超氧化物歧化酶模型化合物的合成,表征和活性测定

合成了二(2-苯并咪唑亚甲基)胺(N3)及其四种全新的过渡金属的双核配合物。通过元素分析、红外光谱和紫外光谱对配体及配合物进行了结构表征,利用邻苯三酚自氧化法测定了四种模拟化合物催化超氧阴离子自由基歧化反应的活性。

漆树漆酶两种同工酶分离纯化与特性研究

应用柱层析和HPLC方法从漆树漆液中分离提纯漆酶的两种同工酶L1和L2 .两者均为低温酶 ,最适的温度分别为 2 0℃和 13℃ ,pH值分别为 6.7和 7.2 ,等电点分别为 8.6和 9.1.通过十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,测得它们的分子量分别为 1.2× 10 5和 1.0 5× 10 5.两种酶均不能催化氧化间氨基苯甲酸 ,对 3

鉴别超氧化物歧化酶类型的定位染色法

介绍一种鉴别ＳＯＤ类型的方法─—聚丙烯酰胺凝胶电泳的定位染色法．由于不同类型的ＳＯＤ对抑制剂的表现各异，电泳后的凝胶经不同的抑制剂处理，染色，结果展示在凝胶上，ＣｕＺｎ－ＳＯＤ酶带在Ｈ２Ｏ２或ＣＮ－的作用下消失，Ｍｎ－ＳＯＤ在ＣＨＣｌ３ＣＨ３ＯＨ作用下消失，Ｆｅ－ＳＯＤ在Ｈ２Ｏ２或．ＣＨＣｌ３－ＣＨ３ＣＨ２ＯＨ作用下失活，从酶带消失或存活的情况。

T7 启动子作用下人尿激酶原 cDNA 在大肠杆菌中的高效表达及分离纯化

化学合成的人尿激酶原ｃＤＮＡ克隆在表达质粒ｐＥＴ１１ｄ中，在Ｔ７启动子的作用下，经０１ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ诱导，在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ中获得表达。其表达量占菌体总蛋白的１５％，表达产物以无活性的包涵体形式存在。经体外变复性，Ｚｎ２＋选择性沉淀，抗体亲和柱层析，及Ｂｅｎｚａｍｉｄｉｎｅ亲和吸附，所表达的人尿激酶原被纯化为单一条带，其比活约１１００００ＩＵ／ｍｇ。

聚乙二醇修饰超氧化物歧化酶的研究

以氰尿酰氯活化单甲氧基聚乙二醇 (MPEG Mr50 0 0 )对猪血 Cu,Zn- SOD进行修饰 ,制得 MPEG2 - SOD。产物的酶活性保持 82 .0 % ,其半衰期比修饰前延长至 7.6倍 ,在动物脑中的SOD活性较高。修饰 SOD抗炎活性增强 ,抗原性降低 。

两种简便又较为准确检测SOD酶活性的方法

由于SOD的作用底物极不稳定，至今还未建立统一的检测SOD酶活性的方法，该文介绍了两种既简便又较为准确检测样品SOD酶活性的方法，采用这两种方法可较为准确地测定出不同样品的SOD含量及酶活性。

仙人掌超氧化物歧化酶的分离纯化及鉴定

介绍了分离纯化仙人掌SOD的工艺方法。鉴定用该法提取的SOD为Cu ,Zn -SOD。

鲨鱼肝超氧化物歧化酶的纯化与部分性质研究

目的：从鲨鱼肝中分离提纯超氧化物歧化酶（ＳＯＤ），并对其部分性质进行研究。方法：采用７２℃热处理，硫酸铵分级分离和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱层析工艺。结果：鲨鱼肝ＳＯＤ的亚基分子量为１６．０ｋＤ；比活为５５４４Ｕ·ｍｇ－１ｐｒ；提纯倍数为１９１．２；最大紫外吸收波长为２５８ｎｍ；凝胶电泳呈２带；对热稳定；ＫＣＮ和Ｈ２Ｏ２均可抑制该酶的活性，而有机溶剂对酶活性无明显影响。结论：根据聚丙烯酰胺凝胶电泳、比活、相对分子量及紫外吸收光谱等性质的测定。

