β4GalT1-CD200R1复合物在小胶质细胞炎性活化中的作用

目的:探讨β1,4-半乳糖基转移酶-1(β4GalT1)和CD200R1相互作用对小胶质细胞炎性活化的调节作用及其分子机制。方法:免疫共沉淀技术结合Western Blot法研究β4GalT1和CD200R1在体内外的相互作用;细胞免疫荧光技术观察两者定位。构建小胶质细胞-神经元共培养体系,阻断CD200-CD200R1结合,RT-PCR技术和ELISA试剂盒检测BV2细胞炎性因子i NOS、CD86、IL-1β、TNF-α的表达变化,LDH试剂盒检测神经元损伤情况。结果:β4GalT1和CD200R1有相互作用且存在共定位。CD200-CD200R1阻断剂增强LPS诱导的小胶质细胞炎性活化和神经元损伤,CD200R144号位突变体增强炎症因子释放和神经元损伤。CD200R144号位调节CD200-CD200R1结合,该突变体影响CD200-CD200R1的正常结合。结论:β4GalT1通过调节CD200R1第44号位的N-糖基化修饰,进而调节小胶质细胞的炎性活化及其介导的神经元损伤。

植物UDP-糖基转移酶生化特性和功能研究进展

UDP-糖基转移酶催化糖基转移反应,将糖基从活化的供体分子转移到受体分子上,从而调节受体分子在细胞和机体内的活性,如生物活性、溶解性和转运性。糖苷化是植物次生代谢较为普遍的修饰反应,在调节植物体内激素平衡、解除外源毒素毒性以及次生代谢产物的合成和贮存等方面发挥重要功能。本文就与植物次生代谢产物、植物激素及生物异源物质糖苷化相关的UDP-糖基转移酶的生化特性和功能研究进展进行综述,以期为本领域相关研究提供一定的参考。

β-半乳糖苷酶的应用研究进展

论述了采用生物技术生产半乳糖苷酶以及此酶在生物技术各个方面的应用。

利用重组大肠杆菌生产α-环糊精葡萄糖基转移酶

将来源于软化类芽孢杆菌(Paenibacillus macerans)的α-环糊精葡萄糖基转移酶(α-CGT)基因插入含pelB信号肽的质粒pET-20b(+)中,构建了表达载体pET-20b(+)/cgt,并将其转化表达宿主E.coliBL21(DE3)。对重组菌E.coliBL21/pET-cgt进行摇瓶发酵条件的优化,确定了其胞外表达α-CGT酶的最适条件:葡萄糖8 g/L,乳糖0.5 g/L,蛋白胨12 g/L,酵母膏24 g/L,K2HPO472 mmol/L,KH2PO417 mmol/L,CaC l22.5 mmol/L;初始pH为7.0,诱导温度为25℃。在该条件下培养90 h后最终α-CGT酶的胞外比活达到22.1 U/mL,与来源菌P.macerans所产天然酶比活相比提高了42倍,实现了α-CGT酶的高效生产。将基因工程菌在上述条件下于3 L发酵罐中发酵,90 h后胞外酶比活达到22.6 U/mL,证实了工业化放大的可能性。

中国传统发酵豆豉水提物的α-葡萄糖苷酶抑制活性的体外实验研究

收集全国不同地区传统发酵生产的豆豉样品,综合评价其水提物对小鼠肠道内α-葡萄糖苷酶抑制活性,分析豆豉样品中的营养功能成分,揭示不同地区生产的豆豉样品所具有降糖活性的差异。结果表明:中国传统发酵豆豉水提取物具有一定程度的α-葡萄糖苷酶的抑制活性,其中三种豆豉样品(万年红豆豉、美味豆豉、浏阳球哥豆豉)水提物的α-葡萄糖苷酶抑制活性显著高于其他样品(p<0.05)。此外,对豆豉样品中各种营养活性成分的分析结果显示,豆豉样品水提物的α-葡萄糖苷酶抑制活性与样品中糖类物质成分含量的多少密切相关,表明豆豉中存在的α-葡萄糖苷酶抑制剂可能是一种糖类物质或者具有糖链结构的成分。全国各地不同产地、来源豆豉的降糖活性的差异显示,豆豉中降血糖活性因子的产生与其发酵条件、微生物、辅料等因素均可能相关。

