钻井液特征污染物的毒性评估和海洋测试生物的适用性比较

随着海上钻井数量的逐年增加、钻井液的使用量迅速增加,与之相关的环境危害引起了广泛关注,因此有必要筛选合适的毒性测试生物和开发环境友好的钻井液。本研究中,按照ISO11348-1(2007)、GB/T21805-2008和GB/T18420.2-2009的毒性测试方法,采用标准的海洋测试生物:发光细菌(Vibrio fischeri)、牟氏角毛藻(Chaetoceros muelleri)、诸氏鲻虾虎鱼(Mugilogobius chulae)、凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)、卤虫(Artemia)、蒙古裸腹溞(Moina mongolica),研究了钻井废液特征污染物(苯酚、七水硫酸锌、氯化汞)以及参比毒物十二烷基硫酸钠(Sodium dodecyl sulfate,SDS)的急性毒性效应。结果表明,钻井液特征污染物对6种海洋生物的急性毒性效应有所不同:Hg2+对海洋生物表现为极高毒性,Zn2+、SDS表现为中、高毒性,苯酚表现为中、低毒性;6种海洋生物对4种特征污染物的敏感性顺序为:蒙古裸腹溞>诸氏鲻虾虎鱼>卤虫>凡纳滨对虾>发光细菌>牟氏角毛藻;诸氏鲻虾虎鱼与卤虫、凡纳滨对虾种间毒性相关性显著,蒙古裸腹溞与发光细菌、凡纳滨对虾种间毒性相关性显著。上述研究结果为环保型海洋钻井液开发和钻井废液生物毒性评价中受试生物的选择提供了基础数据。

基于斑马鱼模型探究药食同源复方降尿酸作用及成分分析

目的:探究芹菜籽、蒲公英、菊苣和玉米须四种药食同源中药联用下的降尿酸活性和作用机制,分析这四种中药复合提取物中具备降尿酸作用的主要效应成分。方法:随机选取5 dpf野生型AB品系斑马鱼,通过250μmol/L氧嗪酸钾和10μmol/L黄嘌呤钠盐诱导建立斑马鱼高尿酸模型,将已建立的斑马鱼模型随机分为对照组、模型组、别嘌醇组(136μg/mL)和复方提取物低、中、高(250、500及1000μg/mL)剂量组,每组30尾,连续干预24 h后,测定斑马鱼体内的尿酸荧光值和次黄嘌呤磷酸核糖转移酶1(HPRT1)、葡萄糖转运蛋白9(GLUT9)、有机阴离子转运体(OAT1)基因表达水平;采用超高液相色谱-串联高分辨质谱仪为主要手段,以乙腈-甲酸水为流动相,梯度洗脱,ESI离子源正、负离子扫描模式,结合软件数据库搜索及相关文献进行成分鉴定。结果:与模型组相比,复方提取物低、中、高剂量组均能极显著降低高尿酸斑马鱼模型的血尿酸水平(P<0.01),且能够有效上调高尿酸斑马鱼体内HPRT1、OAT1的相对表达量、下调GLUT9的相对表达(P<0.05);初步筛选鉴定出黄酮及其苷类、有机酸、香豆素、萜类等22种活性成分,均为复方提取物中具有降尿酸机制的效应物质。结论:复方提取物可能通过上调模型组斑马鱼体内HPRT1、OAT1的表达量、下调GLUT9的表达,发挥多方位降尿酸的作用;所筛选鉴定的化学成分为下一步筛选作用靶点提供参考。

碘油-化疗药栓塞剂的颗粒直径和稳定性对TACE疗效影响的实验研究

目的 以兔VX2肝脏移植瘤模型为对象 ,探讨不同颗粒直径和稳定性的碘油 化疗药栓塞剂对TACE疗效的影响。方法 3 6只VX2肝脏移植瘤大白兔随机平均分成 6组。肝脏肿瘤移植术后 3周行MSCT检查测定肿瘤体积 (V1) ,后即行腹部切开术 ,将导管插入肝动脉 ,按以下治疗方案进行介入治疗 :(A ,B组 )A溶液 +三氧化二砷 +超液化碘油。 (C ,D组 )B溶液 +三氧化二砷 +超液化碘油。 (E ,F组 )C溶液 +三氧化二砷 +超液化碘油。其中A ,C ,E组采用手摇动 10次混匀 ,B ,D ,F组采用超声乳化方法混匀。TACE 3周后再行MSCT检查测定肿瘤体积 (V 2 )。结果 分别比较经TACE治疗三周后的肝脏肿瘤体积 (V2 ) ,即A与B ,C与D ,E与F ,各自组间比较均有统计学差异 (P <0 .0 5 )。结论 当溶解化疗药的溶剂比重与超液化碘油相同时 ,碘油 化疗药栓塞剂稳定性最好。超液化碘油 化疗药栓塞剂的直径与稳定性对TACE的疗效有影响作用。

