ToMMV病残体中病毒存活力及其传病作用

因番茄斑驳花叶病毒(ToMMV)寄主范围广,传染性和致病力强,以ToMMV为对象,对其产生的植株病残体进行了病毒分布和存活时间检测、侵染活性分析以及传毒作用测试。结果表明:烟草植株病残体的叶、茎、根中均含有病毒,ToMMV可在病残体存活较长时间,病死枯叶室温存放90 d后病毒依然存在,且仍保持侵染活性,刀片刮划枯叶模拟农事操作接毒后发现病残体具有传毒作用;ToMMV可在病残体中长时间保持侵染活力,田间病残体很可能会成为下茬作物的初侵染源;土壤无直接传毒作用,但混有病残体的土壤也可成为初侵染源,且沾染在农具表面的离体病毒依然可以在一定时间内维持侵染活力,成为潜在的初侵染源。综上,清除植株病残体(减少初侵染源)是预防和控制ToMMV传播和扩散的重要环节,生产上应给予充分重视。

深州蜜桃果实中的病毒和类病毒检测

为了确定侵染深州蜜桃的病毒和类病毒种类,利用RT-PCR和qRT-PCR的方法对侵染桃树的7种病毒和类病毒进行了检测。RT-PCR病毒鉴定结果表明,深州蜜桃感染了苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)、李树皮坏死茎纹孔伴随病毒(PBNSPaV)、李属坏死环斑病毒(PNRSV)和啤酒花矮化类病毒(HSVd),在深州蜜桃果实中没有鉴定到李矮缩病毒(PDV)、樱桃绿环斑驳病毒(CGRMV)、杏假褪绿叶斑病毒(APCLSV)。qRT-PCR检测结果进一步表明李属坏死环斑病毒(PNRSV)侵染了深州蜜桃,其病毒RNA表达量最低。利用RT-PCR开发出高效的多重检测体系,能够同时检测ACLSV,PBNSPaV和HSVd病毒。

新德里番茄曲叶病毒西瓜分离物的全基因组序列测定及分析

从上海采集到表现卷叶和黄化症状的西瓜病叶,为明确其病原类型,本研究提取病叶RNA并进行小RNA高通量测序,经序列拼接比对和斑点酶联免疫吸附试验(dot-enzyme linked immunosorbent assay,Dot-ELISA),证实病样感染新德里番茄曲叶病毒(tomato leaf curl New Delhi virus,ToLCNDV)。进一步通过滚环复制(rolling circle replication,RCR)富集DNA,利用背靠背引物进行聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增,获得2个ToLCNDV西瓜分离物的DNA-A和DNA-B全长序列,暂命名为ToLCNDV SH-WM1和ToLCNDV SH-WM2。使用MEGA 11.0、SDT v1.2等软件进行系统进化分析,结果表明,ToLCNDV SH-WM1与ToLCNDV SH-WM2及已报道的ToLCNDV其他中国分离物的亲缘关系较近,其全核苷酸序列相似度为98.99%~99.70%。全基因组多态性分析及群体变异分析显示,ToLCNDV中国分离物的单核苷酸变异率小于3%,其中,同义突变位点46个,非同义突变位点29个,不存在插入或缺失突变,各个编码蛋白中AC4蛋白氨基酸序列最为保守。本研究揭示ToLCNDV中国分离物具有较低的种内遗传变异。

马铃薯病毒一步法RT-PCR诊断研究

运用一步法RT-PCR对马铃薯和烟草中的马铃薯X病毒、马铃薯Y病毒和马铃薯卷叶病毒进行了检测,实验表明:对酚-SDS方法提取的病毒核酸进行扩增,一步法RT-PCR检测到的扩增产物的灵敏度较两步法RT-PCR的高100倍左右.两种提取方法对比,用一步法RT-PCR进行扩增,检测到的PEG法扩增产物的灵敏度较酚-SDS法扩增产物的灵敏度高3倍.建立了快速、简便、灵敏度高、特异性强的马铃薯病毒一步法RT-PCR检测技术.

贝母-中国百合斑驳病毒的新宿主(英文)

贝母球茎是药用原材料.在田间,每年因未知病原菌的侵染而使其产量变化很大.首次报道采用reverse-transcriptionpolymerasechainreaction(RT-PCR)证实贝母(Fritillariathumbergii)是lilymottlevirus(LMoV)的寄主.本方法可用于植物病毒的流行性检测.

马铃薯病毒研究新进展

马铃薯病毒作为影响马铃薯产量的主要因素,备受研究者的青睐。国际上对马铃薯病毒结构、检测手段的研究,逐渐从病毒形态学研究转到病毒基因组学及功能组学的研究。伴随着测序技术的不断发展,目前已有14种马铃薯病毒全基因测序完成,对马铃薯病毒种属鉴定、检测技术、基因结构和功能、复制与转录、传播及抗病毒的研究有了最新的进展。本文就上述研究给予总结,对14种马铃薯病毒进行了进化树分析,同时对马铃薯病毒蛋白质组学和代谢组学进行展望。

抗病毒蛋白抑制植物病毒的应用前景

探索应用外源性抗植物病毒蛋白进行植物病毒病的防治,已经取得了一定的成效;但不同来源的抗植物病毒蛋白,它们的作用机理是不完全一样的.根据近年的研究结果,对这类蛋白的抗病毒作用的机理进行了综述,并对抗病毒蛋白的应用前景进行了展望.

