蛛丝蛋白载药膜的结构表征及其降解性能研究

为治疗化疗后的口腔黏膜炎,以敬钊缨毛蛛的天然蛛丝作为成膜材料制备载药膜剂,并对膜剂特性进行表征。采用溶剂浇铸法制备出蛛丝蛋白膜,通过水接触角实验、傅立叶红外光谱法、X-射线衍射法、扫描电镜评价膜剂的结构特征,探讨了膜剂的降解性。本试验所制备膜剂表征实验证明药物成功载入膜中,降解实验表明膜剂在人工唾液中7 d内的降解失重率仅5%,在人工胃液中72 h降解失重率达到65%以上。以天然蛛丝-六氟异丙醇溶液为成膜液,采用溶剂浇铸法可成功制备出载有肌苷药物的口腔膜剂。

人促甲状腺激素受体A亚单位蛋白在昆虫细胞体系中的分泌性表达

目的拟构建昆虫细胞分泌表达体系,在草地夜蛾卵巢细胞分泌性促甲状腺激素受体(thyroid stimulating hormone receptor,TSHR)A亚单位蛋白。方法将TSHR A亚单位蛋白(22-289)和绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)基因连接到质粒,并通过转化、蓝白斑筛选获得重组杆粒,将其转染入sf9昆虫细胞收获重组杆状病毒,扩增并测定滴度。最终通过蛋白印迹实验鉴定重组蛋白的表达并优化表达条件。结果在蛋白表达体系的构建过程中,PCR鉴定和测序均证实了重组质粒和重组杆粒序列的正确性。将重组杆粒转染入细胞后观察到病毒出芽迹象,空斑实验鉴定P1代病毒的滴度为2×10^(7) pfu/m。蛋白印迹显示重组蛋白分子质量为55 ku,主要在培养基中。蛋白表达的最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)为1,最佳感染时程为72 h。结论本研究构建了TSHR A亚单位的昆虫细胞杆状病毒表达体系,该体系能够外泌性表达分子质量为55 ku左右的蛋白TSHR 22-289,且蛋白能够成功的糖基化修饰。该系统为其工业化平台的建设及生产提供前期基础,也针对日后TSHR蛋白的研究和Graves病的病因预防提供了有用的工具。

小金蝠蛾幼虫血细胞对病原真菌的免疫防御研究

[目的]研究小金蝠蛾幼虫血细胞对不同病原菌侵染的细胞免疫响应差异,揭示拟棒束孢病害发生和冬虫夏草菌形成机理的细胞免疫差异。[方法]利用光学显微镜观察小金蝠蛾幼虫感染病原菌后血细胞的数量、形态变化、细胞免疫反应和黑化反应,以L-多巴为底物,采用分光光度法测定感染不同时间后的血淋巴中酚氧化酶活性。[结果]小金蝠蛾幼虫感染冬虫夏草菌的生存曲线无显著差异,血细胞对冬虫夏草菌无明显的集结、包囊、黑化等免疫作用,酚氧化酶活性侵染初期出现降低,然后逐渐恢复至健康幼虫水平;小金蝠蛾幼虫感染粉棒束孢的生存曲线具有显著差异,对感染早期血细胞具有明显的集结、包囊、黑化等免疫响应,酚氧化酶活性初期降低后逐渐升高。[结论]小金蝠蛾幼虫血细胞对病原真菌冬虫夏草菌和粉棒束孢免疫防御响应策略具有显著差异,血细胞对冬虫夏草菌无明显的免疫反应,对粉棒束孢虽然有强烈的免疫反应,但是不能阻止粉棒束孢的快速萌发而导致幼虫短期内死亡。

夹竹桃天蛾胚胎细胞的原代培养

夹竹桃天蛾是一种世界性害虫。以夹竹桃天蛾虫卵为材料,通过机械破碎的方法对其进行原代培养,确定了Grace’s insect medium为最适合的培养基。对夹竹桃天蛾胚胎细胞进行了长达12月的原代培养,观察到在原代培养物中分化出的多种形态的原代细胞。夹竹桃天蛾胚胎细胞的原代培养初探为进一步建立夹竹桃天蛾细胞系提供了重要的实验依据。

昆虫细胞色素P450的多样性和功能

细胞色素P450是一类广泛存在的催化酶,能够在昆虫体内参与外源性物质的代谢和内源性物质的合成与降解,帮助昆虫进行正常的生理活动。尽管昆虫细胞色素P450的多样性和功能一直是研究的热点,但目前仍缺乏对这个领域的系统总结和归纳。本文综述了昆虫细胞色素P450数量、表达和反应类型的多样性以及细胞色素P450在昆虫中的功能和进化等方面的研究进展,为更好地研究和利用昆虫细胞色素P450的多样性和功能提供有力的参考依据,同时也能促进我们更好地理解昆虫的代谢和生理活动。