脓毒症大鼠Fas-L、Caspase-3和NF-κB的表达与肝细胞凋亡的关系

目的 探讨脓毒症时Fas L、Caspase 3、NF κB在肝细胞凋亡信号转导中的作用。方法 Wistar大鼠 3 0只随机分为观察组和对照组 ,观察组 2 4只采用盲肠结扎穿孔术 (CLP)致脓毒症模型 ,以术后 2h、3h、4h、5h时限分为 4组 ,对照组 6只 ,不行CLP术。各组均测定肝脏组织Fas L、Caspase 3、NF κB蛋白表达及肝细胞凋亡的情况 ,同时测定肝脏功能的变化。结果 CLP术后肝组织Fas L、Caspase 3、NF κB蛋白表达升高与对照组相比有显著差异 ;3h组的Fas L、Caspase 3的含量达高峰 ,4h组的NF κB的含量达高峰 ;血浆中丙氨酸转氨酶 (ALT)、乳酸脱氢酶 (LDH)呈异常改变 ,CLP术后血浆中ALT、LDH增加 ,与对照组相比有显著差异 (P <0 .0 1) ,ALT呈进行性增加 ,LDH以 4h组最显著。肝组织细胞凋亡指数呈进行性增加。结论 由CLP所致的脓毒症过程中 ,肝组织Fas L、Caspase 3蛋白表达升高 ,激活促细胞凋亡的程序 ;NF κB蛋白表达亦升高 ,NF κB活性增强 。

基于CRISPR/Cas9系统定点编辑小鼠MAD2L1基因及其脱靶效应分析

目的建立利用CRISPR/Cas9系统对小鼠MAD2L1基因第二外显子基因编辑的方法体系,并分析CRISPR/Cas9对MAD2L1基因编辑的脱靶效应。方法通过CHOPCHOP网站设计位于小鼠MAD2L1基因第二外显子的靶点序列,并构建Cas9-MAD2L1载体,将该载体转染到NIH/3T3细胞中,通过嘌呤霉素筛选并结合荧光显微镜观察GFP后,提取细胞转染后的基因组DNA,利用PCR方法,结合T7E1分析和桑格尔测序,鉴定对小鼠MAD2L1基因编辑情况,并对转染后的NIH/3T3细胞进行CRISPR/Cas9脱靶效应分析。结果将Cas9-MAD2L1载体转染到NIH/3T3细胞并进行嘌呤霉素筛选后,荧光显微镜下观察到大量表达GFP的细胞,PCR结合T7E1结果显示,以转染后的细胞DNA为模板扩增出的228 bp MAD2L1 PCR产物,可被酶切成166 bp和62 bp片段,测序结果显示,成功对MAD2L1基因第二外显子靶点处进行基因编辑,脱靶效应分析未检测到CRISPR/Cas9有对脱靶位点进行基因编辑。结论成功建立对小鼠MAD2L1基因第二外显子进行基因编辑的方法体系,设计的对MAD2L1基因编辑靶点未检测到脱靶效应的发生。

基于OPG-RANK-RANKL系统研究饲粮不同钙水平对生长期WHBE兔骨代谢的影响

目的利用护骨素-核因子κB受体活化子-核因子κB受体活化子配体(OPG-RANK-RANKL)系统,探讨饲粮不同钙水平对生长期WHBE兔骨代谢影响。方法选择21只雄性断奶WHBE兔,随机分为3组(I、II、III组),分别饲以钙水平为0.95%,1.10%和1.30%,其他营养水平基本一致的饲粮。实验期42 d。实验结束,测定兔血清钙(Ca)、甲状旁腺素(PTH)和骨源性碱性酶(BALP)含量;分别运用荧光定量PCR法和免疫组织化学法对WHBE兔骨组织进行OPG-RANK-RANKL的基因转录和蛋白表达分析。最后以RANKL/OPG比值为指标,评估WHBE兔骨代谢与饲粮钙水平间的相关性。结果实验结果表明,I、II、III组在血清Ca、PTH含量和BALP活力上差异无显著性(P>0.05)。WHBE兔骨组织RANKL mRNA表达水平和RANKL/OPG mRNA比值均以II组最低,与I、III组差异有显著性(P<0.05)。钙水平对WHBE兔骨组织OPG-RANK-RANKL蛋白表达影响显著(P<0.01),II组和III组OPG蛋白表达阳性指数均极显著高于I组(P<0.01);而II组兔骨组织RANK蛋白表达阳性指数则极显著低于I组和III组(P<0.01),RANKL/OPG的蛋白表达阳性指数比值以II组最低,与I组差异有显著性(P<0.01)。此外,WHBE兔骨组织RANKL/OPG mRNA比值和的蛋白表达阳性指数比值均与饲粮钙水平间存在显著的二次曲线相关(R^2=0.4068,0.8433,P<0.05,P<0.001)。结论生长期WHBE兔的骨代谢与饲粮钙水平间呈显著相关性,当饲粮钙含量为1.10%时,生长期WHBE兔可获得较理想的骨代谢水平。

