载脂蛋白E基因敲除及高脂饮食小鼠海马CA1和CA3区神经元内IP3及IP3R-1表达的变化

目的观察载脂蛋白E(ApoE)基因敲除(KO)及高脂饮食小鼠海马CA1和CA3区神经元内三磷酸肌醇(IP3)和三磷酸肌醇受体-Ⅰ(IP3R-1)表达的变化。方法将30只C57BL/6J小鼠分为对照组(C组)、ApoE KO组(KO组)、ApoE KO高脂饮食组(KO-HF组)。小鼠造模成功后称重;取血检测血脂;取小鼠脑组织分别进行HE染色、免疫组织化学染色和计算机图像分析。结果与C组比较,KO、KO-HF组体重、总胆固醇、甘油三酯及低密度脂蛋白胆固醇含量明显升高(P<0.05)。HE染色观察到,KO和KO-HF组小鼠海马锥体细胞排列较松散,胞体较小。与C组比较,KO组小鼠海马CA1和CA3区神经元内IP3和IP3R-1平均光密度值均降低,KO-HF组小鼠海马CA1和CA3区神经元内IP3和IP3R-1平均光密度值均降低明显(P<0.05)。结论 ApoE KO及高脂饮食可导致小鼠海马CA1和CA3区神经元内IP3和IP3R-1表达降低,这两种蛋白可能参与了ApoE异常,由此引发阿尔茨海默病的病理发生发展过程。

“心痛三两三”方对异丙肾上腺素引起的斑马鱼心肌缺血的作用

目的:研究“心痛三两三”方对异丙肾上腺素引起的斑马鱼心肌缺血的作用。方法:用“心痛三两三”方9.4、18.75、37.5、75、150和300μL/mL浓度干预受精后2~3 d野生型AB品系斑马鱼,根据斑马鱼的毒性表型和死亡情况确定“心痛三两三”方的最大耐受浓度,从而筛选出本研究的给药剂量。实验设“心痛三两三”方高、中、低剂量组,浓度分别为75.0、25,0、8.3μL/mL,阳性对照丹参滴丸组浓度为500μg/mL,正常对照组和模型对照组,每组30尾置于六孔板中,各组均置于28℃培养箱中培养4 h后,用50 mg/mL盐酸异丙肾上腺素诱导60 min建立斑马鱼心肌缺血模型。共同处理结束后,用吖啶橙法染色分析斑马鱼心脏部位凋亡细胞荧光强度;心跳血流分析软件录制斑马鱼血流视频,分析斑马鱼心输出量和血流速度。结果:与模型对照组比较,“心痛三两三”方中、高剂量组斑马鱼心脏部位凋亡细胞荧光强度显著降低(P<0.05,P<0.01),其凋亡改善率分别为34%和54%。“心痛三两三”方低、中、高剂量组斑马鱼心输出量和血流速度明显提高(P<0.01),其改善率分别为52%、93%、62%和29%、53%、32%。结论:“心痛三两三”方对异丙肾上腺素诱导的斑马鱼心肌缺血具有明显改善作用,与改善心肌细胞凋亡有关。

miR-144过表达慢病毒对关节炎模型小鼠滑膜组织病理进程的影响

目的探讨miR-144过表达慢病毒对于关节炎模型小鼠滑膜组织病理进程的作用及其可能的机制。方法将Ⅱ型胶原乳剂注射至BALB/c小鼠尾根部皮下构建由Ⅱ型胶原诱导的关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠模型,再以miRNA-144高表达慢病毒进行尾静脉注射,然后对模型小鼠滑膜组织进行免疫组化检测Cadherin-11和TNF-α的表达和分布,并用HE染色检测滑膜组织的病理变化特点。结果模型小鼠滑膜组织表现出与类风湿性关节炎病理学进程相似的特点,miRNA-144高表达慢病毒处理较生理盐水和空载慢病毒处理组模型小鼠的滑膜组织的炎症反应明显减轻,且TNF-α表达较生理盐水和空载体慢病毒处理组显著下调(P<0.05),进一步检测Cadherin-11的表达亦显著降低(P<0.05)。结论机体中miRNA-144增加可减弱或抑制关节炎模型小鼠中滑膜组织的炎症反应,并下调其TNF-α的表达,且这一作用可能是miRNA-144抑制滑膜细胞中Cadherin-11的效应。

