微载体高密度培养Vero细胞的研究

微载体是动物细胞高密度培养的有效手段。首先在硅化的方瓶中对Ｃｙｔｏｄｅｘ１、Ｃｙｔｏｄｅｘ３、Ｂｉｏｓｉｌｏｎ、Ｂｅｌｌｃｏ Ｇｌａｓｓ Ｍｉｃｒｏｃａｒｒｉｅｒ、ＣＴ－１、ＣＴ－３、ＭＣ－１、ＣＴ－２８种国产和进口微载体进行了比较和筛选。确定以Ｂｉｏｓｉｌｏｎ作为Ｖｅｒｏ细胞高密度培养的首选微载体。用５００ｍｌ Ｗｈｅａｔｏｎ搅拌瓶探索影响Ｖｅｒｏ细胞高密度培养的条件。

水产动物细胞培养方法及前景

综述了鱼虾贝类等水产动物细胞培养的方法 ,分析了动物细胞大规模培养过程中的问题与对策 ,展望了动物细胞培养的广阔前景 .

兔成纤维细胞的分离与体外培养

用Ⅰ型、Ⅳ型胶原酶消化分离兔皮肤细胞，Ⅰ型胶原酶消化皮肤块获得的细胞数显著高于Ⅳ型胶原酶。用组织块直接培养法，也可以得到皮肤的原代培养细胞。２．５ｇ／Ｌ胰酶消化胎儿组织，可获得足够原代培养的细胞量。结合使用酶消化法和反复贴壁法，经２～３代后，可获得纯化的成纤维细胞。分离纯化的胎儿和皮肤成纤维细胞的生长曲线都正常且相似。胎儿和皮肤成纤维细胞可分别传至第１３代与第１１代，传代后染色体数目不变。

产组织型纤溶酶原激活剂CHO工程细胞无血清培基的研究

在对ＤＭＥＭ：Ｆ１２（１∶１）进行优化的基础上，以细胞生长和组织型纤溶酶原激活剂（ｔ－ＰＡ）表达为评价指标，筛选无血清培基添加成分，建立了由优化ＤＭＥＭ：Ｆ１２（１：１）、胰岛素、ＰｌｕｒｏｎｉｃＦ－６８、维生素Ｃ、乙醇胺和微量元素混合液组成的适于产ｔ－ＰＡＣＨＯ工程细胞４Ｂ３生长和ｔ－ＰＡ表达效果均优于相同条件下用含血清培基培养的效果。

胶原酶灌注部分肝脏方法分离肝主质细胞

本文报导一种分离哺乳类正常肝细胞的新方法,其要点是精确安排操作的程序,在灌注前结扎肝脏的左叶和正中叶,使灌注液只在余下的1/3肝脏内流动。本方法快速、稳定,能在2小时内从大鼠的1/3肝脏(2—3克肝组织)分离出1—1.5×10~7个和肝主质细胞,存活率在95%以上。酶液(0.05%胶原酶)的用量为20～25ml,在同类实验中是最少的。

中华按蚊(Anopheles sinensis)细胞系的建立和特征

从中华按蚊初孵幼虫中,建立一株细胞系,命名 AS-684。建系使用我们改良的199培养基及含有10%F 12的 M-M 培养基。原代培养20天形成单层细胞。传代培养,以1:2分种率,相隔4—5天传代1次,连传70代次。细胞系由4种细胞类型组成,以多边形和纺锤形上皮细胞为优势,掺杂少数双核细胞及长梭形细胞。细胞生长,从24小时开始倍增分裂达高峰,对数期二倍增长时间约为16小时。自45代起,培养基中血清含量从20%降至10—15%。4次电镜观察,没有发现支原体和病毒质点。细胞系以二倍体细胞为主,染色体6条(2n=6)。细胞酯酶同工酶分析,酶谱为两条酶带,PI 值为4.75,4.85。各种代次细胞保存于-196℃的液态氮中及4℃普通冰箱中,经多次试验能成功复苏。

动物细胞在鼓泡式生物反应器中的死亡速率

通过实验测定,证明生物反应器中细胞死亡速率与气体鼓泡速率成正比而与反应器体积成反比。实验发现气泡大小对细胞死亡速率具有两种作用,一种作用在于影响气泡表面积生成速率;另一种作用则在于影响细胞在气泡表面的吸附程度,其最佳直径为5mm左右。血清和Pluronic P68能显著降低细胞死亡速率,当Pluronic F68浓度达到0.1％时,k_d趋于零。所有这些实验结果均与前文提出的生物反应器设计模型具有很好的一致性。

大鼠胸导管内皮细胞的体外培养和观察

目的 体外培养大鼠胸导管内皮细胞 ,为研究淋巴管内皮细胞的生理功能、病理改变以及分子水平调节等提供手段。方法 术前用脂肪喂食大鼠 ,标记胸导管 ,将胸导管两端结扎 ,取下胸导管后充分分离和剪碎 ,在RP MI16 4 0培养液中直接培养 ,观察胸导管内皮细胞的生长。结果 胸导管内皮细胞呈铺路石样生长 ,Ⅷ因子相关抗原呈阳性反应。结论 此法简便易行 。