无菌小鼠在肠道菌与机体免疫互作机制研究中的应用

肠道菌在机体健康中发挥重要作用,而其中肠道菌发挥作用的具体机制是什么?无菌小鼠作为一种动物模型,在研究肠道菌作用机制的研究中必不可缺。本综述以无菌小鼠模型为基础,探讨肠道菌对机体系统发育、维持中的作用,并重点讨论一些特有的肠道菌在免疫调控中的具体作用。

UVRAG基因缺失促进饥饿诱导的肝脏脂肪变性

[目的]紫外线辐射耐受相关(ultraviolet resistance-associated gene,UVRAG)是一个自噬相关基因,具有多种生物学功能.利用UVRAG基因缺失的小鼠证实了该基因缺失可阻断体内自噬流,并鉴于自噬对脂代谢有一定调控作用,研究了UVRAG在饥饿诱导的肝脏脂肪变性中的作用.[方法与结果]野生型小鼠和UVRAG基因缺失小鼠给予正常饮食或24 h饥饿处理.在正常生理条件下,油红染色显示UVARG基因缺失小鼠和野生型小鼠肝脏无明显脂质积聚;但是在24 h饥饿条件下,该基因缺失可导致肝脏脂质积聚显著增多,且UVRAG基因缺失小鼠肝脏甘油三酯、游离脂肪酸质量比显著升高,而总胆固醇质量比无显著性差异.实时荧光定量聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerize chain reaction,RT-PCR)显示,在正常生理条件下的胆固醇调节元件结合蛋白-1(sterol regulatory element-binding protein1,SREBP-1)基因在UVRAG基因缺失小鼠肝脏表达显著下调,但在饥饿条件下,UVARG基因缺失小鼠和野生型小鼠肝脏SREBP-1表达无显著差异;而在实验组和对照组中其他肝脏脂代谢相关基因CD 36,FAS,CPT-1,PPAR和FGF 21的表达无显著性变化.此外,UVARG基因缺失对脂代谢调控分子AMPK活性无显著影响.在饥饿条件下,UVRAG基因缺失可导致血浆甘油三酯和游离脂肪酸浓度上升,血糖浓度下降.[结论]UVARAG基因缺失促进饥饿诱导的肝脏脂肪变性,这可能与肝脏自噬阻断和肝脏摄取血浆游离脂肪酸增多有关.

松香法应用于犬的全身肌肉干制标本制作技术的探讨

为探索松香在犬的全身干制标本中的制作技术,本试验以成年金毛犬为实验动物,将犬放血处死,经灌注定形和梯度乙醇彻底脱水后,依据相似相溶原理,将封固液中松香短时间快速渗入犬的全身肌肉组织内,基于乙醇和松节油易挥发性加速松香对肌肉组织的支撑和固化定形过程,再刷漆包被干制得到犬的全身干制标本。结果显示,该技术方案能有效的将松香渗入犬的组织内部,制得标本呈淡琥珀色,组织器官皱缩不明显,可清晰反映出其肌肉、器官等解剖位置,经长时间放置标本组织器官固有形态结构清晰,未出现虫蛀、霉变、油脂渗出以及腐败等现象。以上结果表明,松香法制备的犬的全身肌肉干制标本,具有很好的驱虫、防腐、防潮和防渗脂效果,能有效解决标本保存中虫蛀、霉变、腐败和渗脂等问题,从而长久保存。

谷胱甘肽抑制新生大鼠脑缺氧缺血海马CA1区细胞凋亡的研究

【目的】 研究谷胱甘肽对缺氧缺血脑损伤引起的神经细胞凋亡的作用。 【方法】 利用新生大鼠缺氧缺血脑损伤模型 ,通过末端转移酶介导的原位缺口标记 (TUNEL)法检测并比较缺氧缺血状态下用药与否对海马CA1区神经细胞凋亡的影响。 【结果】 谷胱甘肽 (还原性 )治疗可显著减少海马CA1区凋亡的阳性细胞数。 【结论】 谷胱甘肽可有效抑制缺氧缺血损伤引起的海马部位神经细胞凋亡 ,可有效对抗氧化张力在缺氧缺血损伤中引起的细胞凋亡。

