温度变化对中国林蛙胚胎发育的影响

开展中国林蛙南移和人工养殖是一项很有意义的工作，而南方多变的气温是否影响其胚胎发育是一个尚未研究的课题。本文利用受精卵在不同温度的恒温培养箱间移换，研究了温度变化对中国林蛙早期胚胎发育的影响，结果表明：（１）快速升温对中国林蛙胚胎孵化率、正常率均有影响，且温差越大影响越大；缓慢升温对胚胎的影响与温差大小和升温起点有关，高起点的升温对胚胎的影响比低起点的升温更大，生产中快速升温以不超过２℃，慢速升温以不超过４℃为宜。（２）慢速降温幅度为４℃时，对胚胎发育无影响，为８℃时，有影响；快速降温幅度为４℃时，对胚胎孵化率和正常率均有影响，生产中慢速降温以不超过８℃，快速降温以不超过４℃为宜。（３）变温幅度相同时，变温速度越大，对胚胎的影响越大。（４）原肠期是中国林蛙胚胎发育的升温敏感期，神经管期为升温非敏感期，中国林蛙胚胎发育中对升温变化较降温敏感。（５）中国林蛙的胚胎发育不会因南方天气的异常而遭到严重的影响。

饰纹姬蛙的早期胚胎发育

本文报道了饰纹姬蛙的早期胚胎发育。自受精卵期到出水孔完善期共分２５个时期，其发育进程及各时期胚胎的外形特征与四川狭口蛙基本相似，但其胚胎孵化的迟早差距较大。在水温２１±０．５℃和２４±０．５℃条件下，其胚胎发育的全过程历时分别为７６ｈ５６ｍｉｎ和６１ｈ５２ｍｉｎ。

中华大蟾蜍和花背蟾蜍染色体同源性研究

本文以培养的中华大蟾蜍（Ｂｕｆｏｂｕｆｏｇａｒｇａｒｉｚａｎｓ）、花背蟾蜍（Ｂｕｆｏｒａｄｄｅｉ）的外周血淋巴细胞为实验材料，采用ＢｒｄＵ标记法和胸苷标记的方法，获得了中华大蟾蜍与花背蟾蜍清晰的高分辨晚复制带，确定了中华大蟾蜍每一染色体的特征性晚复制区；并就中华大蟾蜍与花背蟾蜍的晚复制带纹进行了精确比较，发现中华大蟾蜍与花背蟾蜍的染色体之间具极高同源性。该结果说明：在相同的培养条件下，只要ＢｒｄＵ掺入Ｓ期的时间较为统一，显示复制带的条件基本一致的情况下。

中华大蟾蜍多种组织内5-羟色胺免疫染色细胞的分布

用过氧化物酶-抗过氧化物酶(PAP)法,对中华大蟾蜍消化道(冬眠期与非冬眠期),脑及其他组织的5-HT分布进行了研究。5-HT免疫染色细胞位于脑干中缝核区和间脑的第Ⅲ脑室腹侧的室管膜细胞区。阳性神经元呈圆形或卵圆形,细胞常有突起与其他阳性细胞突起相连,上述部位中还有一些阳性神经纤维。消化道的免疫染色细胞密度在胃幽门、胃体和胃贲门处最高,食道和十二指肠次之,大肠和小肠最低。非冬眠期蟾蜍消化道内免疫染色细胞密度明显高于冬眠期的(P<0.05)。阳性细胞位于粘膜上皮或腺上皮细胞间,细胞有一个或一个以上呈阳性反应的突起,有的突起伸入肠腔面或腺腔面,有的穿过基膜到达固有层,表明这些细胞兼有内、外分泌的功能。在甲状旁腺的主细胞间,肺呼吸性细支气管上皮和肺泡管上皮细胞间都有5-HT免疫染色细胞,细胞呈立方形、圆形、卵圆形或不规则形,常有几个细胞成簇分布。

中华大蟾蜍消化道嗜银细胞的分布及形态学观察

本文用Grimelius嗜银法对12只中华大蟾蜍消化道嗜银细胞的分布及形态进行了初步观察．结果显示：（1）中华大蟾蜍消化道嗜银细胞的分布密度依次为；食管为31．51±6.73；胃贲门为67．52±3．81；胃体部为49．41±5．69；胃幽门部为142．58±6．69；十二指肠为34．63±5．26；空肠为25．36±2．57；回肠为13．28±3．29；（2）嗜银细胞在食管部分主要集中子食管腺；在胃部主要集中于胃腺，在小肠部主要分布于绒毛上皮之间；（3）嗜银细胞的形态也是多种多样，有锥体形、三角形、椭圆形、长梭形等。