水杨酸与过氧化氢信号途径在褐飞虱诱导的水稻挥发物释放中的作用

以水稻、褐飞虱及其卵期重要寄生蜂稻虱缨小蜂为模式系统,研究了水杨酸与过氧化氢信号转导途径在褐飞虱为害诱导的水稻挥发物释放中的作用.结果表明,褐飞虱为害能迅速地导致水稻体内水杨酸(为害后1h)和H2O2(为害后1.5h)含量的上升,早于褐飞虱为害诱导水稻释放引诱稻虱缨小蜂挥发物所需的时间.外用水杨酸和H2O2处理的试验结果表明,水稻生理浓度范围内的水杨酸处理能诱导水稻释放引诱稻虱缨小蜂的挥发物,而H2O2则只有在远高于水稻生理浓度时才能诱导.水杨酸或H2O2处理的稻株挥发物对寄生蜂的引诱作用要弱于褐飞虱为害的稻株,并且在挥发物组成相方面亦与后者存在比较明显的差异,尽管它们之间显示了一些相似的变化.这些结果说明水杨酸信号转导途径参与了褐飞虱为害诱导的水稻挥发物的释放,而H2O2信号转导途径在其中的作用则可能相对较小;同时,也表明了这些挥发物的释放除了水稻体内水杨酸信号转导途径的参与外,还可能涉及到其它的信号转导途径.

虫生真菌中对松墨天牛高毒性蛋白的筛选及性质测定

从 6株虫生真菌中分离纯化了 4 8种蛋白。以松墨天牛Monochamusalternatus为试虫 ,通过生测筛选出 4种高毒性蛋白 ,并从 4种高毒性蛋白中筛选出毒力最强的蛋白Bb36W D。蛋白Bb36W D含 2个亚基 ,大亚基和小亚基的分子量分别约为 2 4kD和 17kD ;等电点分别为 9 4 7和 9 32。该蛋白含 16种氨基酸 ,其中精氨酸、组氨酸及丙氨酸含量较高。

不同地域小稻蝗mtDNA部分序列及其相互关系

测定了 9个不同地理区域的小稻蝗Oxyaintricata (St l)共 33个个体的线粒体DNA (mtDNA)细胞色素b基因部分序列 ,比较其同源性 ,计算核苷酸组成 ,并用瘤锥蝗科的曲尾似橄蝗Pseudomorphacrishollisi和斑腿蝗科的芋蝗Gesonulapuncti frons作外群构建NJ分子系统树。在获得的小稻蝗 432bp的序列中 ,A +T约占 70 3 % ,其中 30个核苷酸位点存在变异 (约占所测核苷酸的 6 9% ) ,有 5个位点引起了氨基酸的变异。就每个氨基酸密码子来看 ,第 3位点的A +T含量较高 ,达90 4%。由NJ树显示 ,小稻蝗mtDNA细胞色素b序列不同单倍型之间有一定的分歧 ,形成不同的簇类关系 ,其分枝与地理分布没有直接的对应关系 ,但总体上看 ,这种簇类关系基本上呈平行分布 ,没有明显的地域性差别。

褐飞虱唾液中诱导水稻释放挥发物的活性组分研究

行为生测表明在褐飞虱的头部磨碎液中存在诱导水稻释放引诱稻虱缨小蜂挥发物的活性组分,这些活性组分主要属于蛋白质类.在-15～-20℃条件下褐飞虱头部磨碎液的生物活性,至少可保持38d,但72d后全部丧失.褐飞虱唾液中存在的α葡萄糖苷酶、β葡萄糖苷酶、α淀粉酶和β淀粉酶等4种主要酶类中,仅β葡萄糖苷酶所处理的稻株挥发物能明显地引诱稻虱缨小蜂.褐飞虱头部磨碎液、磨碎液中的蛋白质以及β葡萄糖苷酶等处理稻株的挥发物与褐飞虱雌成虫为害株的挥发物对稻虱缨小蜂的引诱作用无明显差异.挥发物提取、分离与鉴定的结果表明,褐飞虱头部磨碎液、头部磨碎液中分离的蛋白质类以及β葡萄糖苷酶等处理所诱导释放的水稻挥发物与褐飞虱雌成虫为害株所释放的挥发物组成相似.这些结果表明褐飞虱唾液中的蛋白质类,尤其是β葡萄糖苷酶在褐飞虱诱导的水稻挥发物释放中起着重要作用.文中还就褐飞虱唾液中可能存在的各类活性组分及其可能的作用机理进行了讨论.

