基于GC-MS的灰葡萄孢菌代谢组分析

对农作物重要病害灰霉病的致病菌——灰葡萄孢菌进行了代谢组提取溶剂、衍生化时间和温度等前处理条件以及内标物筛选优化。结果表明,以水杨苷作为内标物,试验条件下以甲醇-水(80∶20)为提取溶剂,按照4.0 m L/0.1 g菌丝的剂量进行提取,采用N,O-双(三甲基硅烷基)乙酰胺和甲氧基胺盐酸盐在37℃和6 h条件下进行衍生化,可实现多种代谢物衍生产物收率和稳定性的最优化。灰葡萄孢菌丝代谢组的检测获得了210个峰,其中50种代谢物与NIST 2008的匹配度达到80%以上,主要为氨基酸类、醇类、有机酸类、糖类等代谢物,并通过标准品对部分代谢物进行了定性。典型的17种代谢物在1.0~100μg/m L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.98,检出限为0.02~10.0 ng/m L,定量下限为0.1~34.0 ng/m L。方法精密度分析结果显示89.05%代谢物的相对标准偏差为0.01%~16.8%。所建立的方法适合于丝状真菌的代谢组检测,可为农业和医学领域开展微生物代谢组研究提供参考。