血红蛋白在L-半胱氨酸微银修饰电极上的电化学行为

L-半胱氨酸通过化学键结合到微银电极表面成化学修饰电极,研究表明此修饰电极对血红蛋白的氧化还原有促进作用.并用预富集和示差脉冲溶出伏安法检测血红蛋白的浓度,检测限为1.0×10^(-8)mol/L,8次测定2.0×10^(-7)mol/L血红蛋白的相对标准偏差是6.3%.

金属硫蛋白测定方法──银饱和分析法

本方法是基于Ａｇ￣＋与ＭＴ的高亲合力及ＭＴ的对热稳定性，向含ＭＴ的溶液中加入过量的Ａｇ￣＋，待反应完全后，再逐次加入血红蛋白，以结合剩余的Ａｇ￣＋，加热使血红蛋白沉淀，与ＭＴ结合的Ａｇ￣＋则完全存在于上清液中，通过测定其中Ａｇ￣＋的含量，便可计算出ＭＴ的浓度。

人胎肝金属硫蛋白的分离纯化及酶联免疫吸附检测

人胎肝经匀浆、离心、乙醇沉淀后，通过ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５、ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦａｓｔＦｌｏｗ柱层析分离，获得金属硫蛋白的两种亚型（ＭＴ－１和ＭＴ－２）。经氨基酸组成分析证明是均一的。用ＭＴ－１为抗原免疫青紫兰兔制备了抗血清，以纯化的ＩｇＧ建立了人ＭＴ的酶联免疫吸附检测（ＥＬＩＳＡ）方法，并给出了标准工作曲线。

水稻条叶枯病毒基因产物在水稻和昆虫体内的Western印迹分析

将AStV基因组组分3编码的NS3和NC蛋白基因以及组分4编码的NCP和NSvc4蛋白基因分别克隆于大肠杆菌表达载体pGEX3X在IPTG诱导下，表达出4种融合蛋白。这些表达产物用于免疫动物产生多克隆抗血清。以制备的多克隆抗血清为探针，Western印迹分析了宿主植物和介体昆虫体内NS3、NC、NCP和NSvc4种基因表达的产物。NC蛋白的抗体可在病株和病毒粒子制备物中以及NCP抗血清仅在病株中检测到相应大小的产物，其余的均与预期值相停。

镉诱导金属硫蛋白的纯化及其抗体制备

目的：建立简便分离纯化镉诱导金属硫蛋白（ＣｄＭＴ）的方法，并制备抗ＣｄＭＴ抗血清。方法：采用加长ＳｅｐｈａｄｅｘＧ７５柱层析分离纯化由ＣｄＣｌ２诱导的大鼠肝组织ＣｄＭＴ，以此为抗原免疫家兔制得抗ＣｄＭＴ抗血清。结果：纯化的ＣｄＭＴ经ＳＤＳＰＡＧＥ测定相对分子质量及Ｃｄ含量测定与标准ＣｄＭＴ一致，氨基酸组分分析也与文献报道基本一致；获得的抗血清对大鼠ＣｄＭＴ具有特异性反应。结论：本法为一种简便高效的分离纯化ＣｄＭＴ的方法，抗ＣｄＭＴ抗血清的制备可为进一步建立敏感的ＥＬＩＳＡ和免疫组化方法进行组织内ＭＴ含量测定及定位，有利于深入研究Ｃｄ中毒机理和ＭＴ生物学功能。

用一种改进的电泳方法测定抗冻蛋白的分子量

针对抗冻蛋白分子量较小的特点，该文采用了一种改进的Ｔｒｉｃｉｎｅ－ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法测定其分子量。采用三层胶系统并在电极缓冲液中以Ｔｒｉｃｉｎｅ代替Ｇｌｙｃｉｎｅ。

