两种龟类Sox基因的PCR扩增及SSCP分析的研究

采用ＰＣＲ技术，扩增了平胸龟、黄缘盒龟的Ｓｏｘ基因，扩增产物与人ｐＹ５３．３ＳＲＹ基因探针进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，证实了扩增产物是人ＳＲＹ基因的同源片段；采用ＳＣＰ分析技术，显示龟类该基因片段的序列与人有较大差异，而龟类种间差异则较小，种内雌雄个体间则无差异．本文结果支持Ｓｏｘ基因在系统演化上十分保守的结论．

亚洲淡水和陆生龟鳖类12S rRNA基因片段的序列分析和系统发生研究

对亚洲产淡水和陆生龟鳖类4科23个种进行了DNA序列水平的分子系统学研究，用PCR技术扩增约400bp的线粒体12SrRNA基因片段并进行了序列分析，合并从GenBank中检索到的其它龟鳖类的序列数据，在基于二级结构的对位排列基础上用邻结法进行了系统发生研究。结果表明，潮龟科与陆龟科的亲缘关系比龟科与陆龟科的近；支持将平胸龟属归为鳄龟科的1个属；潮龟科是并系起源的，从12SrRNA基因序列得到的系统发生关系不支持根据形态学和染色体性状对潮龟科的分亚科和分组。根据12SrRNA基因片段的序列差异和化石记录的分歧时间计算得到的颠换积累速率，支持龟鳖类mtDNA慢速率进化理论。

中国四种龟的细胞遗传研究

本文研究了我国四种龟类动物的核型、Ｃ带和Ａｇ－ＮＯＲ＿ｓ。结果表明金头闭壳龟的核型２ｎ＝５２（１４Ｍ＋２ＳＭ＋４ＳＴ＋６Ｔ＋２６ｍ），ＮＦ＝７２，核型模式为８＋５＋１３，一对次缢痕位于Ｉ组的Ｎｏ．１ｐｉｎｔｅｒ；三线闭壳龟核型２ｎ＝５２（１２Ｍ＋４ＳＭ＋４ＳＴ＋６Ｔ＋２６ｍ），ＮＦ＝７２，８＋５＋３，黄缘盒龟的核型 ２ｎ＝５２（１６Ｍ＋４ＳＴ＋６Ｔ＋２６ｍ），ＮＦ＝７２，８＋５＋１３，一对次缢痕位于Ｉ组Ｎｏ．１ｐｉｎｔｅｒ；黄额盒龟２ｎ＝５２（１６Ｍ＋２ＳＭ＋４ＳＴ＋６Ｔ＋２４ｍ），ＮＰ＝７４，９＋５＋１２，有４对次缢痕，分别位于Ｉ组的Ｎｏ．１ｐｉｎｔｅｒ，Ｎｏ．３ｐｐｅｒ，Ｎｏ．７ｐｐｅｒ和Ｎｏ．６（Ｘ染色体）ｑｐｅｒ。黄额盒龟有１对异型（ＸＹ型）性染色体，其余３个种没有。这四种龟的全部染色体都出现着丝粒区Ｃ带正染。它们都仅出现１对ＡｇＮＯＲｓ，其中黄额盒龟的Ａｇ－ＮＯＲｓ。位于ＩＩ组的Ｎｏ．５ｑｐｅｒ，其余３个种的Ａｇ－ＮＯＲ＿ｓ位于Ｉ组的Ｎｏ．７ｑｔｅｒ。本文还阐述了近缘种间核型的演化机制和黄额盒龟性染色体分化的途径。

平胸龟Sox基因的克隆和序列分析

本文采用 PCR技术扩增和克隆了平胸龟的 Sox基因 ,并通过银染测序进行了序列分析。结果显示 ,平胸龟雌雄个体均能扩增出相同长度的片段 ,其 DNA序列与人 SRY基因的 HMG box同源性达 72 .7% ,推测的氨基酸序列与 SRY基因的 HMG box序列同源性为 4 6.5% ,充分显示出 Sox基因在系统进化上的保守性。本文为 Sox基因的起源和进化研究提供了资料。

中国水龟类的核型与银带带型研究

以血培养细胞为材料，研究了三种水龟的核型与NORs，结果表明，染色体数均为2n=52，核型模式9＋5＋12，属龟科核型中的原始类型。但眼斑水龟NF＝76，而四眼斑水龟和黄喉拟水龟的NF＝78。从核型结构看，眼斑水龟与四眼斑水龟相似，而黄喉拟水龟则有较大差别，作者还发现黄喉拟水龟核型的一些重要特征，即其A组No．3和No.6染色体有次缢痕，No．6长臂呈清晰的随体，这些是拟水龟属枝型的主要特征，但在以往的资料中都未曾记载过。三种水龟的雌雄个体间均未见有异型的性染色体。仅显示一对NORs，并均位于A组较小的一对中部着丝粒染色体上，表明其NORs核型的保守性和NORs位置的一致性。

