甘南地区青贮牧草耐低温乳酸菌的筛选与鉴定

为筛选出适宜高寒地区低温青贮的优良乳酸菌菌株,本试验从箭筈豌豆(Vicia sativa)、小黑麦(Triticosecale wittmack)和燕麦(Avena sativa)3种牧草青贮饲料中分离乳酸菌菌株并通过低温控制培养及产酸试验进行筛选,对菌株进行形态、生理生化鉴定及16S rDNA同源性分析。结果表明,从3种牧草青贮牧草分离纯化得到42株乳酸菌,筛选得到具有较强低温生长能力和产酸能力的10株耐低温乳酸菌,其中7株为同型发酵乳酸菌,3株为异型发酵乳酸菌,10株菌株都具有较好的耐酸性、耐盐性和耐温性,经同源性测序分析菌株GN1,GN3和GN10为植物乳杆菌(Lactiplantibacillus plantarum),菌株GN2,GN4和GN7为短乳杆菌(Levilactobacillus brevis),菌株GN5和GN6为弯曲乳杆菌(Latilactobacillus curvatus),菌株GN8和GN9为清酒乳杆菌(Latilactobacillus sakei subsp.)。结合耐低温乳酸菌产酸能力、低温生长能力和生理生化特性等多种结果综合考虑,植物乳杆菌GN1,GN3和GN10及短乳杆菌GN7适宜作为高原地区低温青贮发酵的备选菌株。

干酪乳杆菌YG-01株的益生特性及抑菌活性研究

[目的]评价从奶酪中分离出的干酪乳杆菌YG-01的益生性及抑菌活性,为该菌株在食品动物生产中的应用提供理论参考。[方法]本研究分别检测干酪乳杆菌YG-01株的药物敏感性、肠道定植能力、消化道环境耐受特性、肠道菌群调节作用、抑制肠道致病菌活性及促生长作用。[结果]药敏试验结果显示,干酪乳杆菌YG-01对米诺环素、红霉素、克拉霉素、克林霉素、青霉素等常见抗生素极敏感;利用探针(carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester, cFDA-SE)标记的干酪乳杆菌YG-01灌喂试验兔,口服后第1天,干酪乳杆菌YG-01在兔空肠、回肠和结肠的检出率分别为70.9%、59.3%和66.0%,口服后第11天时仍保持较高定植水平(>35%);干酪乳杆菌YG-01的活菌数在模拟胃液(pH为2.5、3.5、4.5)、模拟肠液、胆酸盐浓度<2 g/L及在9%NaCl溶液中均高于1×105CFU/mL;体外抑菌试验结果显示,干酪乳杆菌YG-01能显著抑制大肠埃希菌O157、小肠结肠炎耶尔森菌、沙门菌、志贺菌、副溶血弧菌等肠道致病菌生长,而对益生菌罗伊乳杆菌无抑制作用;口服干酪乳杆菌YG-01能极显著提高兔的平均日采食量和平均日增重,还可显著抑制厚壁菌门和疣微菌门细菌增殖。[结论]干酪乳杆菌YG-01株具有良好的益生性,可显著抑制肠道致病菌的增殖,改善食品动物生长性能,为开发基于干酪乳杆菌YG-01株的微生态制剂奠定了基础。

