间羟苯甲酸4－羟化酶纯化及部分性质研究

经超声破碎、硫酸铵分级沉淀、凝胶过滤、磷酸钙胶层析和离子交换层析等步骤，从Ｃｏｍａｍｏｎａｓｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｉ菌株中获得了ＳＤＳ－ＰＡＧＥ单一条带，相对分子质量为６２×１０３的间羟苯甲酸４－羟化酶比活提高２１倍，产率为３０％此酶为ＦＡＤ加单氧酶，催化间羟苯甲酸转变为３。

兔乳酸脱氢酶C_4的分离纯化及动力学研究

目的：建立兔乳酸脱氢酶Ｃ４（ＬＤＨ－Ｃ４）分离纯化的新方法，研究该酶的动力学特性。方法：采用ＢｌｕｅＤｅｘｔｒａｎ和Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ交联制成ＢｌｕｅＤｅｘｔｒａｎ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ染料配体亲和层析柱，结合ＱＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ５０离子交换层析分离提纯兔ＬＤＨ－Ｃ４，以作图法测定该酶动力学数据。结果：纯化的ＬＤＨ－Ｃ４经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及琼脂糖凝胶电泳证明为单一组分，相对分子质量１３６０００。纯化得率４５．５％，纯化倍数３１６倍。兔ＬＤＨ－Ｃ４动力学测定，其对底物乳酸、丙酮酸的Ｋｍ值分别为１．１１ｍｍｏｌ／Ｌ、０．２３ｍｍｏｌ／Ｌ；产物乳酸、丙酮酸对其均有非竞争性抑制作用，Ｋｉ值分别为９．１１ｍｍｏｌ／Ｌ、０．０２７ｍｍｏｌ／Ｌ。结论：本法是一种简便、快速、高效的分离纯化免ＬＤＨ－Ｃ４新方法；动力学性质表明该酶对丙酮酸的亲和力大于乳酸，且易受产物丙酮酸的抑制。