α淀粉酶家族的新成员——多功能淀粉酶

多功能淀粉酶是α淀粉酶家族(α-amylase family)的新一类成员,包括新普鲁兰酶、麦芽糖淀粉酶和环麦芽糊精酶,它们在结构上具有α淀粉酶家族共有的4个高度保守的区域,但在功能上又兼有糖苷水解酶和糖基转移酶的催化活性,而不同的多功能淀粉酶虽然在结构与功能上具有一定的相似性,但不同来源的酶在底物特异性和水解、转移糖苷键的特异性等方面存在着差异.多功能淀粉酶大多存在单体与二聚体或多聚体之间的平衡,其多聚化与N结构域和环境中的离子强度调控有关.实验证明,通过突变可以改变多功能淀粉酶的催化特性,甚至仅1个氨基酸的替换就能实现功能改变.多功能淀粉酶的结构保守性和催化多样性具有重要的研究价值及应用前景.

金属离子对鲍鱼碱性磷酸酶活力的影响

碱性磷酸酶(ALP,EC3.1.3.1)是一种金属酶,其结构的维持和酶活性的表现均需金属离子.本文研究了几种金属离子分别对鲍鱼ALP活力的影响.结果表明,Li+,Na+和K+等正一价碱金属离子对酶活力没有任何效应;碱土金属离子Mg2+,Ca2+和Ba2+对酶有激活作用,其激活程度依次为:Mg2+>Ca2+>Ba2+,而且Mg2+在5.0mmol/L时可以使酶活力提高267%;在过渡金属离子中,Zn2+,Mn2+,Co2+和Cu2+对酶的效应不同,Zn2+、Cu2+为抑制作用,而Co2+、Mn2+表现为激活作用;重金属离子Hg2+、Pb2+、Ag+和Cd2+对酶有抑制作用,其中Hg2+的抑制效应最强,1.0mmol/LHg2+可使酶活力抑制94%.研究Mn2+和Cu2+的抑制类型表明,Mn2+为混合型激活作用,而Cu2+对酶的抑制类型为非竞争性抑制作用,其抑制常数(KI)为0.316mmol/L.

Arthrobacter sp.No.3细菌酶转化三醇类人参皂苷Rg_1生成Rh_1的反应条件

为了提高Arthrobactersp.No.3 GS 0202新细菌所产人参皂苷糖苷酶水解人参三醇类皂苷Rg1生成人参三醇类皂苷Rh1的能力,采用薄层层析法和高效液相色谱法,对该菌的发酵条件及所产糖苷酶的反应条件进行了研究。结果表明,在30℃发酵条件下,人参皂苷酶的诱导物人参茎叶总皂苷存在下,该细菌产生较好。其粗酶的最佳反应条件为人参皂苷Rg1质量浓度0.1 mg/mL,30℃下恒温反应24 h。该菌株所产酶液与人参三醇类皂苷Rg1反应后,检测发现该酶液可将人参三醇类皂苷Rg1转化为人参三醇类皂苷Rh1。高效液相色谱法检测,该酶在最佳反应条件下,能够将20%的Rg1转化为Rh1。

棉花不同品种叶片和纤维中蔗糖磷酸合成酶活性变化及其与糖含量的关系

利用山农棕02、丰抗6号、中棉453个品种在大田栽培的条件下,研究了叶片和纤维中蔗糖磷酸合成酶活性的变化及与糖含量的关系。结果表明,在3个品种的叶片和纤维中,蔗糖磷酸合成酶活性均出现双峰,在开花当天最高,花后18d次之,整体呈下降趋势;与此同时可溶性总糖和蔗糖的含量变化以及光合速率的变化也成相似的变化。3个品种中,丰抗6号蔗糖磷酸合成酶活性和含糖量最高,中棉45次之,山农棕02最低。3个品种的相应观测指标之间均呈极显著差异。

新细菌转化生产人参皂苷Rg_3的条件研究

研究了新筛选的细菌Phycicoccus sp.BXN5-13转化人参二醇类皂苷生成Rd和Rg3皂苷酶反应条件。结果表明,该细菌产生的人参皂苷酶为胞内酶,最佳产酶发酵条件为在含胰蛋白胨10 g/L、酵母膏5 g/L、NaCl 10 g/L的培养基中加入产酶诱导物,即人参茎叶总皂苷,在35℃培养72 h。其粗酶反应最佳条件:底物质量浓度为1 mg/mL,最适pH为6,在45℃反应24 h。其发酵液与人参二醇类皂苷反应后,用薄层层析法与高效液相色谱法检测结果;其酶液将Rb1等人参二醇类皂苷,转化为人参皂苷Rd,将Rd进一步转化为人参皂苷Rg3;转化率为44%。

