蚕蛹蛋白及其水解产物中氨基酸组成分析

采用FMOC-OPA柱前衍生化-高效液相色谱法测定蚕蛹蛋白及水解液氨基酸含量,同时测定血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性,研究蚕蛹蛋白水解后氨基酸组成的改变及对ACE抑制活性的影响。结果表明:水解液10kD以下组分(SN2)中疏水性氨基酸含量为49.15%,显著高于10kD以上组分(SN1)中的40.55%及蚕蛹蛋白中的45.21%,其中对ACE抑制活性影响较大的脯氨酸、芳香族氨基酸含量为7.75%和19.20%,高于SN1中的5.62%和13.59%及蚕蛹蛋白中的7.42%和15.81%,并且SN2中ACE抑制率为47.6%显著高于SN1和蚕蛹蛋白中的抑制率,表明水解后疏水性氨基酸组成的改变与ACE抑制活性的变化趋势相同,且ACE抑制活性主要集中于SN2。

蚕蛹蛋白酶解产物体外抗氧化和降血压活性筛选及响应面工艺优化

以蚕蛹蛋白为原料,使用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、菠萝蛋白酶对其进行酶解,采用1,1-一苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH自由基)法、超氧阴离子自由基(O-2.)法、羟自由基(.OH)法和血压紧张素转化酶(ACE)法对酶解产物进行抗氧化和降血压活性分析,筛选同时具有较强抗氧化和降血压活性的酶解产物,并确定获得较强活性时的水解度,再通过响应面对该水解度下酶解工艺条件进行优化。结果表明:碱性蛋白酶在水解度为20%左右时获得的水解产物抗氧化和降血压效果较好,并由响应面分析结果表明酶解温度和加酶量之间存在显著的交互作用,同时得到最佳酶解工艺条件为:酶解温度51℃,pH值为9.05,加酶量为0.38%,酶解时间3h,在此条件下,水解度为20.53%,再通过实验验证其误差值小于5%,说明采用响应面试验设计方法对蚕蛹蛋白酶解体系进行优化具有较好的可靠性。此时酶解产物的DPPH自由基抑制率为51.2%,ACE抑制活性为50.3%。

蚕蛹蛋白精制及其氨基酸成分分析

以缫丝后蚕蛹为原料,对蚕蛹蛋白进行提取工艺优化,并测定提取后蚕蛹蛋白的氨基酸含量及分子量分布。实验结果表明蚕蛹蛋白提取最佳工艺为:固液比1∶3、提取次数3次、pH3.0,此工艺下蛋白提取率为53.0%;通过氨基酸分析发现提取前后蚕蛹蛋白氨基酸组成未发现明显变化,说明该提取方法并不会造成蚕蛹蛋白氨基酸组成的改变,并且该提取方法制得的蚕蛹蛋白不仅氨基酸种类丰富且各氨基酸配比合理,分子量分布范围从500～100000u,可进一步应用于制药、食品及化妆品等领域。

蚕蛹蛋白功能性多肽研究进展

蚕蛹蛋白是一种优质的天然蛋白,通过各种蛋白酶酶解等技术制备得到的功能性多肽更具有降血压、抗氧化、抗疲劳、抗肿瘤等诸多功效。文章从蚕蛹蛋白功能性多肽的研究现状和应用两方面着手,全面介绍了蚕蛹蛋白功能性多肽的研究进展及前景。

Photobacterium sp.QH氨肽酶的基因克隆及其序列、酶学性质分析

目的克隆盐湖菌株Photobacterium sp.QH(Ps sp.QH)氨肽酶的基因,并对其进行序列及酶学性质分析。方法从青海盐湖采集水样,筛选Ps sp.QH菌株,进行16S rRNA分子生物学测定。通过硫酸铵沉淀、阴离子交换层析、凝胶过滤层析法从筛选菌株的发酵液中纯化氨肽酶,同时对其进行质谱分析,基因克隆及酶学性质分析。结果获得的菌株Ps sp.QH与Photobacterium halotolerans为同一属。该菌株分泌的氨肽酶属于金属螯合氨肽酶M28家族,全基因序列长1 527 bp,共编码508个氨基酸,预测其全酶分子相对分子质量为55 900,氨基酸序列与Photobacterium halotolerans氨肽酶(KKC99795.1)同源性达98%。该氨肽酶在50℃时酶活最高,40~50℃及pH 8.5时稳定性较好;Co^(2+)对其有激活作用,Mg^(2+)、Mn^(2+)、Zn^(2+)、Ca^(2+)、Fe^(2+)及Cu^(2+)对其有不同程度的抑制作用;该酶在1~3 mol/L的Na Cl溶液中仍保持较高活性。结论 Ps sp.QH分泌的氨肽酶对高盐有一定的耐受性,具有潜在的工业应用价值。