蛹虫草发酵产物新纤溶酶的分离纯化

笔者所在项目组的前期研究发现,蛹虫草深层培养可以产生至少两种纤溶酶.基于此,文中对蛹虫草深层培养产生的纤溶酶的分离纯化展开了研究.采用硫酸铵盐析、Sephadex G-25凝胶色谱、Phenyl-Sepharose HP疏水相互作用色谱、CM-Sepharose FF弱阳离子交换色谱和Superdex 75凝胶色谱对纤溶酶进行分离.最终纯化后的纤溶酶Ⅰ比活力达1467.44U/mg,纯化倍数为36.07,回收率为5.79%.纤溶酶Ⅱ比活力达1681.58U/mg,纯化倍数为41.33,回收率为4.00%.两种纤溶酶经电泳鉴定均达到电泳纯,相对分子质量分别约为28000和32000.

赤霉菌超氧化物歧化酶的纯化及部分理化性质

采用加热、Sephadex G—100凝胶过滤及DEAE-Sephadex A-50柱层析的方法,提纯了赤霉菌的超氧化物歧化酶(SOD),纯酶比活力为2640U/mg蛋白,最大紫外吸收峰为276nm,为Mn-SOD,由二个亚基组成,亚基分子量为14.5kD。此外还报道了该酶的氨基酸组成。

宽阔水自然保护区的虫草及其相关真菌Ⅱ.

采自贵州省宽阔水自然保护区的另6种虫草，它们是娄山虫草新种（CordycepsloushanensisLiang&Liusp.nov.），绿核虫草新种（CordycepsaeruginosclerotaLiang&Liusp.nov.），拟暗绿虫草（cordycepspseudoatrovirensKob.&Shim.），布氏虫草（CordycepsbrongniartiiShimazu），金针虫虫草（CordycepsagriotaKawam），和幼虫虫草［Cordycepslarvarum（Westwood）Olliff］。还报道了多颈被毛孢（HirsutellapolycollutaLiang），云南被毛孢丝梗新变种（HirsutellayunnanensisvartenuisynnemiLiangetLiuvar.nov.），巨人被毛孢（HirsutellgiganteaPetch）和枝多头霉［Polycephalomycesramosum（Peck）Mains］等几种束梗孢科的虫生真菌，及娄山拟青霉新种（PaecilomycesloushanensisLiang&Liusp.nov.）。

两种虫草无性型的微循环产孢确证

从贵阳地区采得两种虫草，古厄虫草Cordycepsgunnii（Bark．）Berk．和布氏虫草CordycepsbrongniartiiShimazu。经诱发它们子囊孢子的微循环产孢再次确证了古尼虫草的无性型是古尼拟青霉PaecilomycesgunniiLiang，布氏虫草的无性型是布氏白僵菌Beauveriabrongniartii（Sacc．）Peteh。

陕西省木本植物炭疽菌分类研究

报导了发生在陕西省木本植物上的炭疽菌属ＣｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍＣｏｒｄａ３个种，其中包括１个中国新纪录种，即：胶孢炭疽菌Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ（Ｐｅｎｚ．）Ｓａｃｃ．、壳皮炭疽菌Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍｃｒａｓｓｉｐｅｓ（Ｓｐｅｇ．）Ａｒｘ和梭孢炭疽菌ＣｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍａｃｕｔａｔｕｍＳｉｍｍｏｎｄｓ（中国新纪录种）。

感染蛴螬的一种新虫草(英文)

描述了感染鞘翅目幼虫的茂兰虫草新种(CordycepsmaolanensisZ.Y.LiuetLiangsp．nov．），其主要物征为子座单生，可孕部分白色，近球形或卵圆形，其皮层栅状，100～125μm；柄中部地上和地下相交处有瘤节，子囊壳黄色，埋生，600～700×300～350μm；子囊柱状，300～450×3～4.5μm；每个子囊具有4个丝状多隔的子囊孢子，次生子囊孢子柱状，6～8×1．5μm，这些特征与近似种Cgracilis,C.gracilioides,C.insignis,C.entomorrhiza,C.amazonicda,C.amazonica,和C.amazonicavar．neoamazonica有明显的不同。

中国虫草Cordyceps sinensis的研究Ⅲ多样性初探

就中国虫草分类定种中的个种多样化趋势，结合产区生态和物种演化提出新的认识，即中国虫草是青藏高原及其相邻余脉特殊区域内物种适应与分化的结果，同时其自身也呈进一步分化的趋势．