蟾蜍胰腺内分泌细胞的形态学和体视学研究

本实验应用免疫组织化学PAP法和免疫金银法-PAP法免疫双重标记以及常规电镜,对蟾蜍胰岛A、B、D细胞的形态结构及分布进行了观察;并利用A蛋白胶体金(PAG)免疫电镜技术,对胰岛素进行细胞内精确的定位。同时,根据体视学有关立体重建的原理,从A、B细胞不同大小的切面的频数分布,重建了其球体大小的频数分布。

广西黑斑蛙的染色体组型及Ag-NORs的研究

目的：对广西黑斑蛙的染色体组型及Ag－NORs进行研究。方法：采用骨髓细胞直接法制备染色体标本片及用核仁形成区的一步染色法进行银染。结果：本实验蛙的二倍体染色体2n=26。可配成13对同源染色体，其中大型5对，小型8对。在第8号染色体长臂中央具有明显次缢痕。Ag－NORs亦是在No．8，数目为2个。结论：广西黑斑蛙与国内其它地区同种蛙的染色体结构有差异。

中国林蛙康定亚种和长白山亚种染色体组型和C带研究

本文报道中国林蛙康定亚种和长白山亚种染色体组型和C带。认为染色体异态是染色体演化的表征之一。

牛蛙外周血液淋巴细胞的分离及观察

对牛蛙外周血液细胞进行了分离，结果表明相对密度1．060～1．065的Percoll分离液能有效分离出淋巴细胞，其分离率可达（94．50±1．87）％。

淡肩角蟾的核型分析

本文应用骨髓细胞直接制备染色体标本的方法研究了武夷山产淡肩角蟾(Megophrys boetteri)的核型。结果表明,淡肩角蟾的染色体数目2n=26,由6对大型的和7对小型的染色体组成,其中有8对(第1、2、4、5、6、8、10、12对)中部着丝粒染色体,4对(第3、7、9、11对)亚中部着丝粒染色体和1对(第13对)端部着丝粒染色体。第6对染色体的长臂上有时可见到次缢痕。从核型特征上看,淡肩角蟾确是无尾两栖类中较原始的种类。

金线蛙冬眠期与出眠初期肝脏比较细胞学研究

本实验对金线蛙冬眠期与出眠初期肝脏进行了比较细胞学研究。结果表明冬眠期肝细胞含有大量糖元颗粒和一些脂滴，线粒体数目少，未见粗面内质网；出眠初期糖元颗粒稀少但仍有脂滴，粗面内质网丰富，线粒体数目多，这提示蛙类在冬眠中优先依靠消耗糖元维持生存。此外，本文还对两个时期肝细胞中细胞器种类和数量变化的意义进行了讨论。

环境温度影响蟾蜍卵母细胞成熟能力的机制之实验分析

长年饲养在高温(28—30℃)环境中雌性中华大蟾蜍,它们的卵母细胞可以长足,但经激素处理时,生发泡不破裂,仅显示成熟过程早期阶段的变化。值得注意的是,在孕酮刺激后的高温卵卵质中,出观了一种能诱发低温卵恢复减数分裂的物质,称作为“依赖冬眠因子的促成熟物质”(HF-MPS)。HF-MPS 与MPF 有不少相似之处,如孕酮处理后,它们在卵质中出现的时间相仿,它们的形成均不依赖于转录水平,而是依赖于翻译水平的蛋白质合成活动;但亦存在不同之处,如MPF 诱发低温卵GVBD 时程不受温度影响,而HF-MPS 在10℃环境中,诱发低温卵GVBD 的时间明显延缓;MPF 不仅能诱发低温卵GVBD,而且同样能诱发高温卵GVBD,然而,HF-MPS 只能诱发低温卵GVBD。由此表明,MPF 和HF-MPS 似乎是截然不同的两类活性蛋白质。高温卵缺少低温诱发产生的“冬眠因子”,所以不能恢复cdc 2基因的转录活动,不能实现MPF 自身催化扩增作用,不能保证孕酮处理后的卵母细胞完成正常成熟的全过程变化。足见,低温是中华大蟾蜍卵母细胞恢复减数分裂过程中的必要条件,是导致中华大蟾蜍现有区域分布的内在原因之一。

温州不同区域泽蛙染色体组型比较研究

本文报道温州四个不同区域泽蛙（ Ｒａｎａｌｉｍｎｏｃｈａｒｉｓ Ｂｏｉｅ） 的染色体组型。结果表明四处泽蛙均为２ｎ＝２６ （５ ＋８） ， ＮＦ＝５２ 。温州市区、乐清、洞头泽蛙在６ｐ 上有一对次缢痕， 文成泽蛙在７ｐ 上有一对次缢痕。洞头、文成泽蛙ｎｏｓ－４、９、１１ 为ＳＭ 染色体， 其余均为Ｍ 染色体； 温州泽蛙ｎｏｓ－３、４、８ 为ＳＭ， 其余均为Ｍ 染色体；乐清泽蛙ｎｏｓ－４、９ 为ＳＭ 染色体， 其余均为Ｍ 染色体。通过温州不同区域以及国内外其它地区泽蛙染色体组型的比较， 结果差异明显， 显示泽蛙核型的多样性。