钙调神经磷酸酶的研究进展

钙调神经磷酸酶 (CaN)是一种受Ca2 + /钙调素调节的丝 /苏氨酸蛋白磷酸酶 ,广泛存在于哺乳动物的组织细胞中 ,作为Ca2 + 信号下游的一种效应分子 ,参与多种细胞功能的调节 .在T细胞活化的信号传导中起到调节枢纽的作用 ;在神经递质的释放、突触可塑性方面亦有重要的调节作用 .新近的研究表明 ,CaN在心肌肥厚的发生发展中起到中心作用 .对CaN的分子结构、酶学特性、组织分布、信号传导及生物学功能方面的研究进展进行了介绍 .

核苷磷酸化酶的产酶条件优化的研究

以鸟苷和 5 氟尿嘧啶为底物 ,乙酰短杆菌菌体为酶源酶法合成 5 氟尿苷。采用酵母浸膏培养基(酵母浸膏 4.0 % ,葡萄糖 0 .4% ,NaCl 0 .3 % ,pH7.0 ) ,较高的溶氧量 ,同时添加 0 .6 %的豆油 ,培养 12h ,产酶量可提高 30 %。

青霉T24-2和灰绿曲霉EU7-22降解甘蔗渣产糖的研究

青霉T24-2(Penicilliumsp.T24-2)和灰绿曲霉EU7-22(Aspergillus glaucusEU7-22)能利用甘蔗渣进行固态发酵产纤维素酶.通过对青霉和灰绿曲霉混合培养特性的研究,确定两个菌株不适合进行混合培养产纤维素酶.分别对两个菌株产纤维素酶的条件进行优化,单独用青霉曲酶时糖化率为31.4%,单独用灰绿曲霉曲酶时糖化率为34.1%.对其曲酶混合糖化进行研究,当两种曲酶以1∶1比例进行混合糖化时,糖化率可达51.3%.以青霉T24-2和灰绿曲霉EU7-22的曲霉混合糖化的研究国内外还未见报道,研究结果大大提高了糖化率.

应用细胞透性化技术快速提取氧化葡萄糖杆菌胞内右旋糖酐糊精酶

将细胞透性化技术应用到右旋糖酐酶的提取检测过程中,根据单因素实验和正交试验设计确定了从氧化葡萄糖杆菌（Gluconobacter oxydans）细胞中提取胞内右旋糖酐糊精酶（DDase）的最佳方法：甘氨酸（Gly）质量分数15%,Triton X-100体积分数1%,菌悬液OD600为0.5~6.0,pH为6.81,冰浴处理时间1 h,透性化试剂的提取效率可达到酶活最大值的90%以上。与超声波细胞破碎法相比,该方法条件温和,酶的释放率较高并易于大量试样的平行实验操作。

巯基化合物和磷酸盐及其类似物对鲍鱼碱性磷酸酶的抑制作用

研究二巯基苏糖醇(DTT)、巯基乙醇(ME)等巯基化合物及磷酸盐(Na2HPO4)、砷酸盐(Na2HAsO4)、酸盐(Na3WO4)和钼酸盐(Na3MoO4)对鲍鱼碱性磷酸酶(ALP)活力的影响.结果表明:这些效应物对该酶都具有明显的抑制作用,而且它们的抑制作用强度依次为:DTT>ME;Na2HPO4>Na3WO4>Na2HAsO4>Na3MoO4.进一步研究这些效应物对该酶的抑制作用机理,表明:巯基化合(DTT、ME)均非竞争性抑制;Na2HPO4、Na2HAsO4和Na2HWO4表现为竞争性抑制;本文测定了它们的抑制常数并加于比较.