光增白剂对甜菜夜蛾围食膜结构的作用与影响

应用环境扫描电镜和生化技术研究了甜菜夜蛾Spodopteraexigua正常围食膜和光增白剂M2R处理围食膜的形态、结构和组成。结果表明 :正常的围食膜表面光滑致密、无孔洞和缝隙 ;光增白剂处理的围食膜产生了孔缝。正常围食膜所含蛋白质的种类很多 ,经SDS PAGE测定至少有 17条多肽 ,分子量多在 97 4kD以下 ,围食膜蛋白质的含量约为 4 1 98% ,糖的含量约为 2 0 5 %。光增白剂可以解离大部分围食膜蛋白 ,液滴法喂食幼虫蓝色葡聚糖 2 0 0 0进一步证实了光增白剂能破坏围食膜的完整性。

水稻β-石竹烯合成酶基因OsCAS的克隆鉴定、原核表达及其遗传转化

为阐明水稻β-石竹烯在调节水稻、害虫及其天敌相互关系中的作用,克隆鉴定了一个水稻β-石竹烯合成酶基因OsCAS,并对其原核表达与遗传转化进行研究.该基因的cDNA全长1731 bp,包含一个1728 bp的开放阅读框,编码一个由576个氨基酸组成的蛋白,预测分子量66.5 kDa.系统进化树分析表明,水稻OsCAS基因编码蛋白的氨基酸序列与同为单子叶植物玉米的β-石竹烯合成酶氨基酸序列同源性达99%,而与其他植物(拟南芥、青篙、黄瓜)的同源性仅51%.褐飞虱为害和茉莉酸处理能明显上调OsCAS基因的表达水平.同时原核表达了OsCAS基因,并利用农杆菌转化系统获得OsCAS基因过量表达和RNAi的水稻品系,为分析OsCAS基因的生化与生物学功能奠定了基础.

臭蜣螂体壁的组织结构

对臭蜣螂CoprisochusMotschulsky体壁的组织学结构进行了光镜观察。用伊红和马洛赖氏三色法染色可见体壁尤其在腹壁的折叠处及膜翅壁中存在着胶原纤维。鞘翅中有内腔 ,具皮细胞 ,鞘翅背部表皮下陷形成桥墩状结构以支撑加固鞘翅腔并减轻重量。膜翅的背腹壁之间也具有内腔和皮细胞 ,并充满油脂腺 (经分析是棕脂肪细胞腺 )及其分泌物。足的肌肉束中被大量棕脂肪细胞腺环绕。棕脂肪细胞的存在为周围器官提供所需能量 ,并有减轻重量和润滑的作用。体壁表面具有大量突起、刚毛及大量粗细不等的管道与其下相通 ,加上大量油脂腺及其分泌机能 ,为其体表的减粘特性提供了形态和化学基础。

家蚕胚胎细胞系BmE-SWU2的建立及其生物学特性研究

家蚕反转期胚胎组织经过一年多的原代培养,建立了BmE-SWU2细胞系。该细胞系细胞呈短梭形或圆形,细胞较小,属上皮型贴壁生长细胞系;细胞生长速度快,铺平率高于80%,繁殖力强,细胞群体倍增时间为51·8h。BmE-SWU2细胞系的二倍体细胞(2n=56)比例达到89·76%,属二倍体细胞系,其染色体具有鳞翅目昆虫染色体的典型特征,中期染色体呈短杆状或颗粒状。BmE-SWU2细胞系对BmNPV高度敏感,TCID50为1·581×10-7。

甜菜夜蛾细胞分裂期染色体的观察

以精巢组织为材料 ,采用空气干燥法制备染色体标本 ,对甜菜夜蛾Spodopteraexigua有丝分裂和减数分裂染色体形态行为进行了研究。结果表明 :甜菜夜蛾的染色体数目为n =31;染色体为弥散着丝粒染色体 ,2条染色体上存在次缢痕 ;晚偶线期出现染色体互锁现象 ;从早粗线期到晚粗线期联会复合体逐渐伸长 ;终变期同源染色体形成环状、端部交叉、尾尾相对的结构。

