DNS法测定纤维素酶活力最适条件研究

鉴于纤维素酶研究和生产中，纤维素酶活力测定和酶活力单位的表示方法很不统一的现象，本文研究和分析了３，５－二硝基水杨酸法测定羧甲基纤维素酶糖化力的实验条件，如：温度、ｐＨ、酶促反应时间、ＤＮＳ显色时间、波长等．实验表明：在５０℃，ｐＨ４．６条件下酶促反应时间５ｍｉｎ，ＤＮＳ显色５ｍｉｎ，于４９０ｎｍ处测定ＯＤ值比较适宜．

福寿螺β-葡萄糖苷酶的分离纯化及性质的初步研究

以福寿螺内脏为材料，经本实验室开发的工业生产法制备粗酶粉，进一步采用葡聚糖凝胶（ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００）和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０柱层析纯化，获得经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为单一纯的β－葡萄糖苷酶制剂．测定该酶的最适反应温度为４３℃，最适反应ｐＨ为５．１；在ｐＨ５．１，４５℃下，该酶催化水杨素水解的Ｋｍ值为３．４０ｍｍｏｌ／Ｌ，活化能为５０．６３ｋＪ／ｍｏｌ．研究几种效应物对酶活力的影响，结果表明：Ｍｎ２＋、Ｃｏ２＋对酶有激活作用，而Ｃｕ２＋、Ｈｇ２＋、Ｐｂ２＋、ＳＤＳ及脲对酶有不同程度的抑制作用，其中Ｃｕ２＋和Ｈｇ２＋对该酶的抑制作用最强。

纤维素酶测定方法的研究

本研究较全面地概括了纤维素酶的各种测定方法 ,对于酶的不同组分有不同的测定方法 。

人工合成人溶菌酶基因在大肠杆菌中表达

人工合成人溶菌酶基因在大肠杆菌中表达矫庆华钱世钧叶军郭伟（中国科学院微生物研究所，北京１０００８０）利用ＤＮＡ重组技术生产自然界不能或难以得到的多肽产品用于医药、农业、食品工业等领域，目前在生物领域已有了很大的进展。近年来，科学工作者经体外合成人溶菌...

β-葡萄糖苷酶的分离纯化和性质研究

采用分子筛和离子交换层析技术从黑曲霉Ｌ－２２菌株发酵液中分离提纯了一个由两个相同的亚基组成的β葡萄糖苷酶。研究了其酶学性质和底物专一性。

聚苯乙烯阴离子交换树脂吸附交联法固定 α-淀粉酶

用聚苯乙烯阴离子交换树脂作载体，戊二醛为交联剂，采用吸附交联法固定α＿淀粉酶，研究了固定化条件和固定化酶的性能．结果表明，最佳固定化条件为：酶浓度１２ｇ／Ｌ，吸附温度６～９℃，吸附时间２０ｈ，戊二醛浓度４％，交联时间８ｈ，交联温度６～９℃，ｐＨ７．２．固定化酶的热稳定性、贮存稳定性、ｐＨ稳定性均比自由酶提高．最适作用温度５０℃，最适作用ｐＨ７．２，且适宜作用温度及ｐＨ均较自由酶宽，批式及连续操作实验显示出较好的操作稳定性．吸附交联联用法所得固定化α＿淀粉酶稳定性较好，克服了吸附法所得固定化酶稳定性差的缺点．

木霉T6木聚糖酶制剂研究

本文研究了木霉T6(Trichodermasp .)产木聚糖酶固态发酵过程和木聚糖酶制剂制备 ,结果显示 ,固体曲培养 4d时酶活力最高 ,固体曲最适液固浸提比为 7∶1。木聚糖酶在 60— 65%硫酸铵饱和度下盐析效果最好。冷冻干燥和 4 0℃烘干酶粉得率分别为 68 3 %和 4 5 7%。酶最适反应 pH为 4 5,最适反应温度50℃ ,在不同温度下保温 1小时后的半失活温度为 4 7 7℃。

五种α-淀粉酶测活方法的比较研究

对常用的五种α─淀粉酶活力测定方法进行了比较。研究了酶的稀释倍数和反应时间等因素对α─淀粉酶活力测定的影响，确定了α─淀粉酶活力测定的最佳条件。通过比较研究，认为Ｙｏｏ改良法是α─淀粉酶活力测定的最佳方法，并确定了各方法不同活力单位之间的相互换算关系。