PP1γ2对昆明小鼠精子成熟和运动性的调控作用

【目的】PP1γ2是一种特异表达于动物睾丸和精子的蛋白磷酸酶,为精子发生、运动性获得与调控所必需的关键酶,本文对PP1γ2与昆明小鼠精子成熟和运动性调控进行研究。【方法】通过Western-blot技术,分析昆明小鼠不同条件下附睾头和附睾尾精子中磷酸化和非磷酸化PP1γ2的蛋白质表达量,探讨磷酸酶抑制剂okadaic acid (OA)和cyliculin A (CA)对附睾头和附睾尾精子运动度的影响。【结果】附睾尾精子中磷酸化PP1γ2的蛋白水平远远高于附睾头精子的(P<0.05);db-cAMP、IBMX和Ca^(2+)不改变磷酸化PP1γ2的蛋白水平;OA和CA能显著提高附睾头和附睾尾磷酸化PP1γ2的表达水平,且能显著提高精子(尤其是附睾头的精子)运动度。【结论】PP1γ2通过磷酸化和去磷酸化作用,其酶活性发生变化,从而对昆明小鼠附睾精子成熟和运动性进行调控,即在附睾头精子中PP1γ2酶活性较高,精子运动度较低;在附睾尾精子中PP1γ2酶活性较低,精子运动度得到显著提高。

过氧乙酸-TAE缓冲液对硫修饰DNA切割条件的优化

用乙酸和过氧化氢反应生成的过氧乙酸(PAA)辅配三羟甲基氨基甲烷-乙酸-EDTA(TAE,pH7.5)对硫修饰DNA的切割条件进行了优化.用6 mmol/L的PAA-TAE处理硫修饰基因组和质粒DNA,30 min可使降解程度达到最大饱和.用60 mmol/L的PAA-TAE经20 h处理低熔点琼脂糖包埋的菌丝体DNA,得到最佳切割效果.用PAA-TAE验证了一株在脉冲场凝胶电泳过程中基因组DNA降解的Salmonella菌株的Dnd表型;同时验证其质粒激活降解与已经验证的Streptomyces lividans质粒激活降解一样为位点专化性硫修饰.

荧光法快速检测乳品中碱性磷酸酶含量

以4-甲基伞形酮磷酸酯(4-MUP)为底物,通过荧光法检测乳制品中碱性磷酸酶的含量,并与国标法进行比较,发现荧光法批内变异系数为2.81%,批间变异系数为4.34%,精密度与国标法相似,最低检测限为0.003 U.mL-1,优于国标法;回收率100.17%,准确性较好,且操作步骤简便、快速。

氨基酸对鲍鱼碱性磷酸酶活力的影响

选用L Ala、L Val、L Leu等15种氨基酸为效应物,研究它们对杂色鲍(Haliotisdiversicolor)碱性磷酸酶(EC.3.1.3.1)催化pNPP水解反应的影响.结果表明:上述这些氨基酸对鲍鱼碱性磷酸酶均有一定程度的抑制作用,抑制程度随着试剂浓度增大而加剧.当浓度为10.0mmol/L时,分别可以使酶活力下降:7.77%、36.75%、22.79%、39.86%、16.16%、19.33%、94.77%、20.19%、17.02%、40.15%、31.08%、17.52%、30.56%、36.77%和12.59%.尤其以L Cys对酶的抑制作用最为显著(抑制率为94.77%),其次是L Ile和L His,它们均能使酶活力下降40%;对酶抑制率在30%以上的氨基酸还有L Val、L Trp、L Phe和L Lys,其它选用的氨基酸对酶的抑制率小于25%.选择对杂色鲍ALP具有较明显的抑制作用的氨基酸L Val、L Ile、L Trp和L Cys等氨基酸为研究对象,研究它们对酶催化pNPP水解反应的抑制作用机理,并测定其抑制常数.结果表明L Cys的抑制作用为混合型效应,其KI和KIS值分别为0.042mmol/L和0.139mmol/L;而L Val、L Ile、L Trp为反竞争性,其KIS分别为9.56、8.55、8.09mmol/L.

α-淀粉酶抑制剂的特性及亚基组成分析

目的 :研究小麦α 淀粉酶抑制剂 (分子量 5 1kD)的性及亚基组成。方法 :通过SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳及测定单体分子量分析其亚基组成 ;利用酶学实验研究其特性。结果 :该抑制剂是由四个分子量相同 (分子量1 2 .7kD)的亚基组成的四聚体结构 ,对热具有稳定性 ,麦芽糖对其活性具有抑制效应及阻断效应。结论 :此项研究有助于对该抑制剂的药品开发。