飞管插管指示气囊损伤后的应急处理并文扶复习

气管插管技术在危重患者抢救过程中应用非常广泛，而气管插管指示气囊的管理则是危重患者气管插管护理的重要内容。如护理不当或操作失误，导致内气囊压力过高，会造成呼吸道黏膜损伤如缺血、坏死、溃疡和炎症，甚至发生食管气管瘘；而压力不足则易导致气道漏气，造成潮气量不足、误吸、呼吸机相关性肺炎等严重的并发症。我科曾收治一名患者，在为患者更换衣物时误损伤指示气囊，我们积极采取补救措施，避免了重新插管，为患者赢得了抢救时间，同时减轻了患者痛苦，减少患者的费用，现报道如下。

不同感染途径致大鼠肺炎模型制备的比较

目的探索铜绿假单胞菌致大鼠肺炎模型的制备方法,为后续研究奠定实验基础。方法将Sprague-Dawley(SD)大鼠48只随机分为4组:A对照组、B气管注射组、C气管插管感染组和D滴鼻感染组。适应饲喂3 d后,分别给予不同造模干预,分别于干预后5、10和15 d动态监测各亚组大鼠体重、体温、白细胞数、肺组织病理学变化等。结果各模型组大鼠行为学表现、体重、体温、白细胞、肺组织炎症病理学表现均与对照组差异有显著性;(2)各模型组均证实为铜绿假单胞菌感染,对照组则阴性。结论经滴鼻途径以铜绿假单胞菌感染大鼠,可得到合格大鼠肺炎模型;此感染途径可避免手术创口带来的炎症反应干扰,简便易行,可推广。

哀牢髭蟾消化系统解剖学及组织学观察

对哀牢髭蟾(Vibrissaphora ailaonica)的消化系统进行了解剖学及组织学观察。结果表明,消化道大致可分为口腔、咽、食道、胃、小肠、直肠。肝脏分为左、中、右3叶。消化道组织结构中食道由外膜、黏膜层、肌层、纤毛和杯状细胞组成。胃由肌层、黏膜层、胃腺和胃小凹组成。小肠由黏膜层、肌层、杯状细胞组成。哀牢髭蟾小肠和直肠的肠腺不发达,胃腺丰富。其肠与头体长比约为1.5倍,消化道较短,于人工养殖时应选用无革质、易于消化的饵料。

ACLS模拟场景在复苏术实验教学中的应用研究

心肺脑复苏(CPCR)在临床实验中具有举足轻重的重要性,是各学科都要掌握的基本功,传统急救实验教学围绕教科书进行气管插管、人工呼吸、心脏按压等单项培训,只注重单项培训而忽视了急救的整体性和灵活性。ACLS模拟场景通过建立急重症模拟场景,让学生置身于急症的氛围,身临其境,掌握每一种疾病各自的抢救措施,将各种急救措施综合应用,灵活运用。有利于培养学生的综合能力、树立学生团队意识的培养,增强学生的在临床处理急症的应变能力。

基于高通量靶向测序的大鼠遗传质量检测方案建立

目的:将高通量靶向测序运用于实验动物DNA单核苷酸多态性检测,为监测大鼠遗传质量与品系鉴定提供一种新的方法。方法:利用多重PCR技术,以不同品系大鼠为研究对象,选取了21条染色体上的90个单核苷酸多态性(SNP)位点,构建扩增子文库,并通过二代测序仪进行高通量测序,以生物信息学手段分析SNP位点状态。结果:对SHR、WKY、GK、F344共4个近交系及SD封闭群大鼠进行SNP分型,不仅能够检测出近交系大鼠纯合子的情况,还能很好的区分出不同品系的大鼠。结论:本实验建立了一条高通量测序管道,实现了常见近交系大鼠快速、高通量的基因分型,可用于遗传质量检测和品系鉴定。