商品果胶酶中endo－PG的分离纯化及其部分性质研究

以Ａ．ｎｉｇｅｒ来源的果胶酶为材料，经过ＣＭ－ＳｅｐｈａｄｅｘＣ－５０及ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００两步骤分离纯化得到电泳均一的ｅｎｄｏ－ＰＧ１及ｅｎｄｏ－ＰＧ２，其亚基分子量分别为３５ｋＤ及３７ｋＤ，含糖量为１１．２２％及８．３％，最大紫外吸收峰分别在２７４ｎｍ及２６９ｎｍ处，氨基酸组成分析结果表明Ｇｌｙ含量较高，Ｍｅｔ含量较低，不含Ｃｙｓ，并且酸性氨基酸含量高于碱性氨基酸，圆二色谱结果表明二级结构主要为α螺旋和β折叠，其中ｅｎｄｏ－ＰＧ１含α螺旋４５．１％，β折叠２４．９％；ｅｎｄｏ－ＰＧ２含α螺旋３９．６％，β折叠３６．５％。

纤维素酶纤维素吸附区的结构与功能

大多数纤维素酶含有催化区和可与纤维素结合且氨基酸序列较为保守的纤维素吸附区(cellulosebindingdomain ,CBD)。纤维素吸附区促进酶与底物的结合 ,有利于催化区对不溶性底物的作用 ,但对可溶性底物的催化作用无影响。对CBD结构的研究和进一步的诱变研究揭示 :纤维素吸附区是通过几个芳香族氨基酸结合到纤维素表面。有实验证明外切葡聚糖酶的CBD对结晶纤维素有疏解作用。CBD结构域已成功地应用于一系列重组融合蛋白的纯化和固定化。对纤维素吸附区结构与功能的深入了解对进一步了解酶的作用机制 。

耐高温α-淀粉酶结合Ca^(2+)的研究

测定了耐高温α－淀粉酶分子中含１０个Ｃａ２＋，脱钙酶逐量补钙后的活力及稳定性研究表明：酶分子中前８个Ｃａ２＋参与酶的催化作用，后２个Ｃａ２＋对酶结构起稳定作用．脱钙酶加钙后室温下的荧光光谱和ＣＤ谱表明：酶的构象虽有变化，但不显著，说明酶的构象对Ｃａ２＋的依赖性很小．脱钙酶结合不同数目的Ｃａ２＋，于９０℃加热１５ｍｉｎ后，测其荧光光谱，结果表明，结合１０个Ｃａ２＋时，酶保持最大的稳定构象；ＣＤ谱表明脱钙酶加热时仍具有一定的螺旋结构．这再次说明，酶的构象对Ｃａ２＋依赖性较低．

果胶酶的固定化研究

本文研究了以重氮化的对—氨基苯磺酰乙基纤维素为载体制各固定化果胶酶的最适条件，并比较了固定化果胶酶与游离酶的性质。结果表明，最适的固定化果胶酶的条件是：在ｐＨ７．００．１５Ｍ的磷酸盐缓冲液中，按每克载体加入２１６３活力单位的酶的比例进行偶联反应１２小时。在以上最适条件下，固定化果胶酶的表观活力为１９８０Ｕ／ｇ，活力回收率为８７％。与游离酶相比，固定化果过酶作用的最适ｐＨ由４．６移至４．２，最适温度变宽，酶的热稳定性增强，操作稳定性良好，半衰期为３２．５天。

纤维素酶酶活力测定方法的校正

探讨了测定条件对纤维素酶酶活力测定的影响．研究表明，测定条件对测定结果影响较大，因此进行纤维素酶酶活力测定时，必须对测定条件作出规定．纤维素酶是一种复合酶，底物纤维素不溶于水，底物的不饱和程度对纤维素酶酶活力测定的影响较大．底物的不饱和程度越高，所测得酶活力就越低．利用酶液稀释率、蛋白质浓度和酶活力之间的关系建立一校正方程，得出一种纤维素酶酶活力测定的校正方法．

