表达HIV-1gag蛋白重组乳酸乳球菌株的建立及其在小鼠体内定植的研究

目的构建表达HIV-1gag的重组乳酸乳球菌，并分析重组菌在小鼠体内的定植情况。方法将HIV-1gag克隆至原核表达质粒pMG36e，重组质粒pMG36e-gag电转乳酸乳球菌，SDS-PAGE和Western blot法检测其在乳酸乳球菌中的表达。以10^9个重组菌给小鼠口服，对照组口服PBS。口服后第1、3、5、7、9、11天分别取小鼠的胃、小肠和大肠，采用稀释滴种法测定小鼠胃、肠道内重组菌的数量。结果酶切和DNA测序表明gag已克隆人pMG36e。SDS—PAGE在预期位置检测到蛋白条带，Western blot分析证实其为gag蛋白。重组菌定植实验表明，第1、3天在胃肠均有一定量重组菌，且大肠中重组菌数量多于胃和小肠，随后胃肠中重组菌均迅速减少，仅在大肠中仍有一定量的重组菌，第11天时胃肠仅分离到极少量的重组菌。结论本研究获得胞内表达HIV-1gag前体蛋白Pr55的重组乳酸乳球菌，其可在胃肠中短期存活，可作为预防HIV-1感染的候选疫苗。

紫茎泽兰凋落物提取液对自身种子萌发和幼苗生长的影响

采用恒温培养法研究了不同浓度紫茎泽兰凋落物提取液对其种子萌发和幼苗生长的影响。结果表明:紫茎泽兰凋落物提取液对自身种子萌发与幼苗生长起到一定程度的抑制作用,并且浓度越高抑制作用越强;当提取液浓度低于0.05g/ml时,种子萌发和幼苗生长过程中各指标与对照均无显著差异(p>0.05);提取液浓度高于0.05g/ml时,种子发芽率、发芽势、发芽指数、胚根长、幼苗鲜重和干重随提取液浓度的增加急剧降低(p<0.05),并且紫茎泽兰凋落物提取液延长了种子发芽时间,而对幼苗鲜重和干重影响不显著(p>0.05);高浓度(0.30g/ml)紫茎泽兰凋落物提取液致使种子失活。统计相关检验表明,紫茎泽兰叶片丙二醛(MDA)含量、细胞膜透性均与提取液浓度呈显著的线性正相关(p<0.001),叶绿素含量、根系活力(TTC)、保护性酶(POD,SOD,CAT)和非保护性酶(PPO,PAL)活性均与提取液浓度呈显著的线性负相关(p<0.001)。综合以上结果表明紫茎泽兰凋落物提取液对其种子萌发和幼苗生长存在一定程度的自毒作用。

耐热Taq DNA聚合酶的酸酐修饰及其在降低PCR非特异性扩增中的应用评价

酸酐能与聚合酶上的赖氨酸结合形成聚合物,试验通过选用合适的酸酐,修饰TaqDNA聚合酶。在常温下,酶活性被封闭,升温过程中不表现酶活,从而减少非特异性扩增和引物二聚体的形成;而在较高的温度下一段时间后,一般为94℃、15 min,酸酐脱落,聚合酶得以恢复正常的扩增活性,从而实现PCR反应的热启动。由此建立的热启动PCR体系灵敏度高,可以检测到10个拷贝的DNA分子,较普通PCR体系提高了2个数量级。此方法较其他方法操作简单成本低廉,且所得的热启动TaqDNA聚合酶稳定性好,便于保存,其灵敏性与特异性也更高。这种通过化学修饰形成的复合物达到热启动PCR目的的方法的建立,具有着重要的意义,是提高PCR灵敏度和特异性的重要方法之一。

固液界面反应润湿动力学的表征与计算

目的获得在反应润湿过程中固液界面能与时间变化的关系,掌握反应润湿动力学的核心问题。方法基于反应润湿过程中反应界面处的三相能量处于动态平衡状态,以反应界面新相覆盖率α和界面活性元素占位浓度分数Φs为变量,结合Young方程带入边界条件进行数学推导,并且进一步采用Dezellus推出的cosθ-t关系的动力学方程进行理论推导。通过真空熔炼炉炼制NiSi合金,采用改良座滴法,在高温真空润湿仪中的石墨基板上进行润湿实验,用高分辨率的CCD相机拍摄反应润湿过程中接触角的变化,获取接触角数据,结合公式计算,验证动力学方程。结果理论推导出了固液界面能与时间关系的动力学方程。该方程与文献中将固液界面能在反应过程的瞬时差值作为驱动力所推方程相同,也与Dezellus推出的cosθ-t关系经推导后的动力学方程完全相同。该动力学方程中固液界面能与时间呈指数规律降低的关系。Ni-Si/C体系润湿实验的结果表明,在界面反应控制阶段,固液界面能随反应时间呈指数规律降低,与理论推导的动力学方程中固液界面能随反应时间的变化规律一致,结合动力学方程与Arrhenius方程计算出Ni-45%Si/C体系的界面反应激活能为239kJ/mol,与文献中所报道的数值接近。结论反应润湿过程中,该反应动力学方程切实可靠,固液界面能随时间呈指数规律降低的关系,能够为材料表面改性与涂层中的润湿性问题提供理论参考。

绿色黄金——沙棘

沙棘(Hippophae rhamnoides)又名醋柳、酸刺、黑刺。属胡颓子科沙棘属,是一种野生浆果植物。现代科学和医学的大量研究成果表明,沙棘不仅是世界上迄今所发现的富含天然维生素种类最多的珍贵植物,而且在其果实油、果汁和果渣及叶片、果皮、树皮中富含有280多种生理活性成分,具有强烈的消炎、杀菌、止痛和促进组织再生的特殊功效。其中许多成分在杀死和抑制肿瘤细胞、抗辐射、抗凝血、降血压、防止血管栓塞、抗衰老、抗疲劳、增强肌体活力和免疫力等方面都显示出神奇的治疗效果。被誉为“天然维生素的宝库”和“绿色黄金”。