驴源马疱疹病毒8型ORF72基因原核表达及多克隆抗体制备

为了获得驴源马疱疹病毒8型ORF72基因编码的糖蛋白D(glycoprotein D,gD)和多克隆抗体,试验根据GenBank上公布的EHV-8 gD基因序列,设计了特异性引物,使用PCR方法扩增得到主要抗原区和跨膜区片段共960 bp,并构建pET-32a-gD960原核表达载体。将重组质粒pET-32a-gD960转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导并优化表达,获得gD重组蛋白,利用SDS-PAGE和Western-blot分析鉴定表达产物。使用包涵体蛋白纯化试剂盒纯化gD重组蛋白,并免疫小鼠,共免疫3次,每次间隔2周。三免2周后,通过Western-blot对鼠抗EHV-8 gD多克隆抗体进行鉴定,并使用间接ELISA测定其效价。结果表明:试验成功构建EHV-8 gD960基因表达载体并获得gD重组蛋白,gD重组蛋白分子质量约为65 ku,与预期大小相符,且特异性良好。小鼠血清中鼠抗EHV-8 gD960多克隆抗体效价为1∶16 000,该多克隆抗体可以与EHV-8 gD960蛋白发生免疫反应。说明成功表达了EHV-8 gD960重组蛋白并制备了多克隆抗体,多克隆抗体的效价较高,免疫原性较好。