矿泉水中粪链球菌的检测能力验证结果与分析

为提高实验室对矿泉水中粪链球菌的检测能力,确保其检测数据的准确性和可靠性,先采用国标方法计数,后采用传统微生物鉴定法、全自动微生物鉴定法和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(简称MALDI-TOF MS)3种方法对可疑菌进行鉴定。结果表明,3种方法均成功鉴定出粪链球菌,且样品23-A864和23-N843的Z值分别为-0.5和-0.1,满足要求。3种方法相互验证,其中基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法具有耗时短、效率高的优势。

一株沼泽红假单胞菌的分离与鉴定

目的分离与鉴定一株具有较高降解黄泔水能力的光合细菌。方法通过富集培养水塘污泥筛选光合细菌,经电镜观察其形态学特征、活细胞扫描以及碳源利用试验了解其生理生化特征,并通过16SrRNA的同源性比较,了解其序列保守性。结果从污泥中分离获得的一株光合细菌NS-04,革兰反应阴性,单个细胞为杆状至卵形,菌体大小为0.6～0.9μm×1.2～2.0μm,二分分裂,极生或亚极生鞭毛,片层状光合内膜,位于细胞质膜之下并与之平行,菌落为棕红色,光照厌氧和黑暗好氧条件下均可生长,菌体富含类胡萝卜素和细菌叶绿素a,能利用多种碳源,酵母膏对其生长有明显刺激作用,16SrRNA基因的分子系统学分析表明,该菌株与GenBank中的沼泽红假单胞菌标准菌株的同源性为97%。结论初步确定筛选出的菌种为沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)。

一种改进的纤维素分解菌鉴别培养基

以羧甲基纤维素钠和添加少量葡萄糖作为碳源,培养纤维素酶产生菌株,培养一定时间后,经刚果红染色和稀碱液固定,在菌落周围形成透明水解圈,根据透明圈的大小,快速定性鉴定纤维素酶产生菌酶活大小。与传统纤维素酶活检测方法比较,本方法菌丝生长快,两天后菌落经染色,透明圈边缘清晰,直观性强,与酶活力成一定的线性关系。

晚清书画裱件一株霉菌的鉴定及培养条件优化

对晚清书画裱件菌斑菌株复苏分离鉴定及培养条件优化.以改良马铃薯葡萄糖琼脂培养基、萨氏培养基和查氏培养基作为复苏培养基.采用三点植入法和插片法对菌株形态学观察,通过PCR扩增、测序、构建系统发育树对菌株进行分子生物学鉴定.结果成功复苏一株霉菌,菌株鉴定为篮状菌属,最佳培养条件为改良后PDA培养基,培养温度30℃,pH 6.0,震荡频率130 r/min.

嗜冷微生物和冷育微生物的研究——Ⅳ.冰箱中产生怪味的冷育微生物

由冰箱中存放的豆制品、猪肉、蔬菜等食品中分离到34株产生不良气味的细菌。它们都是革兰氏阴性细菌,经鉴定分别属于假单胞菌属、气杆菌属、产碱菌属、欧文氏菌属和沙门氏菌属。它们都可以在5℃以下生长,最高生长温度均高于30℃,故都是冷育细菌。经气相色谱分析,形成不良气味的原因是在细菌生长过程中,产生了硫化氢、氨和一些挥发性有机酸等代谢产物,不良气味即这些混合气林所致。

乳酸菌饮料中嗜酸乳杆菌的实时荧光定量PCR检测方法

目的:为快速准确检测乳酸菌饮料中的嗜酸乳杆菌,建立实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chainreaction,PCR)检测方法。方法:根据嗜酸乳杆菌NCFM的SPIDR保守区域设计特异性引物与探针,借助建立的实时荧光定量PCR方法进行特异性、灵敏度、重复性以及抗干扰能力验证,并利用模拟样品对方法进行检验,最后对市售的实际样品进行检测。结果:该方法的特异性较好;方法的绝对灵敏度达到3 pg,相对灵敏度达103 CFU/mL;重复性检测表明相对标准偏差在2.6%以下。同时进行杂菌干扰实验,在纯基因组水平和培养物水平混合大肠杆菌,扩增均无明显影响,表明建立的方法抗干扰能力较好。利用建立的实时荧光定量PCR方法对模拟样品进行检测并建立标准曲线,得出R^2为0.987,线性较好,可进行实际样品的检测。对市售的11份样品进行检测,其中6份含有嗜酸乳杆菌菌株,5份不含嗜酸乳杆菌菌株,标记嗜酸乳杆菌的样品全部检测出嗜酸乳杆菌且含量在5.83×10~2～3.68×1~04 CFU/mL之间。结论:建立的实时荧光定量PCR方法可快速、准确地检测出乳酸菌饮料中嗜酸乳杆菌。

