神经生长因子(NGF)在母牛性腺及性腺外生殖器官中的表达研究

本研究旨在探讨神经生长因子(nerve growth factor,NGF)在母牛卵泡期及黄体期子宫、卵巢、输卵管3种组织中的表达情况。采用FQ-PCR方法和Western blotting技术对成年母牛卵泡期及黄体期的子宫、卵巢、输卵管中的NGF mRNA和蛋白质表达进行了检测。结果表明,NGF mRNA和蛋白质在卵泡期和黄体期的子宫、卵巢、输卵管中均有表达,且卵泡期子宫中NGF mRNA表达量显著高于卵泡期卵巢和黄体期输卵管中NGF mRNA表达量(P<0.05),其它组织间无显著差异。

生物活性肽制备方法的研究进展

生物活性肽具有许多重要的生理功能,如抗氧化、抗菌、抗癌、降血压、提高人体免疫力等,因此对活性肽的制备、结构与功能的研究具有重要的理论与应用价值。本文综述了生物活性肽的多种制备方法,包括溶剂提取法、酶解法、微生物发酵法、膜法分离技术、固相合成法和重组DNA技术生物合成法,旨在为深入研究活性肽及药品、保健品的开发利用提供条件。

禽呼肠孤病毒σNS非结构蛋白基因的克隆和表达

采用RT-PCR技术扩增了禽呼肠孤病毒(ARV)S1133株与广西分离株R2 σNS非结构蛋白基因,将σNS基因克隆到质粒表达载体pGEX-4T-1上,获得的重组质粒经PCR、酶切鉴定以及测序分析,σNS基因的插入位置、大小和阅读框均正确,将阳性克隆命名为pGEX-S1133-σNS和pGEX-R2-σNS.构建好的重组质粒经37 ℃ 1 mmol/L IPTG诱导、SDS-PAGE分析超声裂解后的上清和沉淀,显示目的蛋白以包涵体方式表达,其蛋白质分子质量约为66.2 ku,约占菌体总量的31.5%～34.8%.Western-blotting分析表明,目的蛋白能够与ARV阳性血清发生特异性反应,表明该重组蛋白具有较好的抗原性.

营养物质对基因表达的调控作用

营养物质作为调节基因表达的外部因子对基因表达起着非常重要的作用。作者综述了营养物质对基因表达调控的作用机制、调控方式及途径,并列出了几种营养物质对基因表达的调节作用。

抗间质上皮转化因子(c-Met)单价抗体的制备及生物学活性检测

目的用抗人间质上皮转化因子(c-Met)阻断型嵌合抗体ch3E1D7表达质粒构建单价抗体慢病毒穿梭质粒,利用慢病毒表达系统实现其在HEK293T细胞中快速表达,并对纯化后抗体的亲和力及中和活性进行检测。方法设计抗c-Met的单价抗体,命名为mono3E1D7,利用基因工程技术构建单价抗体三条链的慢病毒表达载体,磷酸钙法转染HEK293T细胞,表达的单价抗体经蛋白A琼脂糖4B亲和层析柱纯化,SDS-PAGE检测抗体完整性,ELISA检测单价抗体在体外阻断c-Met与其配体HGF结合的生物学活性。结果感染单价抗体慢病毒的HEK293T细胞上清纯化后,SDS-PAGE分析可见55 ku的重链、25 ku的轻链以及30 ku的杵状结构链(Knob)三条带。且纯化后的单价抗体能与c-Met抗原结合,同时还具有阻断c-Met与HGF结合的中和活性。结论成功获得抗人c-Met阻断型单价抗体。

贵州穿洞遗址1979年发现的磨制骨器的初步研究

贵州省普定县穿洞出土的骨器是穿洞文化的重要标志。1979年首次试掘出土的骨器基本为磨制者,类型主要有骨锥、骨铲、骨叉、骨棒及骨针等,多采用较厚的动物骨骼的碎片为原料加工而成。一次性出土数量如此多骨器的遗址在我国非常少见,为研究中国旧石器时代晚期文化的多样性提供了一个重要地点和一批有意义的文化遗物,并对研究我国旧石器时代骨器提供了丰富的材料,增加了我们对骨器工具的制造工艺及用途的了解。

抗人肝细胞生长因子受体单链抗体慢病毒载体的构建和应用

目的构建可表达抗人肝细胞生长因子受体(HGFR)单链抗体(scFv)的慢病毒表达载体,将其感染HEK293细胞,检测该抗体的表达及与抗原结合活性。方法采用反转录PCR(RT-PCR)从分泌小鼠抗人HGFR抗体的杂交瘤细胞株(8E8)中扩增VH和VL基因,用重叠延伸PCR法将VH和VL进行拼接,得到含有信号肽SP-VH-linker-VL的单链抗体基因(HGFR-scFv),将其插入克隆载体pCR-Blunt中。用内切酶将HGFR-scFv基因从pCR-Blunt上切下,插入慢病毒载体pRRL-CMV中,经相应酶切和测序鉴定,正确构建慢病毒表达载体pRRL HGFR-scFv。磷酸钙法转染HEK293T细胞,48 h后通过荧光显微镜检测绿色荧光蛋白(GFP)的表达,将获得病毒颗粒进一步感染HEK293细胞,RT-PCR和ELISA检测scFv的表达情况。结果抗人HGFRscFv的慢病毒表达载体构建成功,病毒颗粒感染HEK293细胞后,得到了可以稳定表达抗人HGFR-scFv的细胞系;ELISA结果表明,scFv能与人HGFR特异性结合。结论成功克隆了小鼠抗人HGFR抗体的scFv基因,并构建其慢病毒表达系统。

人转录因子sp1在大肠杆菌中的表达与体外纯化

目的:在大肠杆菌中表达人源转录因子sp1蛋白,并进行体外纯化。方法:首先将人源sp1真核表达质粒pCMV-sp1中的sp1 cDNA用限制性内切酶切开,连入原核表达质粒pET28b,构建原核表达重组质粒pET28b-sp1-699c;然后将重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达带His-Tag的融合蛋白His-sp1(88-786aa),通过包涵体的变复性和Ni-IDA亲和层析纯化后,SDS-PAGE鉴定纯化后的蛋白。结果:融合蛋白His-sp1在大肠杆菌内得到高效表达,纯化后可得到较高纯度的蛋白。结论:本研究获得了较高纯度的融合蛋白His-sp1,为进一步研究sp1蛋白对靶基因的转录调控奠定了基础。