一种简易、多用途的小鼠固定装置

目的:介绍一种简易、多用途的小鼠固定装置的制作和使用方法。方法:选用废弃的50 m L离心管,按设计方案进行切割、组装制成简易小鼠固定装置。选取60只小鼠,随机分为2组,对照组采用传统固定方法,研究组则采用本装置固定,先后对小鼠进行尾静脉注射、断尾采血、膝关节腔内注射,观察比较两组操作时间和成功率等指标。结果:单个50 mL离心管仅重约12 g,制作时间约15 min。对照组和研究组小鼠尾静脉注射时间分别是(32.10±1.97)s和(30.27±2.20)s,成功率均为100%,断尾采血时间分别是(30.10±1.73)s和(28.67±1.55)s,成功率也均为100%,两组在操作时间上差异均具有统计学意义(P<0.01),而在成功率方面均无统计学差异(P>0.05)。两组膝关节腔内注射时间分别是(40.77±2.73)s和(38.73±2.16)s,成功率分别为83.33%和95.00%,两组在操作时间及成功率方面差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:该小鼠固定装置具有材料易得、制作简单、携带方便、用途多样等优点,为实验小鼠的固定提供了一种新的安全、实用的方法。

饮酒通过内质网应激促进小鼠乳腺癌恶性进展

目的通过动物实验及体外实验探索饮酒是否促进乳腺癌恶性进展,且这一作用是否与其诱导的慢性应激有关。方法利用小鼠乳腺癌移植瘤模型,体内观察2%乙醇慢性处理的小鼠乳腺癌E0771细胞对体内细胞生长转移的影响;利用体外细胞学实验观察0.2%乙醇慢性诱导对小鼠乳腺癌细胞E0771增殖、迁移及非锚定生长能力的影响;同时用分子生物学方法探索细胞内ROS水平及慢性内质网应激蛋白如p-e IF2a、Bip、XBP1-s等蛋白表达水平是否发生改变。结果与对照组相比,饮酒组小鼠体内肿瘤生长速度加快,转移增加;体外酒精处理可以显著促进乳腺癌细胞增殖、迁移等恶性生物学行为,酒精慢性处理可以诱导ROS、内质网应激活化蛋白p-e IF2a、Bip、XBP1-s表达上升。结论饮酒可能通过诱导乳腺癌细胞内质网应激促进其恶性进展。

梓醇对MPTP介导的亚急性帕金森病小鼠氧化应激水平的影响

为了研究梓醇(Catalpol)对甲基-4-苯基1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetmhydropyridine,MPTP)所诱导的亚急性帕金森病模型小鼠氧化应激反应的影响,选取33只野生型小鼠随机分为对照组(n=11),给予生理盐水腹腔注射14d;MPTP模型组(n=11),给予生理盐水腹腔注射3d,第4天开始连续腹腔注射MPTP(30mg·kg^(-1),溶于生理盐水)5d,最后腹腔注射生理盐水6d;梓醇治疗组(n=11),给予腹腔注射梓醇(溶于生理盐水)3d,第4天腹腔注射MPTP(30mg·kg^(-1),溶于生理盐水)连续注射5d,最后腹腔注射梓醇6d。应用旷场实验、旋转杆实验和悬尾实验分别检测3组小鼠的运动能力和焦虑行为;利用免疫荧光染色技术检测小鼠黑质多巴胺能神经元的凋亡情况;运用Western blot方法考察小鼠黑质区TH、Bcl2、BAX、SOD1、SOD2、HO1、NQO1和Nrf2的蛋白表达情况;使用试剂盒检测小鼠黑质区SOD活性、ROS含量和GSH的活性。结果表明:MPTP模型组小鼠在旷场中心区域的移动距离和在旋转杆上的运动时间明显短于对照组,悬尾实验小鼠的不动时间明显长于对照组(p<0.05),与模型组相比,梓醇处理后,小鼠在旷场中心区域移动距离和旋转时间明显延长,悬尾实验小鼠的不动时间明显缩短(p<0.05);免疫荧光染色结果显示,与对照组相比,MPTP模型组小鼠的黑质区多巴胺能神经元死亡率明显升高,与模型组小鼠相比,梓醇处理后,黑质区多巴胺能神经元死亡率明显降低;Western blot和ELISA结果显示,与对照组相比,SOD1、SOD2、HO1、NQO1和Nrf2表达降低(p<0.05),Bcl2/BAX比例降低(p<0.05),与MPTP模型组小鼠相比,梓醇处理后,黑质区SOD1、SOD2、HO1、NQO1和Nrf2表达增加(p<0.05),Bcl2/BAX比例升高(p<0.05)。梓醇可缓解由MPTP介导的亚急性帕金森模型鼠脑内多巴胺能神经元凋亡和氧化应激反应,进而提高小鼠的运动能力,其作用机制可能是通过调控Nrf2/HO1/NQO1信号通路发挥神经保护作用。

非语言沟通在气管插管病人心理护理中的应用

呼吸机辅助治疗对危重患者具有积极的意义,但气管插管给语言带来了极大的困难,造成护患双方语言交流障碍。从非语言沟通的几种形式及注意事项,非语言性沟通在气管插管病人的心理护理中的重要性等方面展开讨论。