蛋白激酶Cα过表达导致正常人胚肺成纤维细胞生长失调的研究

采用自行构建的过表达ＰＫＣα亚类的正常人胚肺细胞模型，观察到细胞生长加速，血清依赖性明显下降，细胞形态发生变化，单层培养丧失接触抑制性，出现岛状生长，与对照组细胞相比，贴壁依赖性下降，在软琼脂中能形成小集落，细胞中微丝发生部分解聚，进一步检测观察到细胞中与转化密切相关的ｒａｓ癌基因表达明显增强，抑癌基因ｐ５３表达下降．首次表明在正常人胚肺细胞中ＰＫＣα的过表达直接导致细胞增殖加速，并可诱导出现部分转化特征．因此，ＰＫＣα的过表达与活化可能在细胞多阶段致癌过程中发挥着重要作用，而癌基因表达的增强与抑癌基因表达减弱可能是其作用分子机理之一．

蛋白激酶C的激活转位和它介导的信号通路

蛋白激酶Ｃ是一系列丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶家族，已发现了至少十二种同功酶。在静止细胞中，它主要以非活化形式存在于胞浆中，由受体－Ｇ蛋白耦联的ＰＬＣβ激活便裂细胞膜上的磷脂而释放ＤＡＧ；与ＰＫＣ的结合引起了ＰＫＣ的别构激活；而通过其它信号途径激活的ＰＬＤ水解胞膜的磷脂酰胆碱（ＰＣ）产生的磷脂酸经磷脂酸酯酶产生的ＤＡＧ可能是ＰＫＣ持续激活的必要条件。在体外实验中，ＰＫＣ的持续激活是一些细胞分化所必须的。蛋白激酶Ｃ的激活首先引起了它转位到膜，有时转位到核，并在转位后继续保持磷酸化活性，同时对它的下游底物进行磷酸化导致它们的活化。ＰＫＣ可活化ＲａｆＳｅｒ／Ｔｈｒ蛋白激酶及ＮＦ－ｋＢ，介导细胞对外界的反应，包括对核基因表达的调节，引起细胞生长或分化等。由于Ｒａｆ可与活化的Ｒａｓ—ＧＴＰ结合从而定位到胞膜，说明蛋白激酶Ｃ与Ｒａｓ介导的Ｒａｆ－１／ＭＥＫ／ＭＡＰＫ信号通路间存在着“对话”。

p38MAPK信号通路

细胞表面受体到核的信号通路是现代生物学研究的主题之一。细胞外各种刺激通过和膜受体偶联的Ｇ蛋白和酪氨酸激酶介导了一系列丝氨酸／苏氨酸激酶介导的级联反应，即分裂原激活蛋白激酶（ＭＡＰＫ）级联反应。ＭＡＰＫ级联反应把细胞外信号传递到核，并汇总了各种信号通路来的传息，因此研究细胞内ＭＡＰＫ的信号通路是十分重要的．本文简要介绍了ＥＲＫ，ＪＮＫ和ｐ３８三种ＭＡＰＫ途径，着重叙述了ｐ３８ＭＡＰＫ信号途径的性质和功能以及在免疫细胞中的作用和某些疾病的临床关系。

小鼠cAMP依赖的蛋白激酶催化亚基α的重组表达研究

将小鼠ｃＡＭＰ依赖的蛋白激酶（ｃＡＰＫ）催化亚基α（ｍＣα）分别以成熟、麦芽糖结合蛋白（ＭＢＰ）融合以及Ｎ端连续六个组氨酸（Ｈｉｓ_６）融合的形式在大肠杆菌中得到了高效表达，且成熟及融合的重组ｍＣα均有明显的蛋白激酶活性，表明蛋白激酶催化核心结构具有相对的独立性。其中Ｈｉｓ_６－ｍＣα可利用金属离子（Ｎｉ￣（２＋））配体亲和层析（Ⅰ－ＭＡＣ）一步纯化，所得融合蛋白可通过Ｈｉｓ_６亲合手臂（Ｔａｇ）固相化于金属离子（Ｎｉ￣（２＋））配体亲和树脂上，为进一步利用ＰｈａｇｅＤｉｓｐｌａｙ多肽库筛选ｃＡＰＫ识别的底物序列和专一性抑制剂打下了基础。

钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ及其功能

所有引起细胞内钙离子浓度升高的激素或神经递质都可通过不同的钙离子／钙调素依赖性蛋白激酶达到调节细胞生理功能的作用。其中钙离子／钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ在不同组织中的分布、基因表达不同，在神经元活动、细胞分泌。

丝氨酸蛋白酶催化机制的量子化学研究(Ⅰ)

用半经验的MNDO/H法对在丝氨酸蛋白酶的活性中心形成四面中间体模拟反应的几个系统进行了研究。讨论了“催化三联体”各组份对增加丝氨酸羟基反应能力所起的作用。表明His和Asp间形成了强氢键,对降低丝氨酸和底物反应的活化能是重要的。分析了Ser和His、His和Asp间质子位置变化。考虑了底物变形对中间体形成能量的影响。

枯草杆菌蛋白酶E的156和165位突变

应用定点突变方法 ,在M2 2 2A突变的枯草杆菌蛋白酶E基因上进行E1 56S和V1 65I定点突变 .将突变基因插入大肠杆菌 枯草杆菌穿梭质粒 pBE 2中 ,在碱性和中性蛋白酶缺陷型的枯草杆菌DB1 0 4中进行表达 ,得到突变种 (M 2 2 2A ,E1 56S)和 (M 2 2 2A ,E1 56S ,V1 65I)蛋白酶E .性质测定表明 ,E1 56S突变使蛋白酶比活力增加 90 % ,并不影响酶的热稳定性和抗氧化性 .而V1

赤子爱胜蚓纤溶酶活性的研究

研究了赤子爱胜蚓纤溶酶活性的提高条件及酶的最适作用条件。以纤维蛋白平板法测定赤子爱胜蚓纤溶酶活性。结果表明，纤溶酶在温度（５７～５９）℃， ｐＨ在８．０时，酶活性较稳定。赤子爱胜蚓纤溶酶干燥粉末浸泡在氯化钠等溶液中，可提高纤溶酶活性４－５倍。

木瓜蛋白酶PPAⅢ自水解作用

木瓜蛋白酶ＰＰＡⅢ自水解作用王秀艳，周慧，葛玉斌，李惟（吉林大学分子生物学系，长春１３００２３）ＰＰＡⅢ、ｐａｐａｉｎ、ｐｅｐｓｉｎｅ、ｓｔｅｍｂｒｏｍｅｌａｉｎ等都属于以Ｃｙｓ－ＳＨ为活性中心的酶，同种分子之间存在着一种相互切割的趋势，称为酶自水解...

周期蛋白依赖性蛋白激酶活性的调控

周期蛋白依赖性蛋白激酶活性的调控邱嵘（解放军兰州医学高等专科学校，兰州７３００２０）关键词周期蛋白依赖性蛋白激酶，周期蛋白，磷酸化真核细胞周期中细胞不同状态之间的转换主要是通过“检查点”（ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ）控制的。“检查点”主要由两个蛋白家族组成...

利用聚合脂质体的沉淀可逆性固定STI及其PL-STI对胰蛋白酶的亲和作用

通过双功能试剂戊二醛、二甘醇二酸酐和 1 ,4-丁二醇双缩水甘油醚等将大豆胰蛋白酶抑制剂 STI固定到由二十五 -1 0 ,1 2 -二块 -1 -醇磷脂乙醇胺形成的聚合脂质体上 .同时探讨了其作为亲和沉淀吸附剂对对胰蛋白酶的亲和作用 .在 PL沉淀过程中 ,胰蛋白酶有 2 0 %～ 60 %从 PL-STI上解离下来 .PL-STI可作为酶的亲和沉淀吸附剂 .

几种糖对纤维素酶热稳定性影响的研究

研究了几种糖对纤维素酶热稳定性的影响。研究发现 ,2 0℃下海藻糖和葡萄糖都能较好地保护酶的活性 ,蔗糖次之 ,而葡聚糖则不起作用。高温下葡萄糖和蔗糖不但不能保护酶的活性 ,反而起到破坏作用 ,而海藻糖和葡聚糖则对酶有较强的保护作用。初步分析 ,海藻糖作用机理是羟基能替代水分子同酶结合 ,并且能在酶分子空隙中和酶分子周围形成玻璃态 ,将酶分子支撑和包裹起来。因此海藻糖能在较宽的温度范围内阻止酶分子空间结构发生变化 。