酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-UL49的构建、表达与鉴定

目的构建人巨细胞病毒UL49基因的诱饵表达载体,以利于筛选与pUL49相互作用的蛋白。方法PCR扩增UL49全序列,克隆入pGBKT7,将构建好的pGBKT7-UL49转化到酵母细胞AH109;用蛋白印迹法分析诱饵蛋白的表达,检测诱饵蛋白有无毒性和自激活效应。结果克隆成功pGBKT7-UL49;pG-BKT7-UL49成功转化到AH109,转化细胞AH109[pGBKT7-UL49]表达诱饵蛋白pUL49,pUL49对转化细胞无细胞毒性、无自激活。结论成功构建了酵母诱饵表达载体pGBKT7-UL49,为进一步筛选与pUL49相互作用的蛋白提供了实验基础。

Hsp90抑制剂BIIB021对人急性T细胞白血病Molt-4细胞周期和凋亡的影响

为了研究Hsp90抑制剂BIIB021对人急性T淋巴细胞白血病细胞株Molt-4增殖和凋亡的影响,采用MTT法检测了BIIB021对Molt-4细胞增殖的影响,Hoechst33258荧光染色法检测细胞凋亡形态学变化,流式细胞术检测药物作用前后细胞周期和凋亡的改变,Western blotting检测BIIB021对细胞周期和凋亡相关蛋白的影响。结果显示:BIIB021以时间和剂量依赖性方式抑制Molt-4细胞增殖,48、72h的IC50分别为384.6nmol/L和301.8nmol/L;Hoechst33258染色可观察到细胞内出现凋亡小体,且随着药物浓度增大,凋亡小体的数目也逐渐增多;流式结果同样显示,随着药物浓度升高,细胞凋亡率逐渐上升,400nmol/L BIIB021可诱导细胞凋亡率达34.4%;另外,BIIB021可显著阻滞细胞于G0/G1期;Western blotting显示BIIB021激活Caspase-8、-9、-3和PARP,下调CDK4/6,上调p21和p18,并能明显抑制Akt和p65。由此表明,BIIB021能激活死亡受体途径和线粒体途径诱导Molt-4细胞凋亡,并通过影响CDK4/6和p21、p18使得Molt-4细胞被阻滞于G0/G1期,抑制细胞增殖;BIIB021对Molt-4的Akt和NF-κB也有抑制作用。

中枢神经系统弥漫大B细胞淋巴瘤脑脊液和血浆细胞因子水平分析

目的初步探索原发和继发中枢神经系统(CNS)弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者脑脊液和血浆细胞因子水平特点,及与无CNS累及DLBCL患者的差异。方法回顾性分析首都医科大学宣武医院血液科2019年至2022年收治的初治、检测了脑脊液和血浆细胞因子水平的DLBCL患者83例,根据临床特征分为3组:原发中枢神经系统淋巴瘤(PCNSL)组46例,继发CNSL(SCNSL)组12例,无CNS受累的系统性DLBCL(non-CNSL)组25例。收集患者治疗前血浆及脑脊液12种细胞因子结果,包括IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12P70、IL-17A、IFN-α、IFN-γ和TNF-α,进行组间比较。结果PCNSL组脑脊液IL-10水平[41.08(6.90,98.73)pg/mL]显著高于SCNSL组[9.13(0.98,26.22)pg/mL]及non-CNSL组[1.58(1.42,1.79)pg/mL],P值分别为<0.0001、0.0185。PCNSL组血浆IL-10[2.20(1.39,2.64)pg/mL]明显低于non-CNSL组[5.49(2.02,21.36)pg/mL]。83例患者中,共有40例患者同时检测了脑脊液和血浆的细胞因子水平,其中PCNSL组23例、SCNSL组10例、non-CNSL组7例。比较脑脊液和血浆的细胞因子水平发现,PCNSL组中69.6%患者(16/23)仅有脑脊液IL-10水平升高、17.4%患者(4/23)脑脊液和血浆IL-10水平同时升高、13.0%患者(3/23)均无升高;SCNSL组患者中10.0%患者(1/10)仅有脑脊液IL-10水平升高、50.0%患者(5/10)脑脊液和血浆IL-10水平同时升高、40.0%患者(4/10)均无升高;non-CNSL组57.1%患者(4/7)仅有血浆IL-10升高、14.3%患者(1/7)脑脊液和血浆IL-10水平同时升高、28.6%患者(2/7)均无升高。脑脊液及血浆IL-10同时升高、且0.2<CSF IL-10/Plasma IL-10<5.0时,对诊断SCNSL的灵敏度为50.0%,特异性为96.4%。结论PCNSL组患者脑脊液IL-10明显高于non-CNSL及SCNSL,血浆IL-10明显低于non-CNSL。当血浆及脑脊液IL-10升高、且脑脊液/血浆IL-10比值为0.2~5.0之间时,其诊断SCNSL具有较高的特异性。

丁酸钠逆转H460/5-FU肺癌细胞耐药性的研究

肺癌耐药是化疗成功的主要障碍,因此肺癌细胞的耐药逆转研究具重要意义。实验通过流式细胞术检测到对5-氟脲嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)耐受的细胞系H460/5-FU中的SP细胞含量较亲本细胞H460明显升高,经丁酸钠诱导分化后,H460/5-FU对5-FU的敏感性增加,表现为细胞存活率降低,细胞凋亡率提高,而且这种改变随着丁酸钠浓度的增加而增强。结果提示丁酸钠具备逆转肺癌耐药细胞系H460/5-FU耐药的能力。

全人源抗人VEGFR-2抗体抑制黑素瘤的活性研究

为探讨全人源抗人血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)抗体Mab-04对黑素瘤的体内外抑瘤活性,分别通过流式细胞术、MTT法、细胞划痕技术和Annexin V-FITC/PI双染法检测Mab-04与不同黑素瘤细胞细胞系表面VEGFR-2的结合率、对黑素瘤细胞体外增殖能力的影响、抑制黑素瘤细胞迁移和诱导肿瘤细胞凋亡的活性。并建立B16F10小鼠黑素瘤模型,通过瘤内给药方式,给予不同剂量的抗体,使用H.E.(Hematoxylin-eosin)染色法观察Mab-04抗体的体内抗肿瘤活性。实验结果发现,Mab-04能特异性地与黑素瘤细胞表面VEGFR-2结合,有效抑制黑素瘤细胞的增殖和迁移,并能诱导黑素瘤细胞的凋亡。体内抑瘤实验也表明,Mab-04对小鼠B16F10黑素瘤模型具有明显生长抑制作用,在有效剂量范围内,抑瘤率可达到63.9%。实验表明,Mab-04能特异性地与黑素瘤细胞表面VEGFR-2受体结合,通过抑制肿瘤细胞的增殖和迁移、诱导肿瘤细胞凋亡等途径,达到抑制黑素瘤生长的作用。