采集自贵州的两个稀有虫草

1994年6月采集自贵州梵净山和荔波茂兰保护区的虫草属真菌，中国新记录种──螳螂虫草（CordycepsmantidaecolaKob.etShim.）和属于蛇形虫草亚属头状组的一新种──贵州虫草（CordycepsguizhouensisLiu,LiangetLiusp.nov）。贵州虫草寄生于刺蛾茧上，茧表面褐色，椭圆形，大小为4～6×5～9mm，在一个茧上可长1～2根子座，子座单生，不分枝，圆柱形，高1．5～5cm；柄和可孕部分界线不明，粗细相当，直径1～2mm，均为淡黄色，可孕部分皮层为丝状细胞的伪柔组织，有的柄部为白色；子囊壳散埋生，梨形，黄色，230～250×160～180μm；子囊为棍棒状或纺锤形，60～140×5～8μm，头部3～4μm；每个子囊中有8个子囊孢子，子囊孢子梭形，具3～4个隔膜，40～60×0．8～1．7μm，不断裂成次生子囊孢子。

泰山虫草C-2最优液体培养条件筛选

在泰山虫草资源调查过程中,采集、分离获得一株泰山虫草菌(Cordycepssp.)。对其进行人工驯化栽培,发现其生长周期短,发菌快,适应性强。利用正交试验设计法筛选其最佳液体发酵培养基及条件,用SAS数据处理软件系统对菌丝生物量、多糖进行方差分析,并测定发酵液中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)等酶的活性。结果表明,泰山虫草最优的菌丝体发酵培养基组合是:马铃薯20%、蔗糖2%、豆粉2%、胶体几丁质0.5%、无机盐0.1%KH2PO41、2 h光照。

虫生真菌的多样性

虫生真菌分属菌物界各分类阶元，它们除在物种上种类繁多外，在形态结构、生活史、繁殖方式、致病机理和次生代谢产物方面亦极具多样化。了解虫生真菌的多样性对正确鉴定它们的分类地位，探明疾病发生的侵染单元，以及多方位。

球壳孢目真菌高分子量纯DNA的大量提取

采用液氮冷冻研磨破碎菌体细胞壁，氯仿－异成醇反复抽提去蛋白的方法，成功地提取了球壳孢目５属１７种２４个菌株的ＤＮＡ，所得样品纯度高，其Ａ２６０／Ａ２８０多在１．８０～１．９５之间，Ａ２３０／Ａ２６０在０．４１～０．５９之间，紫外吸收光谱符合天然ＤＮＡ标准吸收光谱，热变性增色效应在３２％～４９％之间，可用于Ｔｍ值法测定Ｇ＋Ｃｍｏｌ％和分光光度法分析ＤＮＡ同源性。此法每克湿干菌体可得纯ＤＮＡ４０～８０μｇ，产量高时可达１５９．９μｇ／ｇ，很适合真菌高分子量纯ＤＮＡ的大量提取。

粉被虫草无性型单孢子株间和单孢子株内的营养亲和性

在含5％氨酸钾的KMM和KPS培养基上,粉被虫草无性型以3种途径产生不利用硝酸盐的突变株（nit突变株）。（1）由菌落基质菌丝形成的快速生长气生菌丝角变;（2）菌落表面快速生长的气生菌丝;（3）菌落基质菌丝缓慢生长形成的基质菌丝角变。来自18个单孢子株的94个nit突变株中,64.8％的突变株是稳定的。配对试验结果表明:在全部19个配对中,单孢子株内配对率为57.9％,单孢子株间配对率为42.1％。在全部nit突变株中,Cp-14c3突变株与其它突变株间的配对率最高（18.2％）。单孢子株间配对率高的孢子株是Cp-14Cp-7,Cp-5和Cp-6,将来自Cp-14同一单孢子株的Cpe-14C3分别与Cp-14cl和Cp-14c4nit突变株配对后发现,它们形成的浓密生长配接线的颜色是不相同的,前者橙色,后者白色。统计结果发现,所试全部的单泡子株可分成11个营养亲和群（VCGs）,那些含有易与其它菌株配对的nit突变株的单孢子株,如Cp-1,Cg-4,Cp-5,Cp-6,Cp-7,Cp-13,和Cp-14等皆在同一营养亲和群内。用Hochest33258荧光染色观察发现,野生型菌株的菌丝和分生孢子单核,nit突变株的少量分生孢子中可见双核,互补配对形成的浓密菌丝丛中的分生孢子则常见双核。

峨眉山自然保护区的虫草及其它昆虫病原真菌Ⅰ.