不同进口白霉奶酪中优势霉菌分离鉴定及其凝乳酶酶学特性研究

通过传统形态学分析,采用碳源同化试验、氮源同化试验、水解蛋白、分解杨梅苷测定及分解脂肪试验,结合26S rDNA D1/D2分子生物学技术,对不同进口白霉奶酪样品中筛分出的生长优势霉菌进行菌种鉴定。在此基础上,采用乙醇分级沉淀法从优势霉菌菌种中分离提取凝乳酶,在不同温度、不同反应pH值、作用时间以及不同金属离子的条件下,通过脱脂奶粉凝乳法测定其活性。结果表明,白霉奶酪产品中筛选得到优势霉菌菌株对7种不同碳源中的5种均能利用,对4种氮源中的3种能够利用,能够水解蛋白质、分解脂肪,不能分解杨梅苷,目标菌株基因序列与数据库中Geotrichum sp.序列同源性高达99%以上,确定白霉奶酪中优势霉菌为白地霉。白地霉凝乳酶在45℃条件下酶活性达到(0.495±0.067)IMCU,在45℃和pH6.0条件下酶活性达到(0.613±0.043)IMCU,保温3~7 min酶活性稳定在[(0.536-0.613)±(0.031-0.043)]IMCU范围内。反应温度为45℃、pH6.0条件下作用3 min,Mg^2+和Cu^2+存在下酶活性分别提高43.6%和32.5%,达到(0.880±0.092) IMCU和(0.812±0.055) IMCU。确定白地霉凝乳酶最适反应温度为45℃、最适反应pH值为6.0、最佳稳定性为保温3~7 min、Mg^2+和Cu^2+对酶活性有较高促进作用。

新疆伊犁地区乳品中发酵菌种的筛选及产酸性能研究

通过传统分离方法从新疆伊犁州乳品中初步分离纯化出71株乳酸菌,其中具有明显产酸凝乳特性的乳酸菌8株,经生理生化鉴定以及16SrRNA序列比对分析,确定8株乳酸菌的种属分别为德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus)、开菲尔乳杆菌(Lactobacillus kefiranofaciens)、发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、乳酸明串球菌(Leuconostoc lactis)和粪肠球菌(Enterococcus faecalis)。对8株乳酸菌的生长性能、产酸性能、后酸化性能、感官特性等多个指标进行分析得出,德氏乳杆菌BSTS6-1、BSTS6-3、BSTS6-4生长速度快、产酸速率高,发酵乳风味纯正、组织形态良好且菌株后酸化能力弱,符合酸乳发酵菌种的基本特征。

茶树菇菌丝多糖发酵工艺优化

茶树菇(Agrocybe aegerita)富含抗癌多糖,一般以其子实体为材料进行提取获得多糖,而子实体生长周期较长,利用液态发酵得到的茶树菇菌丝多糖可以有效缩短生产周期。为提高菌丝生物量和菌丝多糖含量,该试验以茶树菇菌丝为材料,通过单因素试验及响应面试验对培养基的碳源、氮源、促生长因子,培养时间及摇床转速进行优化。结果表明,茶树菇菌丝多糖发酵的最佳培养条件为麦芽糖34 g/L、酵母提取粉21 g/L、MnSO_(4)2.0 g/L、KH_(2)PO_(4)2.5 g/L、MgSO_(4)1.5 g/L,pH6.0,摇床转速为130 r/min,培养时间为6 d。在此优化条件下,液态发酵生产的茶树菇菌丝生物量为7.65 g/L,菌丝多糖含量达3.73%。该结果可为液态发酵生产茶树菇多糖提供参考。

原料乳中嗜冷菌菌群多样性及分析方法研究进展

嗜冷菌是原料乳中主要危害性腐败菌群之一,其种类繁多,菌群结构和多样性受到多种因素影响,这为原料乳中优势嗜冷菌的鉴定带来了困难。结合国内外文献,综述了储藏温度、储藏时间、地域和季节等因素对原料乳中嗜冷菌菌群结构和多样性的影响,原料乳中嗜冷菌可能的外界来源。评述了高通量测序、随机扩增多态性DNA、变性凝胶电泳等现代分子生物学技术在研究原料乳中嗜冷菌菌群结构和多样性相较于传统方法的优势以及所存在的技术难点。

CRISPR技术对发酵乳制品中嗜酸乳杆菌的检测应用

借助CRISPR-HOLMES系统,以市售酸奶作为检测对象,检测了其中的嗜酸乳菌含量.结果表明:CRISPR技术可作为一种有效直观的方法实现对发酵乳制品中嗜酸乳杆菌的定性检测.