植物中转录后基因沉默的启动、传导与抑制

转录后基因沉默 (post-transcriptionalgenesilencing,PTGS)首次在转基因植物中被发现 ,后来在自然植物和其他生物中如动物、线虫、真菌等都有相关的报道 ,这表明PTGS是生物界中普遍存在的现象 .由于PTGS与植物中RNA介导的病毒抗性具有相似性 ,以及PTGS在植物基因组功能分析中的应用 ,因此 ,近年来PTGS在植物中特别是在转基因植物中得到了广泛的研究 .为了深入对PTGS进行研究 ,就植物中PTGS启动的因子、启动的机制 ,PTGS系统传导的信号物质。

甜菜黑色焦枯病毒外壳蛋白与病毒致病性的关系

利用RT-PCR方法,构建获得了由T7RNA聚合酶启动子驱动的甜菜黑色焦枯病毒(BBSV)全长cDNA克隆pUBF52.摩擦接种苋色藜(Chenopodiumamaranticolor)后,体外转录产物可导致与野生病毒相同的枯斑症状,蛋白质印迹和RNA印迹检测也都证明了转录产物的侵染活性.构建了BBSVp24基因的原核表达载体pECP1,转化大肠杆菌BL21后的诱导表达产物能够与BBSV的抗血清呈现特异性反应,表明该基因编码产生BBSV的外壳蛋白(CP).以pUBF52为模板,分别构建了BBSVCP基因的移码突变体和不同程度的缺失突变体.侵染性检测表明,CP基因的移码突变对BBSV在苋色藜上所导致的枯斑症状及病毒RNA在寄主体内的积累基本没有影响,但CP基因的大部或完全缺失会使体内病毒RNA的积累水平大大降低,其中CP基因完全缺失的突变体转录物接种苋色藜后仅能够产生很轻的枯斑症状.将绿色荧光蛋白(GFP)基因和葡糖苷酸酶(GUS)基因分别与BBSVCP基因的5′端融合,构建了表达载体pBGFP和pBGUS.摩擦接种苋色藜叶片后可观察到GFP或GUS基因的表达,为探索利用BBSV作为外源蛋白的表达载体奠定了基础.

西瓜花叶病毒外壳蛋白基因的克隆与原核表达

利用RT—PCR方法获得了西瓜花叶病毒（WMV）陕西分离物外壳蛋白（CP）基因，大小为843bp．将CP基因克隆到pMD18-T Simple Vector，测序分析发现与各个国家CP核苷酸和氨基酸同源性分别为93．0％～95．0％和96．5％～98．6％．将CP基因定向插入EcoR Ⅰ／Sal Ⅰ切开的pET30a中，构建了原核表达载体pET30-WCP，转化大肠杆菌BL21．经IPTG诱导2～8h后，成功表达了分子量约为37kD的CP蛋白．通过不同时间诱导发现，加入IPTG4h后蛋白开始表达，8h后表达量比较大．以诱导的蛋白为抗原免疫家兔，制备了WMV CP抗血清，ELISA法测其效价为1／6400，Western blot分析能与CP发生血清学反应．

决明子提取物对植物病原菌的抑菌活性初探

用中药决明子的乙醇提取物及氯仿提取物对核盘菌(Sclerotinia)、镰刀菌(Fusarium)、柑桔绿霉(Penicillium)、棉花炭疽病菌(ColletotrichumgossypiiSouthw.)等10余种植物病原菌进行抑菌活性筛选研究。结果表明,中药决明子乙醇提取物与氯仿提取物对镰刀菌、弯孢菌、油菜菌核病菌、金黄色葡萄球菌和棉花炭疽病菌都有一定的抑菌作用,其中对油菜菌核病菌和棉花炭疽病菌的抑制效果较好,抑菌率达53%和62%。

甘蔗杆状病毒基因组片段整合入杂种甘蔗基因组的证据

为研究甘蔗杆状病毒Sugarcane bacilliform virus(SCBV)的基因组片段是否整合进杂种甘蔗Saccharuminter-spec ific hybrids基因组,以采自广西甘蔗研究所的1株杂种甘蔗植株叶片总DNA为模板,根据已报道的甘蔗杆状病毒基因组序列设计多条特异引物.经PCR扩增、产物克隆及序列分析,获得1个全长为5 364 bp的核苷酸序列.该序列具有SCBV基因组结构特征,含有2个完整的ORF,与GenBank中已报道的2个SCBV分离物之间的核苷酸及氨基酸序列同一性均大于70%,但该序列与完整的SCBV基因组全序列相比,不具备完全的ORF3,缺失了对病毒复制过程极为重要的功能性基因RNase H的序列区段.通过Southern-b lot杂交分析,初步推测其为一段整合入杂种甘蔗基因组中的SCBV基因组序列.