二种蛙类染色体核仁组织者的银染观察

本研究观察了斑腿树蛙和武夷湍蛙的Ag-NOR_s。其中斑腿树蛙的一对Ag-NOR_s出现在No-10染色体的长臂中间区。武夷湍蛙中,除No-6染色体长臂近着丝点区有一对Ag-NOR_s外,No-12上也有一对略小的Ag-NoR_s,这反映了Ag-NOR_s的扩增现象。从与某些近缘种相比较的结果表明,这两种蛙的次缢痕和Ag-NoR。位置,均具有本物种的特性,并且,在次缢痕与Ag-NOR_s之间有对应关系,但不是绝对的(武夷湍蛙No-11上未见有次缢痕区)。

中华大蟾蜍冬眠前与出眠初期肝细胞超微结构的观察

冬眠前和出眠初期的中华大蟾蜍肝细胞的超微结构有如下特点 :(1)冬眠前肝细胞堆积有大量糖元颗粒 ,而出眠初期几乎无糖元颗粒 ;(2 )冬眠前肝细胞的粗面内质网非常发达 ,而出眠初期的粗面内质网不发达 ,常呈零散膨大 ;(3)线粒体的数量 ,细胞核和胆小管的形态结构在这两个时期无明显差异 ;(4)冬眠前肝细胞可分为两种不同的类型

广西黑眶蟾蜍核型及Ag-NOR研究

目的：探讨黑眶赡蛛的核型、Ag－NOR及NOR染色体。方法：直接用骨髓细胞按常规方法进行染色体片制备和核型分析，用谭安鸣的一步染色法显示Aq－NOR。结果：2n=22（18M＋4SM），No.4，8为SM，No．11为主要NOR染色体，11qter有3种情形：①有副缢痕和小随体；②有浅染末端无随体；③无浅染末端和随体。除11qter上有Ag－NOR外，一雄赡的部分4pper上也显出Ag－NOR。结论：广西黑眶赡蛛的核型与广东、福建两地的有差别，这种差别可能为不同地理种群所固有。No．11是主要NOR染色体，但No．11及Ag－NOR均存在多态现象。

用DNA酶切小分子片段在非洲爪蟾卵提取物中实现非细胞体系核装配

用质粒ｐＢＲ３２２的ＤＮＡ酶切片段，长度分别为７５０、３７５和１８６ｂｐ作为外源ＤＮＡ在非洲爪蟾 卵提取物中实现了非细胞体系的核装配（核重建）。将分离纯化得到的 ＰＢＲ３２２ ＤＮＡ酶切后经低熔 点琼脂糖回收ＤＮＡ片段，长度为７５０、３７５和１８６ｂｐ，分别加入到爪蟾卵提取物再生系统中温育， 经ＤＡＰＩ染色、孚尔根染色及电子显微镜观察发现能装配大量的重建核。显微分光光度法研究表 明，ＤＮＡ片段在诱导形成重建核的过程中发生了明显的凝集－会凝集变化。α－３２Ｐ－ｄＣＴＰ掺入重建核 的液闪计数结果表明，ＤＮＡ酶切小分子片段诱导形成的重建核具有较高的ＤＮＡ复制活性，而且复 制活性在一定范围内与加入的ＤＮＡ片段长度呈正相关。实验结果表明，非细胞体系中诱导的核重 建不仅与外源ＤＮＡ的种类无关，与外源ＤＮＡ的长度也没有关系。

非细胞体系核重构的过程及重构核活性的研究

我们首先利用 Lambda DNA 与活化的非洲爪蟾卵提取物进行了非细胞体系核重构,并在此基础上对核重构过程的超微结构与重构核的功能进行了研究。将活化约半小时后的非洲爪蟾卵在10,000G分离心除去脂类,卵黄,色素及卵核后得到卵提取物(extracts),它们由大量的线粒体,各种大小的膜泡及均匀的基质构成;将它们在22℃温育一定时间后,可以观察到有很多环形片层结构出现;在活化体系中加入 Lambda DNA 后温育,可以观察到核重构现象。重构核具有完整的双层膜及典型的核孔结构。

爪蟾脊索细胞的决定

在两栖类,关于脊索对邻近组织的作用有大量的研究工作,但是,相反,关于邻近组织对脊索的影响过去几乎没有任何报道。因此,本工作企图通过外植的方法,研究脊索在早期发育是是如何决定的,是否也受邻近细胞的影响。结果发现,脊索的决定是一个渐进的过程,并提供了研究邻近组织影响的线索。