采自四川省峨眉山自然保护区的虫草及其相关昆虫病原真菌，其中除有常见的蛹虫草Cordycepsmilitaris（Vuill．）Fr，粉被虫草（CordycepspruinosaPetch），蝉拟青霉Paecilomycescicadae（Miquel）Samson，球孢白僵菌Beauveriabassiana（Bals．）Vuill等昆虫病原真菌外，将主要描述峨眉虫草新种（CordycepsemeiensisA.Y.LiuetLiangsp.nov.），龙洞虫草新种（CordycepslongdongensisA.Y.LiuetLiangspnov．），暗绿虫草新记录种（CordycepsatrovirensKob．etShim．）和蛹虫草球头变种新记录种Cordycepsmilitarisvar.sphaerocephala（Schw）Fr．等几种虫草菌。

蛹虫草药效研究进展

蛹虫草作为一种药(食)用菌已经被广泛接受,在药理作用和有效成分等方面得到了广泛而深入的研究,具有重要的开发价值。笔者综述了近几年来蛹虫草药效方面的研究进展。

蛹虫草纤溶酶酶学性质的初步研究

对蛹虫草纤溶酶的酶学性质进行了研究,结果表明,其纤溶活性随温度(≤45℃)的升高和保温时间的延长,逐渐下降,当温度超过50℃时,则随温度的升高和保温时间的延长急剧下降;蛹虫草纤溶酶的最适pH为7.0,在碱性条件下纤溶活性相对稳定;金属离子Ca2+和Fe2+对蛹虫草纤溶酶的活性有显著激活作用;抑制剂中PMSF对蛹虫草纤溶酶活性的抑制作用较小,而Aprotinin、EDAT和EGTA对其纤溶活性均有较显著的抑制作用,说明蛹虫草纤溶酶可能不同于之前报道的纳豆激酶(丝氨酸蛋白酶),而是一种全新的蛋白酶,但对这一点还需要进一步的研究验证.

蛹虫草子实体人工栽培技术

介绍了蛹虫草子实体人工栽培技术,包括产地环境、栽培场所、培养基配制、灭菌、菌种培养扩繁、培养场所消毒、恒温培养管理、污染防治、采收、贮藏等内容,以期为蛹虫草人工栽培提供参考。

黑腐皮壳属一新种

本文报道采自柳杉(Cryptomeria fortunei Hooibrenk ex Otto et Dietr.)枝干上的黑腐皮壳属一新种:有性阶段命名为柳杉黑腐皮壳菌(Valsa fortunea Zhao, Sheng et N. Li sp. nov.);无性阶段为柳杉壳囊孢菌(Cytospora fortunea Zhao, Sheng et N. Li sp. nov.),并对其形态特征做汉文和拉丁文描述。同时,讨论了新种与其它已知相近种的区别。模式标本存于西南林学院植物病理标本室(HSFC 15206模式)。

中国小花口壳属(Anthostomella)种的记述(英文)

在研究小花口壳属 (Anthostomella)的过程中 ,对从中国采集的该属中不同种的模式标本或非模式标本以及新采集的标本进行了观察和描述 .列出了从中国采集的 2 2个种类 ,包括名称、采集地点、采集时间、寄主及所保存标本馆 ;并列出了 6个存疑种和两个被剔除种类的名称、采集地点和时间、寄主以及理由和说明 .

蛹虫草(Cordycepsmilitaris)无性型的多型现象

在萨氏琼脂和PDA上，蛹虫草Cordycepsmilitaris（Vuill）Fr.无性型，蛹草拟青霉Paecilomycesmilitaris(Kob）Br.＆Sm．的一些单孢子株可自发产生突变，基于多型现象及其它形态特征可分三种类型：（1）具野生型菌株特征；产孢结构拟青霉型（Paecilomyces－type），稳定，菌落通常不自发产生角变，大多数单孢子株属此类群。（2）属此类群的单孢子株，在PDA上可形成亮褐色至橙黄色的角变，它们典型的产孢结构为瓶梗轮生，分生孢子常聚集成头状的轮枝孢型（Verticillium－type）。在查氏培养基上则相反，拟青霉型的产孢结构占优势。单孢子株Cm-71是这一类群的代表。（3）单孢子株Cm－42是在所观察单孢子株中形态特征独特的菌株。在PDA上菌丝生长纤细，蛛网状，产孢结构轮枝孢型。蛹草拟青霉对氯酸钾（KClO3）不敏感，在浓度为6％（W／V）的KMM培养基上，23～24℃14天菌落的直径仅1～2cm，无气生菌丝生长。各单孢子株形成的不利用硝酸盐突变株（nit突变株）的途径和形态特征，也可分成类似于粉被虫草CordycepspruinosaPeteh不利用硝酸盐突变株（nit突变株）的三种类型。

宽阔水自然保护区的虫草及其相关真菌Ⅰ.

本文报道采自贵州省宽阔水自然保护区的9种虫草,它们是多壳虫草新种(Cordyceps polycarpica Liang & Liu Sp.nov.),鼠尾虫草新种(Cordyceps musicaudata Liang et Liu sp.nov.),针孢虫草(Cordyceps acicularis Rev.ex Berk.),罗伯茨虫草(Cordyceps robertsii(Hook.)Gray),下垂虫草(Cordyceps nutans Pat.),沫蝉虫草(Cordyceps tricentri Yasuda),丝虫草(Cordyceps filiformis Moureau),泽地虫草(Cordyceps paludosa Mains)和球头虫草[Cordyceps sphecocephala(K1.)Sacc.]。