未修饰的纳米金结合等位特异性扩增来检测K-ras基因点突变

将等位基因特异性扩增的特异性与纳米金特殊的光学性质相结合,发展了一种新的基因点突变检测方法.以肿瘤中常见的K-ras癌基因第12位密码子作为点突变检测对象,采用突变型引物对待测序列进行等位特异性扩增.突变型样品扩增产物中大部分是双链DNA;而野生型样品由于不能被顺利扩增,产物中大部分是单链DNA.以纳米金颗粒作为报告基团,向两种不同基因型扩增产物中依次加入纳米金胶和盐溶液,野生型基因扩增产物中的单链引物被吸附到纳米金颗粒表面,使得纳米金在适宜浓度的盐溶液中不发生聚集;突变型样品扩增产物中的双链DNA由于与纳米金颗粒间存在静电斥力而不能被吸附到纳米金颗粒表面,纳米金在该浓度的盐溶液中发生聚集,导致两种基因型的混合液在吸收光谱和颜色方面均存在显著差异,从而实现了检测基因点突变的目的.该检测方法直观、快速、简便,实验成本低,能够检测到pmol量级的样品,为点突变检测提供了一种实用的新方法.

用AFM观察小白鼠心肌核DNA片段的基因体外表达和垃圾DNA的相互作用

用AFM直接现场观察、体外表达等实验技术组合,观察到小白鼠(Balb/c)心肌核DNA片段的基因在体外表达过程中形成的nmRNA(n=9)[1]线型链状复合体,处于垃圾DNA片段的特定的“翻译平台”上,其每种mRNA两端非共价键分别结合自己编码蛋白质(即分子开关),中间的编码序列均非共价结合完全可解离的翻译活性因子等多种蛋白质[1～2]:这些蛋白质可能均由垃圾DNA片段的极复杂的立体结构所形成的、匹配协同的、专一性蛋白质通路所调控,该通路对蛋白质按顺序分别进行特异性双向调控。核内nmRNA线型链状复合体在体外可翻译出LDH等蛋白质,并显示nmRNA翻译的“群体效应”。用AFM还观察到胞质制取的nmRNA(n=12)线型链状复合体(无垃圾DNA存在),体外翻译出少量LDH等蛋白质,并显示nmRNA翻译的“群体效应”。本工作展示了未来运用AFM观察体外表达等生物学反应,研究基因表达与调控机制及其与垃圾DNA相互作用的前景。

毛细管电泳在基因研究中的应用

讨论用于基因研究的各种方法,并指出毛细管电泳技术的优点。评述毛细管电泳(CE)用于基因分析的原理,详细介绍毛细管电泳在基因研究中的应用新进展。展望CE及其在基因研究的应用前景。