反相高效液相色谱荧光法测定大鼠脑组织中氨基酸类神经递质

目的 建立并改良反相高效液相色谱法,测定大鼠不同脑组织分区氨基酸类神经递质含量。方法 改良使用K2 CO3 缓冲溶液作为稀释液,反相高效液相色谱洗脱,高丝氨酸作为内标,邻苯二甲醛柱前衍生和荧光检测器检测大鼠大脑皮质、海马、纹状体和小脑中4种氨基酸类神经递质:天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)和γ氨基丁酸(GABA)的含量。结果 4种氨基酸在18min内洗脱完全,分离效果良好;在0 .5～4 0 μmol/L浓度范围有较好的线性关系,其相关系数不低于0 .9997;4种氨基酸天内精密度范围为0 .70 %～4 .0 1% ,天间精密度为2 .78%～9.5 8% ;Asp、Glu和GABA的最低检测限为0 .0 1μmol/L ,而Gly为0 .0 2 μmol/L ;海马组织4种氨基酸绝对回收率不低于89.39%。结论 改良后的反相高效液相色谱荧光法灵敏度高、重复性好,能有效分离检测大鼠脑组织分区中氨基酸类神经递质。

HPLC测定脑组织和脑脊液中4种氨基酸类神经递质含量的方法改良研究

谷氨酸（Ｇｌｕ）和γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）等神经递质的代谢异常是诱发多种神经系统疾病的因素之一。由于神经递质在脑内的含量很低，改良建立了一种用ＨＰＬＣ荧光检测Ｇｌｕ、ＧＡＢＡ等４种神经递质的方法，以高丝氨酸为内标，流动相为磷酸缓冲液和甲醇，梯度洗脱２０ｍｉｎ，荧光检测。分离效果及线性关系良好，Ｇｌｕ、ＧＡＢＡ的相关系数分别为０．９９６９、０．９９９６；精密度ＣＶ批内３．４％，批间５．６％；其最小检测限分别为３．３ｐｍｏｌ、１．

大鼠缺血性脑损伤早期一氧化氮含量的变化及其细胞来源的研究

目的 观察缺血性损伤后脑内一氧化氮 (Nitricoxide ,NO)含量的变化并确定NO的细胞来源。方法 采用短暂性全脑缺血再灌注模型 ,运用NO生化检测、NADPH 黄递酶组化、免疫荧光双标技术及图像分析等方法。结果 ①脑内NO的浓度于缺血再灌注后 12h后即升高 ,1～ 3d达高峰并持续至第 5天 ,此后逐步下降。②NDP阳性细胞数在缺血再灌注后 1d即达高峰 ,以颞叶皮质、海马与室周区明显 ;再灌注 14d后阳性细胞减少或消失。③脑缺血早期 ( 1～ 3d)NDP阳性细胞与GFAP免疫荧光阳性细胞少数有共存 ,仅占 10 %～ 15 %。结论 缺血性脑损伤早期NO的浓度增高 。

高效液相色谱分析兔脑脊液中脑啡肽、脑新肽和P物质

应用高效液相色谱法分析神经肽的报道,近几年来逐渐在增多,已成功地对各种组织和体液中的肽进行分析。但在用紫外检测时,由于灵敏度低,受到一定限制。一般改进的办法是将邻苯二甲醛与肽反应,生成具有强荧光的衍生物。

脊髓损伤大鼠触液神经元中p75NTR的表达

目的 :探讨大鼠触液神经元(cerebrospinal fluid-contacting neurons,CSF-CNs)p75神经营养因子受体(p75 neurotrophin receptor,p75NTR)在脊髓损伤后的表达变化。方法 :成年雌性Sprague-Dawley(SD)大鼠36只,按随机数字表法分为正常对照组(6只)、假手术组(6只)和脊髓损伤组(24只),脊髓损伤组采用Allen′s打击模型(10g×3cm)在大鼠脊髓T10段造成急性脊髓损伤,分别于损伤3d、1周、2周、4周后进行取材;对照组不做任何处理,假手术组只暴露脊髓,不击伤脊髓。对各组大鼠运动功能行BBB评分,各时间点取材行病理切片HE染色观察。取材前48h侧脑室注射霍乱毒素B亚单位与辣根过氧化物酶复合物(CB-HRP)特异性标记触液神经元。处死大鼠后,取损伤的脊髓节段10mm,用免疫荧光双标法检测触液神经元p75NTR的表达,ImagePro Plus计数目标神经元CB-HRP/p75双阳性细胞的数目。结果 :假手术组各时间点BBB评分均为21.0±0;脊髓损伤组在术后3d、1周、2周、4周各时间点BBB评分分别为3.20±0.81、10.73±1.02、12.48±1.86、13.29±1.93,两组各时间点差异均具有统计学意义(P<0.05)。HE染色可见正常对照组和假手术组脊髓组织结构完整,细胞形态正常;脊髓损伤组脊髓组织结构紊乱,神经元变性坏死,胶质细胞增生,胶质瘢痕和脊髓空洞形成。免疫荧光双标示正常对照组和假手术组可见少量CB-HRP/p75双阳性细胞,计数分别为5.16±0.55、4.31±0.61,两组比较差异无统计学意义(P>0.05);脊髓损伤组伤后3d、1周、2周CB-HRP/p75双阳性细胞数分别为13.35±1.53、21.68±2.15、16.26±2.09,与正常对照组和假手术组比较差异均有统计学意义(P<0.05),伤后4周时,CB-HRP/p75双阳性细胞数为4.83±0.73,与正常对照组和假手术组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 :p75NTR可在大鼠脊髓触液神经元中表达,且在脊髓损伤后表达增加,触液神经元可能通过p75NTR参与脊髓损伤的修复过程。

