胎鼠海马神经元培养及其鉴定

目的建立胎鼠海马神经元体外培养方法,观察细胞生长情况,免疫组织化学染色鉴定神经元特异性.方法取胎鼠海马,分裂获得细胞悬液,接种于24孔板,经2 h差速帖壁去除成纤维细胞,将细胞液转移并继续培养,以获娶纯度较高的海马神经元.培养第5、11、15天观察细胞和突起生长情况,用NeuN抗体以免疫组化SP二步法染色鉴立神经细胞.结果培养头3 d.细胞生长缓慢,5 d时细胞开始生长,可见突起,11 d时突起连成网状.经Neun染色培养细胞呈阳性反应,证明是神经元.结论本方法获取生长良好,纯度较高的海马神经元.

不同培养基对成年大鼠心肌细胞形态、存活率、收缩功能的影响

目的研究不同培养基对成年大鼠心肌细胞形态、存活率和收缩功能的影响。方法本实验采用Langendorff装置行恒流灌流分离成年大鼠心肌细胞,分别用无血清M199、DMEM高糖、DMEM低糖三种培养基培养,比较培养24h和48h的细胞存活率(即杆状率)、形态和单个细胞收缩功能的变化。结果培养24h后,M199培养基中细胞存活率校正值(培养细胞杆状率/刚培养细胞杆状率)明显高于其他两种培养基(P<0.05),细胞平均长度(Length)、细胞缩短率(细胞收缩幅度/细胞原始长度)、达到峰值收缩时间(TTP)、50%舒张时间(R50)、90%舒张时间(R90)亦最接近新鲜分离心肌细胞;培养48h后,M199培养基中细胞Length、TTP、R50、R90各指标均明显优于其他两种培养基(P<0.05)。结论三种培养基培养成年大鼠心肌细胞M199对维持细胞的存活状态、形态和功能的效果最好。

血清体积分数对培养黑山羊成纤维细胞的影响

为了建立并完善吕梁黑山羊耳缘成纤维细胞培养体系,为进一步的克隆试验提供最佳生长状态的供体细胞,在常规培养液的基础上添加不同浓度的新生牛血清(0,5%,10%,20%,40%),每天在倒置显微镜下观察培养细胞的生长状态,并用台盼蓝染色法统计细胞数目,连续观察7 d,绘制生长曲线,比较不同血清体积分数的培养液对吕梁黑山羊耳缘成纤维细胞体外培养的影响。结果表明,吕梁黑山羊耳缘成纤维细胞虽然在不同血清体积分数的5组中均有生长增殖,但生长状态不同,差距较大;其中,10%的血清培养液试验组培养的细胞生长状况最好,细胞形态完整清晰,增殖快,数量多,更适合此细胞的生长。不同体积分数血清的培养液对成纤维细胞的生长具有一定影响,10%血清体积分数的培养液最适合吕梁黑山羊耳缘成纤维细胞的培养。结果可为进一步研究克隆、基因转染、构建基因文库等提供生物学材料。

大规模细胞培养中控制污染的举措

从人员培训、环境控制、百级台的无菌操作、原辅材料的管理等方面介绍了大规模细胞培养中避免污染的举措。