锁核酸研究进展

锁核酸 (lockednucleicacid ,LNA)是一种新型的寡核酸衍生物 ,结构中 β D 呋喃核糖的 2’ O ,4’ C位通过缩水作用形成环形的氧亚甲基桥、硫亚甲基桥或胺亚甲基桥 ,呋喃糖的结构锁定在C3’内型的N构型 ,形成了刚性的缩合结构。LNA作为一种新的反义核酸 ,具有与DNA/RNA强大的杂交亲和力、反义活性、抗核酸酶能力、水溶性好及体内无毒性等优点。LNA在基因诊断和基因治疗上有很多优势 ,如 :单链核酸的多态性基因分型、LNA寡聚体具有高效抑制端粒酶活性及LNA修饰的DNA核酶 (LNAzymes)高效清除高级结构的RNA等 。

N^4-烷基-5-甲基-2′-脱氧胞苷的合成

3′,5′- O-二苯甲酰胸苷在三氯氧磷存在的条件下与 1,2 ,4-三唑缩合可得到 1- (3′,5′- O-二苯甲酰 - β- D-呋喃核糖 ) - 4- (1,2 ,4-三唑 - 1-基 ) - 5 -甲基 -嘧啶 - 2 - (1H) -酮 ,再用不同的胺取代核苷 C4上的三唑基团可制备一系列全新的N4-烷基取代的 5 -甲基胞苷。方法简便 ,收率高。

中国畲族人群SDF1基因多态性研究

目的 :调查HIV - 1感染相关等位基因SDF - 3’A在我国畲族人群中的频率和多态性分布。方法 :随机采集血样 1 86份 ,提取基因组DNA。经PCR -RFLP分析 ,计算基因突变频率 ;并对群体分布和性别分布进行统计分析。结果 :SDF - 3’A频率为 1 9.6 %,群体分布符合Hardy -Weinberg平衡 ,性别之间无差异。结论 :畲族人的SDF- 3’A基因突变频率接近于新疆维吾尔族人。由于这种突变可延缓艾滋病的发病进程 ,这一发现对于畲族人的艾滋病防治具有积极意义。

针对汉坦病毒S基因反义寡核苷酸抗病毒效应的研究

目的:研究反义寡核苷酸(asON)体外抗汉坦病毒(HV)的效应。方法:设计合成了分别针对HVS基因片段5'端手柄状结构区的asON1和针对mRNA翻译起始区的asON2,采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测asON作用后HV感染细胞培养上清中HV核蛋白(NP)的表达水平,免疫荧光试验(IFA)检测asON作用后感染细胞膜上NP的表达水平,空斑减少中和试验(PRNT)测定asON作用和HV感染细胞培养上清液中病毒滴度。结果:asON可抑制NP的合成以及病毒活性。结论:asON具有一定的抗HV作用,有可能作为一种治疗人HV感染的新途径。

一种测定三磷酸腺苷二钠的新荧光光度法

该文利用荧光光谱和吸收光谱研究了三磷酸腺苷二钠（ATP）与依诺沙星（ENX）和Tb^3＋的相互作用。依诺沙星与Tb^3＋形成二元络合物发射出位于545nm处的特征荧光，加入三磷酸腺苷二钠（ATP）后，体系的荧光强度显著增强，且增强的荧光强度与ATP的加入量成正比，据此建立了荧光分光光度法测量ATP的方法。实验测得，ATP的线性范围是2．00～20．0μmol·L^-1检出限为6．83×10^-8mol·L^-1。研究了共存物质的影响和Tb^3＋ -依诺沙星与三磷酸腺苷二钠的相互作用机理。该法成功地用于样品中ATP的测定。

低温胁迫对叶菜类观赏蔬菜抗寒性生理指标的影响

本试验以4种叶菜类蔬菜为试材,通过低温处理来研究在不同低温下4种叶菜类蔬菜的相对电导率、半致死温度、可溶性蛋白等7个生理指标的变化。结果表明:4种叶菜类蔬菜的相对电导率随温度的降低而逐渐升高,半致死温度的排序是:一点红苋菜>紫叶生菜>大叶木耳菜>紫冠1号小白菜。而可溶性蛋白、MDA含量以及保护酶系统变化规律不明显。

以铕离子为荧光探针测定痕量环丙沙星

本文研究了环丙沙星(CIP)同铕离子形成的配合物体系的荧光光谱特性及实验条件对荧光强度的影响。在pH值为8.02的Tris-HCl条件下,Eu3+和环丙沙星(CIP)能形成配合物发生分子内能量转移,发射铕离子的特征荧光,其最大激发和发射波长为265 nm和615 nm。加入阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)后,可极大地增强体系的荧光强度,据此建立了一种以铕离子为荧光探针分析痕量环丙沙星含量的新方法,方法的线性范围为2.46×10-7mol·dm-3～9.84×10-5mol·dm-3,相关系数r=0.9965,检出限为1.92×10-7mol·dm-3。该法用于环丙沙星片剂和针剂的测定,回收率在98%～103%之间,结果令人满意。