培养基初始pH值对木聚糖酶合成的影响

本文探讨了培养基三种初始pH值对木聚糖酶合成的影响。试验结果表明，培养基初始pH值对木聚糖酶的合成有重大影响，低pH有利于提高木聚糖酶活力。在碳源为7g／L条件下，初始pH值为4．0时合成的木聚糖酶活力高达32．87IU／ml，酶产率和得率分别为6574．0IU／L·d和4695．7IU／g木聚糖。酶活力和酶产率均是初始pH5．0的1．7倍，分别是初始pH6．0的3．8倍和2．3倍。进一步研究表明，初始pH4．0更有利于提高β-木糖旮酶的活力。

2-氯-4-硝基苯-α-半乳糖-麦芽糖苷作底物直接测定α-淀粉酶

用新底物２－氯－４－硝基苯－α－半乳糖－麦芽糖苷（Ｇａｌ－Ｇ２－α－ＣＮＰ）直接测定α－淀粉酶，不需要辅助酶，延滞时间短（＜１５ｓ），线性范围宽（可达２２００Ｕ／Ｌ），试剂稳定性好，不使用ＫＳＣＮ、ＮａＮ３等激活剂，不受内源性葡萄糖苷酶的干扰，与ＥＰＳ法对比相关良好：Ｙ＝１．２７Ｘ＋０．５０，ｒ＝０．９９９０。

用膨胀床金属亲和层析从淡菜匀浆液中分离纯化纤维素酶

研究了一种新的膨胀床金属亲和层析技术，即将金属亲和层析结合膨胀床层析，直接从淡菜（Ｂｌｕｅｍｕｓｅｌ）匀浆液中纯化纤维素酶。研究了金属亲和配基种类、ｐＨ、离子强度及流速对酶吸附和解吸的影响，确定了酶洗脱条件和介质再生条件。一步可纯化纤维素酶１９４倍，酶收率达８２％。本方法不需要预先去除细胞碎片，而且处理速率比传统层析技术高３～４倍。

比色法快速测定糖化酶活力新方法

本文介绍比色法测定糖化酶活力新方法。糖化酶水解淀粉产生葡萄糖，生成的葡萄糖与３，５—二硝基水杨酸钠盐（ＤＮＳ）作用，发生颜色改变，颜色变化的多少与葡萄糖含量成正比。因此糖化酶水解液与ＤＮＳ反应后，在５５０ｎｍ处测定吸光度，由吸光度看出葡萄糖含量，并计算出糖化酶的活力。比色法简单、快速，准确度和标准法相当，是仪器分析测定糖化酶活力的理想方法。

纤维素酶活力的测定

本实验是用改良梅尔茨（Ｍｅｒｚ）法测定纤维素酶的活力。在ｐＨ＝５．２，Ｔ＝３０℃，ｔ＝１６ｈ的条件下，测得纤维素酶的活力为１０００～１２００ｕ／ｇ之间。

嗜碱细菌NTT33碱性β-甘露聚糖酶的纯化与性质研究

报道了嗜碱芽孢杆菌ＮＴＴ３３产生的碱性β－甘露聚糖酶经纯化后，在ＰＡＧＥ电泳上呈现一条蛋白带，分子量为３．８９×１０７，等电点为３．０～４．０，酶反应最适ｐＨ为９．０～１０．０，最适作用温度为８０℃，稳定ｐＨ为６．０～９．０，稳定温度为６０℃以下．金属离子Ｃｕ２＋，Ｂａ２＋，Ｍｇ２＋，Ａｌ３＋，Ｃｏ２＋对该酶有一定的激活作用，而Ａｇ＋，Ｈｇ２＋，Ｍｎ２＋对该酶有明显抑制作用，经薄层层析鉴定，该酶水解槐豆胶后产生葡萄糖、甘露糖以及低聚糖．

内切葡聚糖苷水解酶的分离纯化和内源荧光性质

利用离子交换和分子筛层析技术从拟康氏木霉Ｓ－３８固态发酵液中提纯了两个内切葡聚糖苷酶组分．测定了一个组分的内源荧光性质，结果表明：该酶分子的内源荧光几乎都来自色氨酸．Ｎ－溴代琥珀酰亚胺（ＮＢＳ）修饰导致了酶活力的完全丧失，但是酶荧光残留了２５％，抑制剂纤维二糖与酶结合可使部分酶荧光得到保护，同时这种结合也可以保护一定的色氨酸荧光不被外来淬灭剂淬灭．