中华花龟的染色体组型与Ag-NORs

本文研究中华花龟的核型和ＮＯＲｓ，其目的：为花龟属的分类，进化及探索其细胞遗传特性提供资料．方法：以外周血淋巴细胞为材料，以蒸气固定—空气干燥法制备染色体标本，常规方法分析核型．用一步染色法显示ＮＯＲｓ．结果：２ｎ＝５２，ＮＦ＝７６，核型模式为９＋５＋１２，花龟的一对ＮＯＲｓ位于Ａ组Ｎｏ．７长臂．结论：中华花龟的核型和ＮＯＲｓ均具有Ｂａｔａｇｕｉｎａｅ亚科龟类的保守性特点，就ＮＯＲｓ分析。

三种龟类动物的细胞遗传研究

本文以外周血淋巴细胞为材料，首次报道马来闭壳龟和地龟的核型，G带，C带和Ag－NORs，以及平胸龟的G带和C带。发现平胸龟的核型与前人报道的有差异。研究结果表明：平胸龟2＝54（14M＋4ST＋ST＋28m），N．F＝72，7＋6＋14。A组No．6qper有一次缢痕．Ag－NOAs位于A组的Nb．7qter。其全部染色体的着丝粒区均显示阳性C带，并且A组的No．7整条异染色质化；马来闭壳龟Zn＝52（18M＋4ST＋6T＋24m），N．E＝74，9＋5＋12。Ag－NORs位于A组No．7qter．全部染色体的着丝粒区均有深染C带，C组的No．1整条异染色质化；地龟核型Zn＝52（16M＋4ST＋6T＋26m），N．F＝72，8＋5＋13，A组No．7pper有一次缢痕。Ag－NORs位于A组No．7qper，呈异态。全部染色体着丝粒区C带阳性，A组的No．1qter和Nb．2，7pqter呈现C带阳性．在三种龟的G带型中，仅马来闭壳龟A组No．8和B组No．2有时呈现同源染色体间异型，其余均可进行同源配对．本文还讨论了核型的演化机制。

两不同地域中华鳖的核型

本文研究了江苏南京和浙江绍兴中华鳖的染色体组型。结果表明，两者核型完全一致，均为2n＝66（4M＋8SM＋16T＋38m），NF＝78，核型模式为6＋8＋19。通过对两者比较发现，两者绝对长度与相对长度均有差异，南京中华鳖第5对SM染色体为大型染色体中最小的，而绍兴中华鳖第5对SM染色体与第1对T染色体等大，另外，两者臂比指数也有差异，但差异不显著（P＞0．05）。本文还将中华鳖核型与其它龟鳖类核型作了比较，从系统演化方面进行了讨论。

缅甸陆龟染色体组型的研究

以缅甸陆龟的血液淋巴细胞离体培养,制备染色体标本,研究它的染色体组型,结果表明:缅甸陆龟染色体数2n=52,这些染色体可分为A、B、C、D、E组。A组:NO_s 1—2,为中央着丝粒染色体。B组:NO_s 3—6,为近端着丝粒染色体。C组:NO_s 7—12,除NO 11为亚中央着丝粒外,其余为中央着丝染色体。D组:NO_s 13—15,为亚中央着丝粒染色体。 E组:NO_s 16—26,大多数为很小的染色体。在染色体组型中,未见异性染色体对。

凹甲陆龟染色体组型的研究

目的:研究凹甲陆龟Testudoimpressa(Guenther)的染色体组型及减数分裂染色体。方法:以离体培养的外周血淋巴细胞、骨髓和精巢为材料,按常规的秋水仙素-低渗-空气干燥制片法制片和组型分析。结果:凹甲陆龟染色体数2n=52,包括A组8对大型中部和亚中部着丝粒染色体,B组7对大型亚端部和端部着丝粒染色体及C组11对微小染色体。精母细胞减数分裂终变期显示具有26个二价体。雌雄细胞之间未见异型染色体。结论:凹甲陆龟在No.1、4～5、12～14号染色体的着丝粒位置上表现出种的特异性;在No.14染色体长臂近着丝粒区有一对明显的次缢痕。

中华鳖MHC I α2链基因克隆及序列分析

目的：为了探明中华鳖ＭＨＣ的结构与功能和寻找该种群的分子标记，对中华鳖ＭＨＣｃｌａｓＩα２基因中由两个半胱氨酸形成二硫键的区域进行了克隆和序列分析。方法：根据人和动物的ＭＨＣＩａα２链中两个半胱氨酸侧翼的保守序列设计了混合型引物，采用ＰＣＲ法从中华鳖基因组ＤＮＡ中克隆了ＭＨＣＩα２链（ＴｒｓｉＢＸ１）。结果：经氨基酸序列的同源性分析，ＴｒｓｉＢＸ１存在抗原多肽结合位点（Ｔ１４３、Ｋ１４６、Ｗ１４７、Ｙ１５９）以及β２微球蛋白结合位点（Ｑ１１５、Ａ１１７、Ｄ１１９、Ｇ１２０、Ｄ１２２），并与人和动物的ＭＨＣＩａα２存在４１１％～６３９％同源性。结论：ＴｒｓｉＢＸ１属ＭＨＣｃｌａｓｓＩａ类基因，可作为中华鳖种群的分子标记。

缅甸陆龟染色体高分辨G带

我们用高分辨技术揭示缅甸陆龟单组染色体（２６条染色体）有４０８条高分辨Ｇ带，描述这些带所属的区段及其特征，提供其模式图。