器官于培养16 d时已经出现。H-E染色和透射电镜结果显示输卵管上皮类器官呈现出与在体输卵管类似的结构。免疫荧光检测显示dKO小鼠输卵管上皮类器官的纤毛细胞显著减少而分泌细胞显著增多(均P<0.05)。免疫组织化学法检测结果显示,dKO小鼠输卵管上皮类器官的分子表达模式与在体输卵管组织基本一致,即纤毛细胞标志物乙酰化微管蛋白α(Ac-α-tubulin)、叉头框J1(forkhead box J1,FOXJ1)表达减少,分泌细胞标志物配对盒8(paired box 8,PAX8)表达增加;RT-qPCR结果显示dKO小鼠输卵管上皮类器官中Foxj1和微管蛋白β4A(tubulinβclassⅣa,Tubb4a)的mRNA水平均降低(均P<0.05),而Pax8 mRNA水平升高(P<0.05);Western blotting结果显示,dKO小鼠类器官中FOXJ1的蛋白表达水平显著降低,PAX8表达显著升高(均P<0.05)。结论·研究成功构建WT小鼠和dKO小鼠的输卵管上皮类器官培养体系,该体系可模拟小鼠在体输卵管的表型。

克氏原螯虾受精卵发育的温度因子数学模型分析

设置不同的温度对克氏原螯虾受精卵进行了孵化试验 ,研究了克氏原螯虾胚胎发育速度与温度之间的关系 ,引用了王如松创立的数学模型 :V(T) =(k·T +c)·(1 -exp(- (T -TH) /rH) ) ;并以此模型求算了该种群受精卵发育的最适温度和最高临界温度分别为 30 .3℃和40 .3℃ ;利用莱奥姆法则 (Reaumur’sLaw)求得最低临界温度及平均临界温度分别为 4 .7℃和5.6℃ ;最低有效积温和平均有效积温分别为 731 (℃·d)和 765 (℃·d) ;还就最适温度、耐温上限比较了高能卵与均能卵在适温能力上的差异 。

多氯联苯对鸡胚卵巢发育和配子分化的影响

禽类的肉和蛋产品含有大量的脂肪 ,可蓄积高浓度的多氯联苯 ( PCB)和其他环境污染物从而影响动物和人类健康。试验选用鸡作为实验动物研究了 PCB对胚胎期卵巢发育和生殖细胞分化的影响 ,在入孵前将Aroclor12 54注入海兰种蛋的卵黄内 ,剂量分别为 0 ,1,10和 10 0 μg/枚。取出新出壳雏鸡的卵巢进行组织学研究。结果表明 :PCB处理后 ,鸡胚的孵化率与对照组相比明显下降 ,而且死胚都发生了不同程度的水肿 ;雌性雏鸡左侧卵巢横截面积、皮质厚度和皮质内的卵母细胞数均比对照组明显增加 ;只有个别的卵母细胞发生了核固缩和胞质空泡化。本研究表明 PCB干扰鸡胚卵巢的发育 ,首次揭示了

性成熟前小鼠生精细胞的发育过程

用光镜、电镜观察了生后 1～ 1 8d昆明白小鼠的生精上皮。结果显示 ,生后 1～ 3 d,曲细精管内只有生殖母细胞和支持细胞 2类形态结构截然不同的细胞 ,前者位于管中部 ;生后 4～ 5d,少数生殖母细胞已附着在基膜上 ;生后 6～ 7d,原始 A型精原细胞大量出现并附着在基膜上 ;生后 8d,A型精原干细胞大量出现 ,B型精原细胞开始出现 ;生后 1 0 d,B型精原细胞大量出现 ;生后 1 2～ 1 3 d,前初级精母细胞出现 ,少数曲细精管的管腔开始出现 ;生后 1 4～ 1 5d,多数曲细精管管腔基本形成 ,前初级精母细胞大量出现。本试验的结果表明 ,7～

中国石龙子雌体繁殖特征和卵孵化的地理变异

浙江丽水和广东韶关中国石龙子均年产单窝卵 ,窝卵数、窝卵重和卵重均与雌体SVL呈正相关 ,雌体头部形态、繁殖特征、产卵起始时间和卵孵化的热依赖性等有显著的地理变异 .韶关石龙子产卵起始时间为 5月中旬 ,比丽水石龙子约早两周 .韶关石龙子窝卵数较大、卵较小 ,窝卵重与丽水石龙子无显著差异 .韶关石龙子特定SVL的窝卵数比丽水石龙子多 2 .8枚卵 .中国石龙子卵数量和大小之间有种群间权衡 ,无种群内权衡 ,同一种群内卵数量与卵大小无关 .孵化温度影响石龙子孵出幼体的一些特征 ,2 4℃孵出幼体比 32℃孵出幼体大、躯干发育好、剩余卵黄少 .韶关 2 4℃孵出幼体的体重、躯干干重小于丽水幼体 ,韶关 32℃孵出幼体的SVL小于丽水幼体、剩余卵黄大于丽水幼体 ,表明适宜卵孵化温度范围有地理变异 .丽水石龙子卵对极端高温和低温的耐受性较强 。

小鼠卵母细胞体外成熟及受精过程中细胞核的时空变化规律

用电镜方法研究小鼠卵母细胞的发育及受精虽然已有很多报道，但大多数是有关细胞质、尤其是皮质颗粒、高尔基复合体及线粒体的形态及分布变化的。从卵母细胞体外成熟培养、第一次减数分裂恢复到受精后第二次减数分裂完成，细胞核经历了复杂的变化，有关的系统研究却很少。本实验详细地研究了小鼠卵母细胞体外成熟及受精过程中两性生殖细胞内细胞核的时空变化规律。从卵巢中采集生发泡（ＧＶ）期卵母细胞，进行体外成熟培养，经超排获得的成熟卵母细胞去卵丘和透明带后，用于体外受精。于体外成熟培养及受精后的不同时间，用光镜及电镜方法观察细胞核变化及极体排放。结果表明，尽管大多数卵母细胞在体外培养２至４小时生发泡破裂（ＧＶＢＤ），但有１３．６％在培养８小时后仍处于ＧＶ期（图１）。电镜观察揭示，不发生ＧＶＢＤ的卵母细胞核的核仁由颗粒性纤维成分、空泡及纤维中心组成。有时核仁表面有空泡。只有核仁完全致密化、核仁周围有核仁相随染色质分布时，卵母细胞才获得恢复减数分裂的能力。ＧＶＢＤ发生时，随着核仁相随染色质向核膜侧扩散迁移，核仁越来越小；与此同时，核膜打折，染色质团块中央出现电子致密的芯。核仁的消失早于核膜的破裂，提示核仁成分可能参与核膜打折及破裂，体外培?