以HRP及氚水作示踪剂研究脑脊液的回流途径

目的研究脑脊液（ＣＳＦ）的正常回流途径。方法将ＨＲＰ、氚水作为示踪剂分别缓慢注入两组大白鼠侧脑室。应用光、电镜技术和液闪、放射自显影技术对ＨＲＰ和氚水在脑组织中分布状况进行观察。结果在脑室周围器官及脑室周围室管膜、软脑膜层有ＨＲＰ反应产物的聚集，在鼻中隔的鼻粘膜下组织间隙、嗅丝周围间隙及静脉周围和管腔内也可见到ＨＲＰ反应产物；液闪计数显示，大白鼠的脉络丛、脑垂体、最后区、松果体等脑室周围器官放射性活度明显高于本底；放射自显影显示大白鼠脑组织神经层细胞内有散在分布的银颗粒。结论ＣＳＦ可经由脑室周围器官、脑膜及鼻粘膜下静脉网汇入体循环，同时ＣＳＦ可回流至大脑神经细胞层，参与形成神经细胞层组织液，与维持脑的正常功能有关。

CoHCF 化学修饰电极与高压液相色谱联用测定脑渗析液中谷胱甘肽等巯基化合物

本文讨论了六氰合亚铁酸钴(CoHCF)修饰电极的制备,研究了它对还原型谷胱甘肽(GSH)、L—半胱氨酸(L—Cys)及N—乙酰基半胱氨酸(NAC)的催化机理;以CoHCF修饰电极为电化学检测器与高压液相色谱联用,分离检测了GSH、L—Cys和NAC三种物质,分别在50×10^(-6)mol/L-1.0×10^(-4)mol/L、1.5×10^(-6)mol/L-2.0×10^(-4)mol/L、3.0×10^(-6)mol/L-1.0×10^(-4)mol/L浓度范围内与电流响应呈良好的线性关系,检测限分别为2.5×10^(-6)mol/L、1.0×10(-6)mol/L和1.5×10(-6)mol/L;以微渗析技术为活体取样方式,测定了大鼠脑渗析液中的谷胱甘肽等巯基化合物的含量。为电分析化学在临床医学、生理学等生命科学中的应用提供了新的途径。

不同水平饲料锌与热暴露对大鼠某些脑区锌、铜、铁含量的影响

选用４８只ＳＤ雄性大鼠随机等分３组，即Ａ组、Ｂ组和Ｃ组。再从每组中分出８只用于高温暴露，另８只用于室温对照，在ＡＩＮ－９３Ｍ饲料配方基础上，以碳酸锌为锌源，配制成Ａ、Ｂ、Ｃ组锌饲料。每千克饲料锌含量测定值：Ａ组为９２．２ｍｇ，Ｂ组４５．６１ｍｇ，Ｃ组２１．７０ｍｇ。根据动物分组，饲以各组大鼠相应水平锌饲料１４天后，将用于高温暴露的大鼠置于高温室（Ｔｄｂ４０℃，Ｔｗｂ３０．８℃）连续暴露３小时。用原子吸收分光光度计火焰法测定大鼠海马、大脑皮层和小脑Ｚｎ、Ｃｕ、Ｆｅ含量。实验结果发现：①高温暴露可使海马铜含量显著增加：②高温暴露后，海马铜含量比小脑和大脑皮层铜含量高，而在室温对照大鼠，小脑铜含量却比大脑皮层和海马铜含量高。③摄入不同水平饲料锌主要影响小脑铜的含量，对铁的影响较小。④中。

用PIXE分析人脑脊液中的微量元素

用PIXE分析方法测定了人的脑脊液样品中K、Ca、Cr、Mn、Fe、Ni、Cu、Zn和Br等多种微量元素,比较了无脑疾病人与脑疾病患者的脑脊液样品中元素含量的差异,并对截瘫患者手术前后脑脊液中元素含量的变化进行了探讨。