蝇蛆几丁低聚糖咀嚼片的调节血脂作用

研究和评价了蝇蛆几丁低聚糖咀嚼片的调节血脂作用及其安全性。将50只实验动物 (大鼠) 随机分为普通饲料对照组、高脂饲料对照组和3个实验组, 实验组分别喂以不同剂量蝇蛆几丁低聚糖咀嚼片和高脂饲料。饲养28天后, 分别测定大鼠血清总胆固醇 (total cholesterol, TC)、血清总甘油三酯 (triglyceride, TG)、血清高密度脂蛋白胆固醇 (high densitylipoprotein cholesterol, HDLC) 的含量。用Horn’s法对蝇蛆几丁低聚糖咀嚼片的急性毒性进行研究, 连续观察7天, 记录各组动物的中毒反应情况和死亡只数, 计算咀嚼片对小鼠的半数致死剂量。同时对几丁低聚糖咀嚼片作了调节血脂的动物试验, 研究结果表明, 蝇蛆几丁低聚糖咀嚼片对大鼠血清总胆固醇、总甘油三酯有明显降低和对血清高密度脂蛋白胆固醇有明显稳定作用, 具有辅助降血脂作用; 对咀嚼片进行急性毒性实验表明, 蝇蛆几丁低聚糖咀嚼片对小鼠的半数致死剂量大于10 g kg·bw, 提示其基本无毒。

八字地老虎血球细胞系的建立

由八字地老虎Xestiac nigrum血细胞建立了一株细胞系 ,命名为NEAU Xc 96 0 716H ,原代培养 90余天 ,现已传至 70余代。细胞多为圆形 ,部分梭形 ,细胞群体倍增时间约为 6 3h。具有典型的鳞翅目昆虫染色体特征 ,数量多 ,形态为短杆状和球形。酯酶同工酶谱为 5条主带 ,与同种昆虫 (八字地老虎 )的胚胎细胞系 (NEAU Xc 730E)酯酶图谱稍有不同 ,而与草地夜蛾细胞系 (IPLB SF 2 1)的酯酶图谱完全不同。该细胞系可以被八字地老虎核型多角体病毒XcNPV感染 ,但感染率较低。

酵母粉对果蝇精子发生之影响

目的探讨酵母粉对果蝇精子发生各时期的影响。方法野生型黑腹雄蝇按2-3-3法处理,置于每管酵母粉含量为0,5 mg/vial,10 mg/vial,15 mg/vial培养基中培养,统计精子发生各阶段精细胞数目。结果随着酵母粉量的增加,精子发生在各阶段细胞数量增加,在不同处理组中雄蝇在其精子发生各阶段中,以第3天形成精细胞数量最多,其中10 mg/vial和15 mg/vial最为显著。酵母粉量的增加,在精细胞阶段促进精细胞数量增加最为显著,成熟精子阶段也有增加,精母细胞阶段精细胞数量呈增加后逐渐减少趋势。结论酵母粉可促进果蝇的精子发生,特别在精细胞阶段,促使精细胞数量增加,高峰期明显提前并持续延长形成时间。

昆虫细胞色素P450研究的一些新进展

报道了有关细胞色素P45 0研究的一些新发现。果蝇和冈比亚按蚊基因组测序的完成 ,使人类对昆虫P45 0的多样性有一完整的概念 ,已查明果蝇和冈比亚按蚊基因组中分别含有 90种和 1 1 1种P45 0基因。P45 0介导的果蝇对DDT的抗性被证明是Cyp6g1基因超量表达的结果。昆虫可以窃听植物分子信号 (水杨酸、茉莉酮酸 ) ,通过P45 0的诱导机制增强自身对植物防御物质的反防御能力。从分子水平上鉴定了 2个参与蜕皮素合成的线粒体P45 0基因。细胞色素P45 0在昆虫信息素降解中的作用得到鉴定。

4种尸食性蝇类卵的表面超微结构

:【目的】明确尸食性蝇类卵的形态 ,以便于在医学和法医学中的应用。【方法】用扫描电镜机观察杭州地区 4种尸食性蝇类卵的形态。【结果】丝光绿蝇、大头金蝇、巨尾阿丽蝇和厩腐蝇卵的超微结构形态各异 ,卵的大小、表面形态、中区、孵出线、卵孔和垂柱皆为重要的鉴别特征。【结论】通过卵壳超微结构可区分常见尸食性蝇类。

柞蚕滞育蛹抗菌物质产生及其抑菌活性研究

以虫草菌对柞蚕滞育蛹进行诱导,收集不同发育时期的血淋巴,用多种病原真菌、细菌对其进行抑菌活性检测,研究其抗菌谱,并以大肠杆菌、柞蚕链球菌诱导柞蚕蛹作比较。结果表明:3种诱导源均能诱导产生抗菌物质,且三者所产生的抗菌物质对金黄色葡萄球菌等几种细菌的抗菌活性差别不明显;虫草菌诱导产物对细菌、真菌的抑菌谱广。蛋白质酸性电泳结果表明,虫草菌诱导后的柞蚕蛹血淋巴中有新的小分子蛋白产生,推测可能是具有抗菌活性的物质。