动物细胞培养反应器的流体循环和氧传递规律

本文研究了Celligen细胞培养反应器的循环性能和氧传递规律,发现按几何比例放大,循环性能仅与转速有关。氧的传递速率受转速影响很小,是搅拌器丝网面积和通气量的函数。根据实验数据,建立了提升筒中的流动、氧的传递的关联式。

动物细胞培养过程中pH和溶氧的关联控制

本文通过对动物细胞培养过程中pH值和溶氧(DO)水平控制要求的分析,设计了用空气、氧气、氮气和二氮化碳四组气体关联控制pH值和DO水平的控制系统。该系统根据对瞬时pH值和DO值参数的检测,通过微处理机进行一系列的逻辑判断和具有PI调节规律的DDC增量词节计算,再经四气体关联互补计算和多重时序控制环节,综合调节四组气体电磁阀的相互开闭时间,实现对培养过程中pH值和DO水平的控制,满足动物细胞生长的需要。

应用电镜技术快速检测培养细胞中的支原体污染

应用电镜技术可快速准确地检测培养细胞中的支原体污染。通过高速离心浓缩样品,负染色后电镜观察,可在30min内做出判定,方法快速、简便、准确。

恒河猴静脉内皮细胞培养的研究

利用胶原酶对恒河猴血管内皮细胞进行消化,以9.92±3.34×10~3个细胞/cm^2的接种率接种于35mm培养皿中原代培养,体外培养7.7±1.82天,细胞增长了7.39±5.04倍,以1:6及1:2比例分别传第一代、第二代共历时13.89±1.36天细胞增长了147.93±88.68倍。对原代及传代细胞进行染色体及第Ⅷ因子相关抗原免疫荧光检查,证实所培养的细胞为内皮细胞。通过检测培养上清中vWF和PGF1α的含量,原代、第一代与第二代之间均无明显差异(P>0.05)。

硬头鳟巨噬细胞的体外长期培养(简报)

鱼类的巨噬细胞和高等脊椎动物的一样,在吞灭入侵的病原体方面起着极其重要的作用。探索在体外长期培养巨噬细胞的方法,有助于研究巨噬细胞的机能。Braun-Nesje等虽已从硬头鳟(Salmo gairdneri)等鲑科鱼类的头肾中分离出大量的巨噬细胞,并在体外培养了3个月之久,但因细胞不分裂,无法传代。本研究改用组织块培养法和饲养层技术探索长期培养巨噬细胞的方法,并获得成功。迄今巨噬细胞已在体外培养22个月,传代48次。细胞的原代培养分为三组。前两组是单独的脾或头肾的组织培养;第三组是脾与头肾的混合组织培养。培养液是Leibovitz’s L-15,外加20%胎牛血清,100 IU/ml青霉素和100μg/ml链霉素。

睾丸细胞体外培养方法及在生殖毒理研究中的应用

睾丸细胞体外培养方法及在生殖毒理研究中的应用张天宝综述杨在昌孙棉龄审校近年来，国外一些毒理学家先后建立或从基础学科引进了啮齿动物睾丸细胞体外培养方法，试图建立睾丸毒性体外试验系统，现已初步显示出有良好的应用前景，很可能成为今后生殖毒理的重要研究手段。...

小鼠骨骼肌细胞分离培养的研究

目的 完善骨骼肌细胞的分离培养方法 ,为有关实验提供足量的细胞。方法 通过改进骨骼肌细胞的取材、分离、消化、培养等技术 ,从细胞形态学及细胞计数观察细胞培养情况。结果 用改良的方法分离、培养的小鼠骨骼肌细胞 ,使原代培养的细胞成功率在 85 %以上 ,传代细胞的成功率在 95 %以上。结论 这种分离培养具有方法简便、成功率高、稳定性强。

体外培养脑神经细胞的计算机测量

利用IBM PC/AT兼容机及PIP 1024 B图像板,开发了测量体外培养脑神经细胞的系统软件,该系统可以在6～7分钟内完成一个高倍视野的细胞测量,可自动连续测量24～40个视野。每个细胞的胞体面积、直径、周长,突起平均数及突起总长度,以平均值和标准差表示。可对组间结果进行比较及t值测定。应用该系统我们测定了鸡胚大脑半球神经细胞在低密度无血清培养条件下,1、2、3、5天各项指标的变化。

在细胞培养无菌操作中试用火焰消毒无菌连接器

火焰消毒无菌连接器在细胞培养无菌操作中经试用证明完全符合设计要求。它适用于各种无菌管道的断开与连接的无菌操作,对其中的工作流体毫无影响。特别适用于多尘多菌地区及野外作业。它可能发展成为一种完全脱离无菌室与超净台的新的管道化无菌操作技术系统。

微载体培养技术的研究进展

本文对近年来广泛用于动物细胞培养的微载体技术的特点、培养过程的优化作了较为详细的评述。