肠膜明串珠菌HDE1的分离鉴定及其胞外多糖抗氧化和牛奶凝结特性研究

为了拓展产乳酸菌胞外多糖的来源,获得来源明确、产量稳定、具有优良生物学特性的乳酸菌胞外多糖。本研究从自制橘子发酵液中利用产黏菌落法分离筛选得到一株高产胞外多糖的乳酸菌,综合形态学观察及16S rDNA序列分析结果、API 50 CHL试验,对其进行鉴定,利用抗氧化及牛奶凝结试验研究了该乳酸菌胞外多糖的抗氧化及牛奶凝结等特性。结果表明,本研究获得了一株肠膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides),该菌株16S rDNA序列片段长度为1444 bp,GenBank登录号为OM302141。菌株HDE1胞外多糖的总糖、蛋白质、糖醛酸含量分别为41.73%±1.74%、0.29%±0.03%和7.69%±0.42%。该胞外多糖在浓度为3 mg/mL时展现出良好的抗氧化活性,当胞外多糖浓度为5 mg/mL时DPPH自由基清除能力达到50.00%±0.05%,ABTS+自由基清除能力达到40.00%±0.02%,H_(2)O_(2)^(-)自由基清除能力超过了50%,羟基自由基清除能力达到49.96%±0.03%,胞外多糖的总还原力为38.82%±0.09%。牛奶凝结研究结果表明,HDE1在36 h能够使添加3%(w/v)蔗糖的脱脂牛奶完全凝结。这些结果表明菌株HDE1胞外多糖具有良好的抗氧化和牛奶凝结特性,在食品、医药及益生领域展现出良好应用潜力。

耐低温高产氨肽酶乳酸菌株的筛选及氨肽酶提取方法的优化

以吉林长白山区特色发酵酱菜为原材料,筛选获得160株乳酸菌,通过检测菌株的耐低温能力、产酸能力、耐酸耐胆盐能力、菌株自溶度等指标筛选出4株具有优良性能的耐低温乳酸菌,其中3株具有较强的蛋白水解能力。利用溶菌酶和高速离心破碎菌体,提取粗酶液,以Glu-ρ-NA为底物筛选出菌株106为高产氨肽酶菌株,酶活为14.56 U/mL。经形态学鉴定和16S rDNA分析,确定菌株106为植物乳杆菌,命名为植物乳杆菌106。本实验筛选到的植物乳杆菌106不但具有产酸、耐酸耐胆盐等特性,还具有耐低温、高产氨肽酶的特性,本研究结果为缩短切达干酪快速成熟时间和降低切达干酪成熟过程中的苦味提供了优良菌株来源,具有非常重要的应用价值。

基于微生物转化得到7β,15α-二羟基-18β-甘草次酸的优良菌株筛选

目的以7β,15α-二羟基-18β-甘草次酸为目标产物,通过微生物转化筛选优良菌株。方法使用10种真菌(CGMCC 3.149、CGMCC 3.193、CGMCC 3.3402、CGMCC 3.739、CGMCC 3.2462、CGMCC 3.2886、CGMCC 3.3400、CGMCC 3.577、CGMCC 3.970、Zw-4)进行转化菌株的初筛和复筛实验,采用高效液相色谱法测定转化液中7β,15α-二羟基-18β-甘草次酸含量,将7β,15α-二羟基-18β-甘草次酸转化率作为评价指标,选择转化率较高且初筛和复实验结果一致的菌株作为优良菌株。结果7β,15α-二羟基-18β-甘草次酸在2.56~81.79μg/ml范围内呈良好的线性关系;初筛实验中转化率最高的菌株是CGMCC 3.3400;复筛中转化率最高的菌株是CGMCC 3.970。结论优良菌株为CGMCC 3.970。

基于复合诱变选育高抑菌活性植物乳杆菌

为了获得高抑菌性能的乳酸菌,以植物乳杆菌DY6为出发菌株,首先对其进行常压室温等离子体(atmospheric room temperature plasma,ARTP)和亚硝基胍(nitrosoguanidine,NTG)的复合诱变,获得了抑菌活性较强的诱变菌株AN-55、AN-58及AN-68,其抑菌活性分别提高了19.83%、21.91%和18.40%。随后,经遗传稳定性实验发现菌株AN-55的抑菌性能更加稳定,8次传代后其抑菌活性较野生型菌株仍能提高20.51%。与此同时,菌株AN-55的基因组重测序结果表明,plnK、cps4G、pts9D等基因序列的改变可能对提高菌株抑菌活性有重要影响,为植物乳杆菌在天然防腐剂和抗生素替代物的应用奠定了理论基础。

