核苷酸、聚核苷酸和核酸猝灭Tb^(3+)-钛铁试剂络合物荧光的机理研究

研究了核苷酸、聚核苷酸和核酸对Tb3+－钛铁试剂（TR）络合物的荧光碎灭机理，认为荧光猝灭过程是核苷酸、聚核苷酸和核酸分子中的磷酸基组分与TR竞争Tb3+离子，生成实验条件下无荧光的二元络合物的静态猝灭过程；用Tb3+－TR络合物荧光探针研究DNA嵌入剂和金属离子与DNA相互作用的实验结果说明这一机理是合理的．

乳中环核苷酸提取方法研究

根据环核苷酸理化性质及乳的特点，采用酶法从乳汁中提取环核苷酸。研究表明，该方法条件温和、工艺合理、操作方便。经放射免疫测定提取浓缩液浓度为ｃＡＭＰ２０μｍｏｌ·Ｌ－１，ｃＧＭＰ０．２μｍｏｌ·Ｌ－１．

鲐鱼鱼精中5′-脱氧核苷酸的分离工艺

论述了用桔青霉PenicilliumcitrinumM71菌株 ,经液体培养制得的 5′ -磷酸二酯酶降解鲐鱼鱼精DNA成5′ -脱氧核苷酸的分离工艺。分离采用 2 0 1× 8阴离子交换树脂 ,具体条件为 :柱床高 1 0 5mm ,柱床直径 45mm ,样品浓度 2 1 3mg·mL-1,洗脱流速 0 .5mL·cm-2 ·min-1。分离结果表明 ,采用 0 .0 0 5MHCl+0 .0 4MNaCl作洗脱剂 ,流速为 0 .7mL·cm-2 ·min-1时 ,四种 5’ -脱氧核苷酸组分能完全被洗脱下来 ,且呈一个大峰 ,同其它成分分开 ,再先后采用 0 .0 0 1 8MHCl、0 .0 0 2 8MHCl、0 .0 36MNaCl(pH6 .0 )、0 .0 0 5MHCl+0 .0 2MNaCl作洗脱剂时 ,则能分别将dCMP、dAMP、TMP。

酰胺水解法合成硫代磷酸三(4-氨基苯)酯

实验以对乙酰氨基酚和三氯硫磷为原料,经酯化反应合成硫代磷酸三(4-乙酰氨基苯)酯(TPTAA),讨论了反应介质、缚酸剂种类、对乙酰氨基酚与三氯硫磷的物质的量的配比、缚酸剂用量与组成等因素对TPTAA产率的影响,结果表明:在n(对乙酰氨基酚):n(三乙胺+吡啶):n(三氯硫磷)=3.10:3.80:1、n(三乙胺):n(吡啶)=1:0.02、反应温度35℃、反应时间4h条件下,TPTAA的收率可达到88.04%;再将TPTAA在酸性条件下水解得到硫代磷酸三(4-氨基苯)酯(TPTA),探讨了HCl和CH_3OH用量对产物产率的影响,得到:当n(CH_3OH):n(HCl):n(TPTAA)=2.9:6.0:1,反应温度85℃,反应时间3h时,TPTA的收率95.62%。

高效薄层色谱法纯化合成寡核苷酸及其衍生物

在分子生物学研究的许多领域均需要一定纯度的寡核苷酸.目前寡核苷酸的纯化方法主要有高效液相色谱法及电泳法两种.这两种方法不仅需要一定的仪器设备而且纯化周期长(2—3d)、回收率低(50%—80%).文中报道建立了一种高效薄层色谱纯化寡核苷酸及其衍生物的方法.该方法可在3—4h 内获得寡核苷酸纯品,平 均回收率可达97.7%.

距离约束分子动力学计算低聚核苷酸d(GGTATACC)_2溶液中三维结构

8聚核苷酸d(GGTATACC)_2溶液中的三维结构通过简单的高温和低温动力学计算以及能量优化的方法获得.计算中以标准B型双螺旋DNA为初始结构,加上螺旋间的20个氢键约束和由核磁共振NOESY谱获得的186个NOE约束,另外还加入二面角约束32个.计算所得的6个低能-302±5kJ/mol)优势构象的均方根偏差(rmsd值)均小于0.06nm,平均均方根偏差为0.043nm,从优化结构反算所得的NOE谱与实验数据相吻合.计算结果表明,所加各约束项合理,优化结构具有较高的可信度.

棉宝中常见单磷酸核苷酸的高效液相色谱分离与测定

建立了以浓度为０．０５ｍｏｌ／Ｌ的ＫＨ２ＰＯ４为流动相分离高效液相色谱法测定５′－鸟苷单磷酸（ＧＭＰ）、５′－尿苷单磷酸（ＵＭＰ）、５′－腺苷单磷酸（ＡＭＰ）、５′－胞苷单磷酸（ＣＭＰ）。测定了棉宝中ＡＭＰ、ＣＭＰ、ＧＭＰ、ＵＭＰ的分解率，表明棉宝的热贮和冷处理稳定性良好。