蛋白免疫印迹法在G蛋白检测中的应用

目的：建立一项用蛋白免疫印迹法测定鸟苷酸结合蛋白（Ｇ蛋白）含量的技术。方法：取冷冻组织块２００ｍｇ置于４℃预冷的匀浆缓冲液中匀浆、离心后，ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，电转移法转移至硝酸纤维素膜上，经５％脱脂奶粉封闭后，依序与抗Ｇ蛋白抗体和辣根过氧化物酶标记的ＩｇＧ反应，化学发光法检测。结果：所得的Ｇ蛋白目标带清晰、明显，重复性好。不同种属大鼠主动脉、心房、心室、脑组织中Ｇｏα和Ｇｉα均为单一带，Ｆｉｓｃｈｅｒ３４４大鼠Ｇｓα主动脉为４条带，Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ和ＷＫＹ／ＳＨＲ大鼠主动脉Ｇｓα为３条带，心房和心室Ｇｓα为３条带，Ｆｉｓｃｈｅｒ３４４和Ｗｉｓｔａｒ大鼠脑组织中Ｇｓα只有两条带。Ｗｉｓｔａｒ大鼠肺组织浆和膜中Ｇｑα、Ｇｉα均为单一带，Ｇｓα两条带；肺组织膜中Ｇｏα为单一带，肺组织浆中未能检出Ｇｏα。结论：用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ技术可较好地检测Ｇ蛋白含量和带型分布。不同种属动物及组织Ｇ蛋白亚型的含量和带型分布是不完全相同的。

用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法测定钙调蛋白的纯度与分子量

采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法测定了钙调蛋白的纯度与分子量,并对所得的结果进行了讨论,实验结果表明本方法具有灵敏度高、分析速度快、重复性好、信息直观等特点,是其他传统测定蛋白质分子量的方法无法比拟的.

血红蛋白在银溶胶上的表面增强喇曼光谱研究

表面增强喇曼光谱已广泛应用于物质分子在金属表面吸附的研究．人们发现，不仅无机物和有机小分子能产生ＳＥＲＳ，而且生物分子，如核酸［１］、色蛋白［２］以及蛋白质［３］均能产生ＳＥＲＳ效应，并以此来研究生物分子－蛋白质的变性问题．Ｃｏｔｏｎ等［４］研究细胞...

人类M6b基因一种剪接型cDNA的分子克隆

蛋白脂蛋白（PLP）基因突变导致Pelizaeus－Merzbacher病（PMD）和部分X-连锁的痉挛性截瘫。Olinsky等克隆了M6b的部分序列（U45955），该基因认为是PLP基因家族成员之一。我们以巢式PCR得到一约300hp的片段，测序为与U45955的5′端局部重叠的新序列，拼接后得到1．642kb的序列，其中含有可编码265个氨基酸的开放阅读框。此阅读框经对脑cDNA文库PCR产物的测序确证（命名为M6ba）。M6ba的CDNA序列及其编码氨基酸序列与小鼠中M6b基因和蛋白质序列显著相似（分别为91．2％和93.4％一致）。Northern杂交的结果及cDNA文库PCR扩增、EST数据库分析的结果提示M6b基因至少存在3种剪接形式。M6ba基因与PLP基因显著相似，并且两蛋白质在所有疏水区高度保守。M6ba基因结构的分析，显示此基因编码区由7个外显子构成。

肝细胞膜低密度脂蛋白受体酶联免疫测定法的建立

实验建立了检测肝细胞膜低密度脂蛋白受体的抗配体抗体酶联免疫吸附测定法．测定中，固相膜受体蛋白量由包放前后膜蛋白浓度差值计算确定；低密度脂蛋白结含量按双抗体夹心法制作的低密度脂蛋白标准曲线确定，膜蛋白非村异吸附则用与酶联抗体来源相同的同种动物血浆低密度脂蛋白平行抑制试验消除．兔肝细胞膜低密度脂蛋白受体结合活性经Scatchard作图，Kd＝13．6mg／L，Bmax＝124μg／g膜蛋白（n=5）．测定结果说明建立的方法安全可靠，能反映受体的结合活性，在高脂血症及心血管病的研究中具有广泛的应用价值．本研究还对选择确定受体包被浓度、酶交联物稀释度等的棋盘滴定方法作了详细介绍和讨论．

一种新型结构的金属硫蛋白──Pb-MT'

金属硫蛋白（ｍｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎｓ，简称ＭＴｓ）是一大类富含巯基的小分子蛋白质（分子量＜９０００），具有很强的金属结合能力，哺乳动物ＭＴ每分子可结合７个二价金属离子或１２个一价金属离子．ＭＴ的结构一直是科学家关注的热点，其中哺乳动物Ｃｄ７－Ｍ...