一株乳酸菌产类细菌素Enteriocin LK-S1的初步研究

从鸡肠道分离的 5 9株乳酸菌中 ,筛选出一株产类细菌素的乳酸菌 ,编号为SE - 81.初步鉴定为肠球菌属 (Enterococcus) .在排除有机酸和过氧化氢的干扰作用后 ,SE - 81菌株对溶壁微球菌(Micrococcuslysodeikticus)、金黄色葡萄球菌 (Staphylococcusaureus)和枯草杆菌 (Bacillussubtilis)等革兰氏阳性菌和大肠杆菌 (Escherichiacoli)及鼠伤寒沙门氏菌 (Salmonellatyphimurium)等革兰氏阴性菌有强烈的抑制作用 .用胰蛋白酶处理发酵上清液后 ,抑菌活性丧失 .因此初步认为该菌株产生一类具有广谱抑菌活性的类细菌素物质 ,命名为EnteriocinLK -S1.它具有较广的抗菌谱 ,作用pH在 4 .0～ 6 .0 ,有很好的热稳定性 .

嗜酸乳杆菌发酵代谢产物分析

气相色谱分析表明，乳酸菌素片生产菌的发酵上清液及药品成品—乳酸菌素粉和乳酸菌素片含有大量乳酸及一定量的丁酸（ 或异丁酸） 、乙酸、正反丁烯二酸、六碳脂肪酸、微量丙酸、琥珀酸及微量抗菌多肽。它们不仅对革兰氏阳性菌，而且对革兰氏阴性菌有不同程度抑制作用。乳酸菌素片医治某些肠胃病的机理正是发酵产生的这些有机酸等代谢产物及发酵后的乳酸菌死菌体及其碎片的作用。

酸奶发酵剂和乳酸菌生物技术育种

由新鲜牛奶制成的酸奶由于其丰富的营养、特殊的风味、爽滑的质构和良好的生理功能 ,倍受人们青睐。对酸奶乳酸菌的微生物种类、功能及其组成的酸奶发酵剂进行了综述 ,并简要介绍了乳酸菌生物工程育种方面的研究进展及酸奶乳酸菌研究领域一些令人感兴趣的课题。

产胆盐水解酶乳酸菌的分离、鉴定及降解胆固醇机理的初步研究

本文从开菲尔粒中分离出15株能降低胆固醇的菌,通过生理生化反应以及其他指标对这15株菌株进行鉴定,其中7株为球菌,8株为杆菌。对这15株菌进行复筛,最终筛选出一株能产胆盐水解酶的菌株,用全自动生化鉴定仪对这株菌做进一步的鉴定,其鉴定结果为干酪乳杆菌。

乳酸菌的分离、鉴定及其生长特性

从动物粪便中分离乳酸菌 ,得到产酸快、代谢物抑菌活性强的乳酸菌菌株共 6株。其中 O- 2菌株的产酸、抑菌、耐酸、耐胆盐和生长性能都优于其他菌株 ,是一株有潜质的有益菌菌株 ,经鉴定表明为乳杆菌。不同的营养配比的液体培养基进行发酵实验表明 ,R2培养基配料简单 ,成本低 ,发酵 2 4h产生的菌体总数多 ,48h培养液的抑菌活性强 ,且其抑菌活性具有一定的热稳定性。

2株猪源乳酸菌对低pH值和胆盐耐受性及热稳定性研究

研究了分离自仔猪肠道的乳酸菌L5和L7对低pH值、胆盐的耐受性。结果表明,pH值在2.5、3.5 和4.5时,L5菌株处理1 50 min对其无显著影响,在pH 1.5时经30 min处理,L5仍可维持较高的存活率;L7菌株在pH 3.5和4.5条件下经150 min处理后可保持较高的存活率,而在pH 1.5和2.5条件下经处理30 min后菌株数量显著下降。胆盐对L5和L7菌株的生长有一定影响,但低浓度短时间内影响较小。在同一胆盐浓度下,随培养时间的增长,活菌数下降。当胆盐浓度高于0.2%时,L5和L7菌株的生长极差。热稳定性试验结果表明,L5菌株在50℃下可成活,且呈正常生长趋势,但其对80℃及以上的耐热能力显著降低。