从微生物细胞提取ADH的探讨

讨论了从醋酸杆菌发酵中提取ADH（乙醇脱氢酶）以及从酵母细胞中提取ADH的可能性．在一定的pH及酶解时间内，醋酸杆菌细胞内ADH活性很低，而酵母细胞内ADH活性相对较高．

壳聚糖涂层亲和层析在超氧化物歧化酶纯化中的应用

A new adsorbent for immobilized metal ion affinity chromatography (IMAC) was stud-ied. The preparation of an adsorbent with coated chitosan on silica beads Was made. After being cross-linked by dechloride diglycidyl ether, the chitosan coated adsorbent had good chemical stability andhigh mechanic property. When pH> 3. 8, the Cu2+ was adsorbed easily on the chitosan coated adsor-bent with adorbed capacity of 18 mg Cu2+/g chitosan or 0. 91 mg Cu2+ /g beads. The new adsorbentcouId be used for purification of superoxide dismutase. The recovery of SOD was 89% with a purifi-cation factor of 20.

韭菜叶绿体超氧化物歧化酶纯化及性质研究

经硫酸铵沉淀、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００凝胶过滤和ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ层析３个步骤将韭菜叶绿体ＳＯＤ纯化到均一程度。鉴定该酶是Ｃｕ．Ｚｎ－ＳＯＤ，测得其分子量约３２０００Ｄ，亚基分子量约为１６２００Ｄ，Ｎ－末端氨基酸为Ａｌａ。该酶在紫外与可见光区的吸收峰分别在２６５ｎｍ和６７５ｎｍ。实验表明该酶热稳定性良好。

固氮酶单、双钼铁钼辅基的制备和特性

固氮酶单、双钼铁钼辅基的制备与N-甲基甲酰胺碱度有关．质子激发X射线发射光谱和电感耦合等离子体发射光谱分析技术测定单、双钼铁钼辅基的钼铁流元素组成比值均为1∶6∶6．在紫外可见光谱区内，单、双钼铁钼辅基均无特征吸收峰，不含高柠檬酸盐。

重组尿激酶原的纯化和性质研究

ＣＨＯ工程细胞１１Ｇ持续表达的ｐｒｏ－ＵＫ分泌在细胞培养液的上清中，培养液上清经过微孔玻璃（ＭＰＧ）吸附色谱，羧甲基阳离子交换色谱，高压液相凝胶色谱三步纯化，纯化倍数可达７００倍以上，总回收率为４６％．再经过Ｂｅｎｚａｍｉｄｉｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ亲和层析去掉少量的双链尿激酶，得到纯化尿激酶原．终产物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ银染分析，纯度达９０％以上，分子量为５２ｋｕ，其比活性为５１２２０Ｕ／ｍｇ．抗体中和、二异丙基氟磷酸（ＤＦＰ）抑制等实验证明重组ｐｒｏ－ＵＫ的性质和天然ｐｒｏ－ＵＫ的性质相一致．

测定超氧化物歧化酶活性的一种新的极谱分析方法

报道一种测定超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性的新的极谱分析方法。在０．１２５ ｍｏｌ／ＬＮＨ３·Ｈ２Ｏ－０．７５ ｍｏｌ／Ｌ ＮＨ４ Ｃｌ－２．５％ ＮａＳＯ３－０．５％吐温－８０（ｐＨ＝ ８．８± ０．３）的介质中，ＳＯＤ在－０．５２Ｖ（νｓＳＣＥ）处产生一氧极谱催化波。ＳＯＤ在１．０ × １０３ Ｕ／Ｌ～４．０ ×１０３ Ｕ／Ｌ的活性含量范围内与催化电流呈线性关系，检出限为８．０×１０２ Ｕ／Ｌ。用ＳＯＤ标准溶液进行标准加入回收测定，平均回收率为９９．６％，ＲＳＤ为０．３％。本方法具有灵敏度高、重现性好、试剂易得、使用安全等特点。