苯酚与脑脊液不同用量对Pandy试验结果的影响

目的探讨苯酚与脑脊液（CSF）不同用量对Pandy试验结果的影响。方法39份CSF标本，按照蛋白质含量分成3组，每份以2ml苯酚＋1滴CSF、2ml苯酚＋2滴CSF、3ml苯酚＋1滴CSF、3ml苯酚＋2滴CSF的4种不同加入配比做Pandy试验。结果CSF蛋白质含量在325～575mg／L之间时，同1份标本在苯酚与CSF4种不同用量下的Pandy试验结果显著不同（P〈0．05），其中2ml苯酚＋1滴CSF和2ml苯酚＋2滴CSF的结果差异显著（P〈0．05）。结论苯酚和CSF的用量不同对Pandy试验的结果有影响，但苯酚与CSF的最佳配比还需结合CSF中球蛋白含量确定。

济南地区正常脑脊液10种微量元素含量的分析

济南地区正常脑脊液１０种微量元素含量的分析刘宗印，申红，孙玉萍，泮广锦，吴锡文，黄启祥，李云婷济南市中心医院（济南２５００１３）脑脊液微量元素含量是判断中枢神经系统疾病及某些全身性疾病微量元素变化情况的一项重要指标，为此我们对济南地区４０份正常脑脊液...

化学发光ELISA检测可溶型CD100(sCD100)方法的建立及其应用

目的建立可溶型CD100(sCD100)的微孔板式化学发光检测试剂盒,并初步用于临床脑脊液标本的检测。方法利用空军军医大学免疫学教研室制备的2株抗CD100单克隆抗体(mAb),在夹心ELISA的基础上,优化实验条件,建立sCD100化学发光免疫检测方法;对该方法的灵敏度、精密度进行评价;并检测了18例脑脊液标本的sCD100水平。结果化学发光法检测sCD100在0.098 ng/mL^12.5 ng/mL范围内线性关系良好,检测敏感性能达到0.12 ng/mL。批内变异系数为3.8%~6.6%,批间变异率为6.2%~14.1%。用该方法检测病毒性脑炎患者脑脊液,平均sCD100水平显著升高,2例患者标本分别高出正常均值9.4及13.8倍。结论成功建立了快速、敏感和稳定的sCD100化学发光检测法,可用于脑脊液标本中微量sCD100的定量分析。

甘肃省流脑菌群分布及耐药性检测

目的:为了解流脑菌群在我省的流行、分布及耐药状况,以便采取防制措施。方法:我们于2005年-2007年对我省流脑病例咽拭子及脑脊液、密切接触者、健康人群咽拭子,依据流行性脑脊髓膜炎诊断标准和处理原则⑴进行了流脑菌群的分布监测。结果3年分离流脑菌株47株。从流脑病人咽拭子中分离Nm4株,脑脊液中分离Nm5株。密切接触者咽拭子分离Nm32株,(A群31株、C群1株)。健康人群咽拭子中分离Nm6株(B群4株,A群2株)。对23株Nm做了药敏试验。敏感率依次为氨苄西林100%、头孢噻肟100%、氯霉素100%、环丙沙星100%。其它6种抗生素耐药率自82.80%-4.35%不等。结论:监测结果为流脑防治工作提供了依据。

脑脊液中游离氨基酸的化学衍生-高效液相色谱分析

本文以二甲胺基偶氮苯磺酰氯为衍生试剂,通过优化衍生条件和梯度洗脱,在常温下实现了20种氨基酸的基线分离,并首次将其应用于脑脊液中游离氨基酸的分析,大多数氨基酸测定的相对标准偏差小于6％。

大鼠脑脊液、脊髓灌流液和脊髓背部单胺类递质及其代谢产物的含量比较

目的：比较大鼠脊髓单胺类神经递质的含量和基础释放量。方法：以反相离子高效液相色谱电化学检测法对样品中的单胺类递质及其代谢产物进行定量分析。结果：（１）分别测得了大鼠脑脊液、脊髓灌流液和脊髓背部组织提取液中单胺类递质及其代谢产物的含量；（２）在大鼠脊髓背部组织中同时含有５羟色胺、去甲肾上腺素和多巴胺，但在脊髓灌流液和脑脊液中只能检测到去甲肾上腺素，部分样品中能测到多巴胺；（３）递质代谢产物在脑脊液和脊髓灌流液中的含量均高于其对应的递质。结论：该方法的分辨率和灵敏度均能满足实验要求，所得数据为进一步研究脊髓水平单胺类递质的代谢和生理功能奠定了基础。

人脑脊液中β-微量蛋白的纯化

β-微量蛋白（β-trace）是存在于脑脊液（CSF）中的一种微量蛋白，其功能和来源尚未明了。主要问题是其纯化问题未解决。β-微量蛋白经常与IgG的Kappa和lambda轻链混杂，纯化时很难将它们分开。本研究用SephadexG75及SephadexG150柱层析，结合ProteinG－Sepharose4FastFlow亲和层析，去除IgG轻链，得到纯粹的β-微量蛋白。