乳酸菌计数培养基和培养方法的筛选

对保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌活菌计数的培养基和培养方法的研究结果表明 ,采用保加利亚乳杆菌选择性培养基的双层平板法和酸化的 MRS培养基的试管法可对保加利亚乳杆菌进行选择性计数 ;采用 MRS培养基的双层平板法和 MRS培养基的试管法可对嗜热链球菌进行选择性计数 ;采用改进的 MRS和西

藏灵菇中高产胞外多糖乳酸菌的筛选及其发酵性能的研究

本研究采用高通量筛选技术和苯酚-硫酸法获得高产胞外多糖的乳酸菌菌株,并对其发酵性能和酸奶品质进行测试。筛选的八株菌均具有高产胞外多糖和良好的发酵性能。其菌种鉴定结果是:菌株KT_x、KL_1、J_1为干酪乳杆菌(Lactobacillus casei),菌株T_x为嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus),菌株KS_4、J_4、P_1、P_5为乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp．lactis),其中嗜热链球菌Tx制备发酵剂的粘度最高,凝乳时间最短,感官综合评分最高,可利用此菌株进一步开发研制具有良好稳定性的功能性酸奶。

产共轭亚油酸乳酸菌的筛选及产物分析

为获得共轭亚油酸 (CLA)乳酸菌的菌种 ,从酸菜汁中筛选出 1株CLA生成能力较强的的乳酸菌 ,发酵液中CLA生成量为 2 6 7 5 μg·mL-1。此株为革兰氏阳性杆菌 ,过氧化氢酶阴性 ,4 5℃下生长 ,15℃基本不生长。基于生化试验和培养基成分的利用情况 ,鉴定为植物乳杆菌Lactobacillusplantarum。经气相色谱检测 ,该菌种合成的CLA产物为c9,t11/t9,c11 CLA和t10 ,c12 CLA的混合物。

中国酱油发酵酱醪中嗜盐四联球菌的鉴定

从采用传统露天酿造工艺的中国酱油发酵酱醪中分离筛选嗜盐乳酸球菌,对其进行形态、生理生化特性研究及16S rDNA序列分析,在此基础上确定其分类地位,为研究其在酱油酿造中的作用奠定基础.研究结果表明,筛选菌株为四联球型,革兰氏染色阳性,不运动;接触酶反应阴性,能从葡萄糖产酸而不产气;NaC l含量为18%的培养环境下乳酸产量达2.2%;基于16S rDNA序列的系统发育分析表明筛选菌株与嗜盐四联球菌的亲缘关系最近,从而初步确定其为嗜盐四联球菌.

唾液链球菌嗜热亚种LCX2001胞外多糖合成条件的研究

从众多的用于乳酸菌生长的合成和半合成培养基（ＭＲＳ、Ｍ１７、ＡＴＰ、ＳＬ、Ｅｌｌｉｋｅｒ、ＳＤＭ），选择了ＡＴＰ作为唾液链球菌嗜热亚种 ＬＣＸ２００１胞外多糖产生的基本培养基，在此基础上开发了 ＬＣＸ合成培养基，并对碳源、培养基的初始ｐＨ、发酵温度和发酵时间进行了探讨。该菌生物合成ＥＰＳ的工艺条件为：葡萄糖和／或乳精是该菌株合成ＥＰＳ的合适的碳源，添加量为２０ｇ／Ｌ，培养基的初始ｐＨ值为６．５，发酵温度为３５℃，发酵时间为２０ｈ。

不同来源乳酸菌的耐酸耐胆盐试验

试验从健康猪(非哺乳期仔猪)、鸡及传统乳制品中分离到30株乳酸菌,镜检、生化鉴定后对其中的6株高性能菌株进行耐酸耐胆盐试验。结果显示,所分得的30株乳酸菌中18株为乳杆菌,其余12株为乳球菌;LS和LJ2菌株在pH 2.0环境下的存活率分别为135%和124%;LZ1株在pH 3.0环境下的存活率为137%;LJ1株对猪胆盐有较高耐受能力,LT株对牛胆盐有较高耐受能力。这些高生存性菌株的获得有助于进一步研究乳酸菌的益生特性,也可以作为功能性菌株深入研究。