产纤维素酶细菌的筛选及其产酶优化

利用刚果红染色法筛选产纤维素酶菌株,采用分子生物学技术和形态学观察作为鉴定手段,通过滤纸条崩解实验测定实际降解能力。以葡聚糖内切酶活(CMCase)和滤纸酶活(FPase)为指标,进行单因素和响应面试验优化。结果表明,获得一株产纤维素酶细菌(Xh-12),鉴定为不动杆菌属,发酵培养7 d后对滤纸条的减重率可达54.4%。在接种量1.5%、温度39℃、pH=6.7的最优培养条件下,CMCase活力为1.05 U/mL,FPase活力为0.76 U/mL,具有较高酶活力。

真丝文物霉变菌株的分离、鉴定及防霉药剂筛选

中国的桑蚕丝织业延绵千年,真丝文物记载了中国作为丝绸古国的辉煌历史,对中国古文化及古工业的研究都具有重要意义。而真丝文物在出土及保藏过程中极易遭受霉菌污染,严重影响文物的研究展示和文化价值的传承,成为各大博物馆和研究所的困扰。通过对真丝文物霉变菌株的分离及鉴定,可以了解真丝文物霉菌污染现状,为真丝文物的防霉控制提供靶标菌株。筛选真丝文物防霉处理剂可为探索真丝文物防霉控制方法提供新的思路,促进真丝文物防霉新技术的开发。本研究从苏州丝绸博物馆霉变真丝文物中分离纯化得到4株霉菌,分别编号为A、D、H、K。采用点植法培养真丝霉变菌株单菌落,观察其菌落特征和培养特性,通过显微观察法记录分生孢子形态、大小等显微结构,结合分子生物学方法构建系统发育树,对真丝文物霉变菌株进行鉴定。同时采用牛津杯法测试3-碘-2丙炔基-N-正丁基氨基甲酸酯(IPBC)、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮(MIT)、苯并异噻唑啉-3-酮(BIT)、聚六亚甲基单胍磷酸盐(PHMG)4种防霉剂对4株真丝霉变菌株的抑菌活性。结果表明:4株霉菌分别属于半知菌类丛梗孢目的3个属:曲霉属(Aspergillus),节孢霉属(Arthrinium)及芽枝霉属(Cladosporium),其中A属于节孢霉属,D属于曲霉属,H、K属于芽枝霉属。防霉剂毒力测试结果表明,不同菌株对不同防霉剂的敏感性不同。MIT及IPBC对真丝文物霉变菌株有良好的抑制效果,其中MIT对4株霉菌的抑菌活性最为明显,对A、H及K菌株的毒力均优于其他3种防霉剂,对D菌株的毒力仅次于IPBC,EC_(50)分别为56.2355 mg/L、292.1737 mg/L、190.0456 mg/L及62.6815 mg/L;IPBC的综合毒力仅次于MIT,对菌株D的毒力最高,EC_(50)分别为250.2830 mg/L、27.4540 mg/L、480.3257 mg/L及997.2392 mg/L。PHMG及BIT对4株真丝霉变菌株的抑菌活性相对较低。本研究通过对真丝文物霉变菌株的鉴定及防霉药剂的筛选,明确了4种真丝文物霉变菌株的生物学归属,确定了2种高效防霉处理剂,为真丝文物防霉手段的开发提出了新的可能,对进一步探究如何抑制真丝文物表面的霉菌生长,降低霉菌污染的危害,延长真丝展品及文物的保存提供了有效依据。

抗肺炎克雷伯氏菌的北冰洋来源菌株的筛选与鉴定

采用稀释涂布平板法从北冰洋海泥样品中分离纯化海洋微生物,采用平板划线法对肺炎克雷伯氏菌拮抗菌株进行初筛,再采用琼脂扩散法进行复筛,并通过形态学观察、生理生化试验结果和分子生物学测序技术对其进行菌种鉴定,最后研究其抑菌谱。结果表明,从北冰洋海泥样品中共分离纯化出114株微生物,经过初筛,得到12株有抑制效果的拮抗菌,复筛出1株对肺炎克雷伯氏菌有最好抑制效果的菌株,抑菌圈直径达(22.21±0.37)mm,编号为NO.98,经鉴定为死谷芽胞杆菌(Bacillus vallismortis)。NO.98对大肠杆菌、铜绿假单胞菌、屎肠球菌、鲍曼不动杆菌和沙门氏菌均具有一定的抑制作用,具有较广的抑菌谱。

地表水粪大肠菌群检测用纸片快速法和多管发酵法比较

新的监测方法如纸片快速法被提出用于水质样品的粪大肠菌群的测定,该方法与经典的多管发酵法在实验时间、培养基和人力物力方面都有优势和差异。在对国家地表水环境质量监测网的19个点位水样进行纸片快速法和多管发酵法检测,发现两种方法结果间有显著性差异,纸片快速法结果略低,但两种方法间也有显著相关性。在用有证标准样品进行精密度和准确度检测时,两者均无显著性差异。