鼠肌核心蛋白聚糖的研制

目的 :从动物组织中提取纯化核心蛋白聚糖 (Decorin) ,检测其活性。方法 :以大鼠肌肉为原料 ,采用匀浆、透析、层析等步骤分离、纯化Decorin ,经SDS PAGE检测其分子量和纯度 ,并经细胞株A5 49检测生物学活性结果 :Decorin在SDS PAGE显示分子量约为 37～ 38kD两条带 ,得率约为 2mg/g组织 ,对A5 49具有明显的抑制生长活性 ,抑制率 >5 0 %。结论 :此法获得的Decorin将有可能作为天然药物用于治疗肿瘤。

鲑鱼降钙素基因在大肠杆菌中的克隆与表达

以鲑鱼基因组ＤＮＡ为模板，采用ＰＣＲ获得ｓＣＴ基因，并为ＤＮＡ序列分析所证实．以ｐＧＥＸ－３Ｘ为表达载体，利用体外定点突变技术成功地构建了融合蛋白ＧＳＴ－ｓＣＴ的重组表达质粒ｐＧＥＸ－３Ｘ－ｓＣＴ，在大肠杆菌中得到高效表达，其表达量约为菌体总蛋白的３０％；利用亲合层析法对融合蛋白ＧＳＴ－ｓＣＴ进行纯化，再经Ｆａｃ－ｔｏｒΧａ酶切后获得了重组ｓＣＴ，并对其进行活性检测．初步实验证明。

视黄醇结合蛋白的分离纯化及其抗血清的制备

建立了经硫酸铵分级、DEAE-Sephadex A25柱、Sephadex G200柱、UltrogelACA44柱和 Sephadex G100柱层析分离纯化人血浆视黄醇结合蛋白的方法.经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,其纯度达到电泳纯.以此电泳纯的视黄醇结合蛋白免疫家兔得到了高效价的抗血清.

酿酒酵母BD101诱导产生的金属硫蛋白的分离纯化及鉴定

从酵母菌中分离出拮抗重金属、经铜诱导产生金属硫蛋白的酿酒酵母（Saccharo－mycescerevisiae）BD101。无细胞抽提液经SephadexG－50、DEAESepharoseCL－4B、SephadexG-25三次凝胶及阴离子交换柱层析分离纯化得到两个金属硫蛋白亚型。Mr约为7kD，由60个氨基酸组成，其中半胱氨酸含量占10％，每分子金属硫蛋白（Cu-MT）含6个分子Cys，可结合4个铜原子。

锌指类蛋白研究的新进展

综述了锌指蛋白的最新研究状况。

钙调素的间接碘标记

以间接碘标记蛋白质的方法制备１２５Ｉ－ＣａＭ，比活度为１．５６ＭＢｑ／μｇ，１２５Ｉ的总标记率为２３．１％。实际应用表明，由于减少了直接碘化标记对抗原的损伤，其特异性、稳定性等技术指标均能满足放射免疫工作的要求。

反胶束萃取血红蛋白的研究

研究了CTAB—正辛醇—正庚烷反胶束溶液萃取牛血红蛋白(PH_b)时、pH值、表面活性剂浓度、助表面活性剂浓度、离子种类和离子强度、溶剂比以及蛋白质浓度等因素对萃取效果的影响,并以蛋白质分子与表面活性剂分子间的相互作用以及反胶束大小的空间阻碍作用上进行了解释.研究表明,水相PH值在10.5～12.5之间,KCI浓度为0.1mol/l,反胶束溶液中表面活性剂浓度为0.02mol/l,正辛醇与正庚烷之比为0.25,反胶束溶液与水溶液体积比为1.0时,血红蛋白的萃取率可达93%以上.

氧合血红蛋白与亚硝酸根、过氧化亚硝酸离子反应的动力学研究

利用快速混合停流时间分辨光谱研究了氧合血红蛋白与亚硝酸根的反应 .研究表明氧合血红蛋白和NO-2 的反应历程比较特殊 ,根据实验结果提出了合理的反应机理 .同时与氧合血红蛋白和过氧化亚硝酸离子的反应进行了对比 ,发现氧合血红蛋白和过氧化亚硝酸离子的反应具有双相反应动力学的特征 。