荧光定量PCR技术的原理与应用

荧光定量PCR技术是在普通PCR技术基础上建立起来的一种利用标准曲线对未知模板进行定量分析的方法.它特异性强、灵敏度高、操作简便、快速高效,在疾病诊断、食品检测、环境监测以及生物学研究等方面具有广泛的应用前景.在阐述荧光定量PCR技术原理的基础上,系统论述了该技术在各方面的应用.

人骨保护素N端片段在大肠杆菌中的表达及其活性分析

骨保护素 (OPG)成熟肽N端D1～D4结构域仅由 2个外显子编码 .以人基因组DNA作为模板 ,采用重叠延伸PCR得到N端D1～D4域编码序列 ,并在其上游引入 2×His密码子序列 ,然后克隆入载体pQE 30进行表达 ,SDS PAGE表明 8×His融合蛋白主要以包涵体形式存在 ,可被抗OPG抗体识别 .变性条件下通过Ni NTA金属螯合亲和层析对表达产物进行纯化后再经梯度透析进行复性 ,采用破骨细胞样细胞 (osteoclast likecell ,OLC)诱导分化实验来检测重组蛋白的生物活性 ,证实单核 巨噬细胞集落刺激因子 (M CSF)和破骨细胞分化因子 (ODF)可协同促进多核OLC的生成 ,但加入重组OPG片段后 ,OLC生成显著减少 .

2型糖尿病家系中患者与一级亲属血脂异常紊乱的研究

目的探讨2型糖尿病(T2DM)家系人群中患者与一级亲属血脂紊乱异常类型、聚集程度的差异及血脂紊乱的影响因素。方法对351例T2DM患者和300例非糖尿病一级亲属按血脂指标异常的项目数分为5组,并将血脂紊乱分为8种类型。比较家系两组人群异常血脂指标聚集性和血脂紊乱类型。在糖尿病患者中以血脂正常者为对照组,用Logistic回归分析年龄、体脂等和血脂的关系。结果家系两组人群中的血脂紊乱类型的差异无统计学意义(X2=4.294,P=0.7451),但患者组血脂紊乱的比例高于未患糖尿病亲属组(72.6%vs.57.7%,X2=16.123,P=0.0000)。多因素分析发现年龄与TG的升高和HDL的降低有关,腰臀比的增大与TG有关[Exp(B)=1.799,P=0.012]。结论糖尿病患者中存在异常血脂指标的聚集,但患者与其亲属的血脂紊乱类型相似。糖尿病患者腹部体脂的增加与总胆固醇水平有关。