基于可见吸收信号的乳酸脱氢酶光纤传感器

报道了一种测定乳酸脱氢酶活力的基于可见吸收信号的光纤生物传感器．在该传感体系中，通过辅酶I的氧化还原对（NAD+／NADH）将乳酸脱氢酶和心肌黄酶催化的两个脱氧过程予以耦合．第一个脱氢过程对分析对象进行化学识别，第二个脱氢过程引起可见吸收信号的变化．该传感器对0～400U／L的乳酸脱氢酶有线性响应关系，检测下限为48U／L．该传感器已用于人体血清中乳酸脱氢酶活力的测定．

硬脂酸修饰超氧化物歧化酶的制备及其性质研究

报道了一种修饰ＳＯＤ的方法。所得硬脂酸修饰ＳＯＤ比活力为每毫克蛋白１００００单位，经鉴定已达均一程度。测得其分子量为３５０００．修饰ＳＯＤ和天然ＳＯＤ在紫外光区的最大吸收均在２６５ｎｍ。修饰ＳＯＤ对温度、ｐＨ、蛋白酶水解的稳定性比天然ＳＯＤ增强，且免疫原性消除。在低浓度的某些有机介质中活性比在水中高。

亲和层析法分离胆固醇氧化酶

利用胆固醇氧化酶和底物胆固醇之间的亲和力 ,以胆固醇为吸附剂构成底物亲和层析柱。发酵液经盐析、透析后直接进行亲和层析。研究了洗脱液A和B的流速、洗脱液B中表面活性剂的浓度 ,确定了适合的层析条件 ,使比酶活从 0 4 5U/mg提高到 15 5U/mg。

糖基化3－磷酸甘油醛脱氢酶的分离纯化及糖基代位点的探讨

应用糖基化蛋白亲和层析技术对兔肌及人红细胞的３－磷酸甘油醛脱氢酶的分离分析表明，兔肌非糖基化ＧＡＰＤＨ的比活为１８０—２００单位，而糖基化ｇＧＡＰＤＨ的为４０—５０单位，并占该酶蛋白总量的４０％。人类红细胞糖基化ｇＧＡＰＤＨ的活力占其总活力的５５％左右。以上结果表明：哺乳动物体内存在糖基化３－磷酸甘油醛脱氢酶。由于（１）糖基化明显影响ＧＡＰＤＨ的活力；（２）糖基化酶活性部位的巯基（Ｃｙｓ－１４９）空间位置发生了改变；（３）糖基化影响活性部位的空间构象及（４）ＯＰＴ对糖基化及非糖基化酶的修饰无论在动力学上还是在ＫＩ淬灭时都有明显差异，因此，糖基化的位点可能与赖氨酸残基有关，并且接近或位于酶的活性部位。

抗坏血酸为阻断剂肾上腺素法测定超氧化物歧化酶活力

本文利用在水溶液中既可作氧化剂又可作还原剂的特点，以抗坏血酸为阻断剂改进了经典肾上腺素法测定ＳＯＤ活力的方法。实验证明，当在反应体系中加入ｐＨ１０．２的缓冲溶液，１ｍｍｏｌ／Ｌ的肾上腺素，滴加数滴抗坏血酸（约１０００μｇ），即可阻断自氧化反应的进行，此时体系于３２０ｎｍ处的吸光度值在４０ｍｉｎ内保持恒定。

极谱氧传感仪快速测定超氧化物歧化酶的实验研究

超氧化物歧化酶 (简称SOD)是机体内超氧阴离子自由基 (O2 ·- )的清除剂 ,广泛存在于生物界 ,其检测方法较多。为探索一种快速检测SOD的新方法 ,我们自行设计、加工、组装成了极谱氧传感器SOD检测仪 ,并建立了相应的检测方法。用该检测仪测定SOD ,具有快速、简便、经济等优点。