高通量测序技术在植物病毒分类中的应用

植物病毒寄生可引起植物病毒病,甚至对植物造成毁灭性伤害.高通量测序技术(high-throughput sequencing, HTS)提供了一种快速、低成本、深度测序的解决方案,在病毒鉴定、新病毒检测和病毒基因组多样性等研究中具有优势,促进了植物病毒分类的研究.本文概述了HTS技术检测病毒的进展、在植物病毒学领域应用案例和该方法检测病毒的优缺点,旨在说明HTS技术对病毒鉴定、新病毒发现和病毒分类的重要贡献,提出新病毒检测和鉴定是亟待解决的问题,为植物病毒病的预防提供参考.

病毒诱导基因沉默的研究进展

对病毒诱导的基因沉默(VIGS)的发现、载体的开发、作用机理和优势的研究,以及VIGS在植物基因功能鉴定上的应用和展望进行了综述.

逆转录—聚合酶链式反应技术检测“歇马杏”李矮缩病毒

为选择不携带主要病毒的植株,利用作者已建立的PDVRT-PCR检测体系对辽宁省大连市地方特产“歇马杏”田间植株携带PDV的情况进行了调查,结果表明,被检植株PDV的感染率达90%,但程度不同。

植物抗病毒机制研究进展

植物病毒病是一类严重影响植物生长和危害农作物生产的重要病害。病毒虽然结构简单,却变异复杂,所以一直给农业发展带来持续性的挑战。植物的先天免疫系统和RNA沉默是两种比较保守的抗病毒机制。植物的先天免疫系统包括两层,第1层是病原的相关分子模式触发的免疫,能够阻碍病毒等病原物入侵植物细胞;第2层是病原效应物触发的免疫,植物抗性蛋白能够识别病原物释放到植物细胞中的效应蛋白。这两层免疫系统的功能行使依赖于细胞膜上和细胞内的免疫受体蛋白。当病毒成功侵染植物细胞后,病毒的核酸需要利用植物的蛋白质合成系统完成自我复制,RNA沉默介导的植物抗病毒机制在此过程发挥重要的作用。病毒侵染的植物细胞内会产生病毒来源的小分子RNA(vsiRNA)。vsiRNA既可以靶向病毒RNA也可以靶向宿主转录本,引起转录后基因沉默(PTGS),也可以通过DNA甲基化、异染色质化,引起转录基因沉默。围绕先天免疫系统和RNA沉默介导的两种保守的植物抗病毒机制进行综述,旨在更好地理解植物与病毒之间的互作关系,为利用基因工程培育抗性品种和发展更有效的病毒防御策略提供思路。

利用马铃薯X病毒表达载体在植物中表达非洲猪瘟病毒p30蛋白

由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的非洲猪瘟疫病(ASF)具有极高发病率和致死率,是我国一类动物疫病,对我国养猪产业造成重大威胁和巨大经济损失。p30蛋白是ASFV最主要结构蛋白之一,具有强烈免疫原性,是ASFV疫苗研发重要靶标。利用马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)侵染性克隆,构建表达p30蛋白重组PVX载体,通过农杆菌浸润法验证在模式植物本氏烟中表达p30蛋白可行性。结果表明,重组PVX载体接种本氏烟后5 d,植株系统叶片出现花叶症状;接种11 d后,植株系统叶片明显坏死。RT-PCR和Western blot检测表明p30蛋白在本氏烟中成功表达。研究结果为进一步规模化生产植物源p30蛋白奠定坚实基础。

诺丽花叶病及其病原鉴定

主要介绍了近年来诺丽植株严重花叶病的发病特征、病毒病原鉴定方法、昆虫传播媒介,并提出相应的防控建议与措施,为有关政府部门和种植户提供重要科学信息。

香蕉束顶病毒基因组和编码蛋白的研究进展

香蕉束顶病毒是一直径约为 18～ 2 0nm的等轴病毒粒子 ,基因组至少由 6个组分组成。它们有 3个共同区域 :开放阅读框架、主要共同区和颈环共同区。这些组分编码的蛋白为 :BBTVDNA - 1编码了复制起始蛋白 ;BBTVDNA - 2和BBTVDNA - 6编码的蛋白功能未定 ;BBTVDNA- 3编码病毒的外壳蛋白 ;BBTVDNA - 4编码运动蛋白 ;BBTVDNA - 5编码类成视网膜细胞瘤结合蛋白。

柑橘衰退病毒柚类分离物CP基因的克隆及原核表达分析

以来自湖北省的HB柚柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)分离物(CTV-HB1)为材料,利用RT-PCR技术对其CP基因进行克隆,序列分析结果表明:CTV-HB1与典型茎陷点分离物SY568和NUagA的核苷酸和推定氨基酸的序列相似性均在97%以上,而与CTV速衰分离物T36和弱毒分离物T385和T30的核苷酸和氨基酸序列相似性较低,均在95%以下。将CP基因片段连接到表达载体,转化大肠杆菌后诱导重组蛋白的表达。SDS-PAGE和Westen-blot分析结果表明,经IPTG诱导后产生了预期大小的重组蛋白,该蛋白可与CTV-L5提纯病毒制备的多克隆抗体发生特异性免疫反应。