烷基修饰寡聚脱氧核苷酸磷酸残基的化学合成及稳定性研究

分别采用格氏试剂和三氯化磷三步取代法合成了4个新的烷基修饰磷酸残基的亚磷酸酰胺单体,其结构经1HNMR和31PNMR表征.利用这些单体合成模型序列5′-dTTTxTT-3′,考察了单体及寡聚核苷酸序列在DNA/RNA合成条件下的稳定性,提出了固相合成含有烷基修饰磷酸残基的寡聚核苷酸序列裂解及脱保护条件.

miR-223敲减慢病毒的构建

目的构建mi R-223敲减慢病毒,为进一步研究mi R-223的功能提供工具。方法采用Invitrogen公司mi R-RNAi在线设计工具,根据mi R-223成熟体序列设计了一对互补寡核苷酸片段,退火产物连接至pc DNA6.2-GW/Em GFP-mi R载体,经酶切连入p CDH-CMV-MCS-EF1-cop GFP载体,构建了mi R-223敲减慢病毒质粒,利用293T细胞将其包装成病毒,并感染ST2细胞,观察感染效率并用q RT-PCR检测mi R-223成熟体表达。结果酶切鉴定及测序结果显示成功构建了mi R-223敲减慢病毒载体,mi R-223敲减慢病毒包装并感染靶细胞,表达绿色GFP荧光蛋白的细胞约占细胞总数的80%-90%,病毒滴度为1×10^9PFU/m L,感染效率达90%。感染mi R-223敲减慢病毒的细胞mi R-223表达量（0.31±0.03）低于阴性对照（1.00±0.09）,为阴性对照的31%,差异有统计学意义（n=3,t=15.091,P〈0.05）。结论成功构建了mi R-223敲减慢病毒,为进一步研究mi R-223的功能准备了条件。

聚甲苯胺蓝-(多壁碳纳米管/PDDA)_n杂化膜修饰印刷电极的制备及其对NADH的测定

利用静电层层组装的方式在印刷电极表面制备了（多壁碳纳米管/邻苯二甲酸二乙二醇二丙烯酸酯（PDDA））n多层膜,采用电位扫描电聚合法在修饰有多层膜的印刷电极表面聚合甲苯胺蓝,制备了聚甲苯胺蓝-（多壁碳纳米管/PDDA）n杂化膜修饰电极。扫描电镜实验表明,多壁碳纳米管均匀分布在杂化膜中,且多壁碳纳米管的掺杂使杂化膜表现出明显的多孔性。电化学实验表明,杂化膜具有良好的导电性且多壁碳纳米管的掺杂显著增加了聚甲苯胺蓝在电极表面的担载量,提高了检测灵敏度。在pH7.4的磷酸盐缓冲液中,杂化膜修饰电极对β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）的氧化具有良好的催化作用,与裸电极相比氧化电位降低了560 mV,灵敏度明显提高。在8.7×10-8~1.3×10-4mol/L范围内,NADH的浓度与氧化电流呈线性关系,检出限为2.8×10-8mol/L,该修饰电极可用于NADH的测定。

钇(Ⅲ)-肾上腺素络合物荧光特性的研究与应用

研究了Y^(3+)与肾上腺素(E)形成配合物体系的荧光光谱特性及实验条件对荧光强度的影响。在pH为5.0的HMA-HCl缓冲溶液中,Y^(3+)和肾上腺素相互作用,使肾上腺素在320 nm处的特征荧光显著增强,稀土共发光离子Dy^(3+)的加入使得荧光强度进一步加强,最大激发和发射波长分别为290和320 nm。据此建立了分析痕量肾上腺素含量的新的荧光光度法,方法的线性范围为4.00×10-6~3.26×10^(-4)mol·L^(-1),肾上腺素在该浓度范围内与体系的荧光强度有良好的线性关系,相关系数为0.999,检出限为3.05×10^(-7)mol·L^(-1)(S/N=3)。可用于盐酸肾上腺素针剂、血清和猪饲料中肾上腺素含量的检测。

以钇离子为荧光探针测定痕量环丙沙星

实验发现环丙沙星能与稀土钇离子形成二元配合物,使环丙沙星特征荧光显著增强。研究环丙沙星与钇离子的络合发光反应,建立了一种以钇离子为荧光探针分析痕量环丙沙星含量的新方法,在最大激发和发射波长为274 nm和429 nm处测定荧光强度,环丙沙星浓度在1.23×10-8mol.dm-3～1.23×10-6mol.dm-3范围内与体系的荧光强度具有良好的线性关系,检出限为5.00×10-10mol.dm-3(S/N=3)。该法用于盐酸环丙沙星药片、鸡饲料以及鸡蛋中环丙沙星含量的检测,结果令人满意。