酵母RNA酶解液中核苷酸分离技术研究

本文着重研究了利用离子交换层析技术从酵母RNA的酶解液中分离核苷酸的现实性与可行性,探讨分离核苷酸的最佳工艺条件。

寡核苷酸自动合成试剂的研究进展

主要介绍近几年来核酸自动化固相合成试剂的研究进展。

人工合成寡聚核苷酸的纯化与标记

采用ＤＮＡ合成仪合成寡聚核苷酸，经反相高效液相色谱或变性聚丙烯酰胺凝胶分离及纯化，将纯化后的寡聚核苷酸进行３２Ｐ末端标记，用自制的ＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５层析柱除去非标记的同位素，标记的寡聚核苷酸比活度在１０８ｃｐｍ／ｍｇＤＮＡ以上，再经反相高效液相色谱及变性聚丙烯酰胺凝胶检测，其纯度完全满足作为标记探针、引物或模板使用的要求。

自稳定硫代磷酸寡核苷酸的合成及其在血液中的稳定性

目的：探讨自行设计的自稳定硫代磷酸寡核苷酸在血液中的稳定性。方法：在ＤＮＡ自动合成仪上合成硫代磷酸寡核苷酸和普通磷酸二酯键寡核苷酸，经高效液相仪纯化和３２Ｐ标记后，两者一起在２０％血清中３７℃温育０，１，４，８及３２ｈ，酚抽提后，变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，比较两者的降解率。结果：自稳定硫代磷酸寡核苷酸在各时相点均为完整形式，普通磷酸二酯键寡核苷酸在以上５个时相点的降解率分别为０．０％，７７．２％，８３．０％，８４．４％和８５．３％。结论：自稳定硫代磷酸寡核苷酸在血液中有较强的稳定性。

毛细管区带电泳激光诱导荧光间接检测环腺苷单磷酸和环鸟苷单磷酸

研究了影响毛细管区带电泳激光诱导荧光间接检测环腺苷单磷酸和环鸟苷单磷酸的实验条件.cAMP和cGMP的线性范围分别为30～500mg/L和15～500mg/L,其最低检测限分别为9.0mg/L和0.5mg/L;当浓度为125mg/L时,cAMP和cGMP峰面积的RSD为4.45%和6.21%(n=4);其迁移时间的日间RSD分别为2.92%和2.04%(n=5)

异核苷杂寡核苷酸的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱测定

以芥子酸（sinapinicacid）为基质，对异核苷杂寡核苷酸（3－（R）－IsodT）13·dT和（3－（S）－IsodT）13·dT进行了基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱测定，准确地测得分子量，合成的寡核苷酸得以鉴定。

寡聚脱氧核苷酸d(G-C)_3的激光喇曼谱及其分析

用改进的固相磷酰三酯法合成了oligo-d(G-C)_3。以氩离子激光为激发光源,波长488nm.,在室温条件下,分别测定了纯化后的oligo-d(G-C)_3和其组分单体5’-dGMP和5’-dCMP的激光喇曼谱。观察到被测定的物质在300-2500cm^(-1)频率区间,各自都有其特征的谱形和喇曼峰。5’-dGMP和5’-dCMP谱中大多数特征峰在寡聚体的谱中消失,而在oligo-d(G-C)_3谱中出现了几处新的喇曼峰。经查证,峰832,851和899cm^(-1)系糖-磷酸主链的特征喇曼峰,另外几处峰与DNA的构象有关。实验结果表明oligo-d(G-C)_3在水溶液中(室温)主要以B-构象存在。

一种原位杂交中^(35)S标记寡核苷酸DNA探针纯化的改进方法

一种原位杂交中３５Ｓ标记寡核苷酸ＤＮＡ探针纯化的改进方法应用寡核苷酸ＤＮＡ探针的原位杂交分析为分析活性基因空间分布提供了一种行之有效的方法。然而，背景和低敏感性等问题限制了它的广泛应用。比较了许多方法纯化的标记寡核苷酸ＤＮＡ探针，结果显示寡脱氧胸苷酸...

高效毛细管电泳-安培检测研究核苷酸水解反应

High performance capillary electrophoresis with amperometric detection was applied to the study on hydrolysis of adenosine monophosphate(AMP) in this article. Under the optimal conditions of electrophoresis(CTAB 0.2 mmol/L+PBS 50 mmol/L, pH=8.2), the factors affecting the hydrolysis of AMP and mechanism of the hydrolysis were investigated. The results showed that the analytical method introduced was fast, convenient and efficient. [WT5HZ]

激光引发DNA及多聚核苷酸与SO_4^-作用的闪光光谱研究

运用２４８ｎｍ激光光解瞬态吸收光谱研究了ＳＯ４·－与ＤＮＡ及其核苷酸和多聚核苷酸ｐｏｌｙ［Ｇ］、ｐｏｌｙ［Ａ］和ｐｏｌｙ［Ｃ］的相互作用，观察了各体系的作用过程，结果表明，ｐｏｌｙ［Ｇ］、ｐｏｌｙ［Ａ］与ＳＯ４·－发生单电子氧化反应生成嘌呤端基自由基；ｄＣＭＰ与ＳＯ４·－单电子氧化生成阳离子自由基，随后与水反应生成５－羟基－６Ｃ自由基；而ｐｏｌｙ［Ｃ］，ＳＯ４·－先在碱基上加成，生成的加成自由基再从核糖上抽氢生成Ｃ２’－糖自由基；ＤＮＡ与ＳＯ４·－作用生成的主要瞬态产物是鸟嘌呤端基自由基。