映山红花总黄酮促进大鼠脑血管内皮细胞体外形成血管作用及与VEGFR_(2)和神经源性H_(2)S的关系

目的探讨映山红花总黄酮(total flavones of rhododendra,TFR)促大鼠脑血管内皮细胞体外形成血管作用及与VEGFR_(2)和神经源性硫化氢(H_(2)S)的关系。方法采用大鼠脑血管内皮细胞单独培养及和与海马神经元共培养,分别采用不同的实验方法检测细胞增殖、迁移、成管及H_(2)S含量和钙离子荧光强度,包括CCK-8法、细胞划痕法、Transwell法、基质胶成管、H_(2)S试剂盒及钙离子荧光探针法。结果在单独培养的大鼠脑血管内皮细胞上,H_(2)S供体NaHS(200μmol·L^(-1))和TFR(90、270、810 mg·L^(-1))对大鼠脑血管内皮细胞的增殖、迁移、成管及[Ca^(2+)]i荧光强度都有明显的促进作用。而VEGFR_(2)阻断剂SU5416(10μmol·L^(-1))可抑制TFR的促进内皮细胞增殖、迁移和形成血管及[Ca^(2+)]i荧光强度;在与海马神经元共培养的大鼠脑血管内皮细胞上,TFR显著地升高共培养中H_(2)S含量,并被CBS抑制剂AOAA(200μmol·L^(-1))抑制。与此同时,TFR明显地促进共培养中大鼠脑血管内皮细胞的形成血管作用,并可被AOAA和VEGFR_(2)阻断剂SU5416显著地抑制。结论TFR在体外可通过VEGFR_(2)升高[Ca^(2+)]i来促进脑血管内皮细胞形成血管,并可通过诱导神经元中CBS生成H_(2)S作用于大鼠脑血管内皮细胞的VEGFR_(2)来促进血管形成。

大鼠原位肝移植解剖重建研究进展

大鼠肝移植模型的构建,为解决临床肝移植术后并发症及围手术期治疗等问题提供了理想的动物模型。随着对大鼠肝移植模型建立的深入研究,逐渐形成了经典的“二袖套”法。然而,在移植手术过程中,手术视野差、血管扭转、胆道损伤和无肝期较长等问题仍是传统方法无法避免的。目前国内外大鼠肝移植模型改进方式主要围绕肝上下腔静脉、门静脉、肝下下腔静脉和胆管这4个重要解剖结构的重建展开。为此,本文就肝上下腔静脉、门静脉、肝下下腔静脉和胆管重建领域的最新进展进行整理总结,以便为大鼠肝移植模型的构建提供参考,促进肝移植技术的进一步发展。

毛果芸香碱促汗法定量测定低氧暴露动物出汗情况的研究

目的建立低氧暴露后C57BL/6小鼠汗液测定动物模型。方法选取C57BL/6雄性小鼠14只,随机分为对照组(Con组)和低氧暴露组(Hyp组)。将Hyp组小鼠放入复合环境模拟实验舱中低氧暴露3周,随后分别对各组小鼠行毛果芸香碱促汗法和碘淀粉试验,对采集的实验图片进行分析获得出汗面积;选取C57BL/6雄性小鼠6只,随机分组和建模方法同前,建立低氧暴露动物模型,利用透射电镜观察低氧暴露对小鼠汗腺组织中汗腺分泌颗粒的影响。结果与Con组相比,Hyp组小鼠出汗面积减少;且从促汗实验后4 min起,两组的出汗面积即有统计学差异(P<0.05)。透射电镜结果提示Con组可见高密度汗腺分泌颗粒,Hyp组未见汗腺分泌颗粒。结论本研究使用低氧暴露联合毛果芸香碱促汗法成功构建了低氧暴露后小鼠汗液测定模型,使用碘淀粉实验对小鼠出汗情况进行定量检测。该模型的建立为进一步研究低氧暴露对汗液分泌及汗腺功能的影响奠定了良好的实验基础。

miR-1改善异丙肾上腺素诱导的小鼠心力衰竭

目的探讨miR-1对异丙肾上腺素(isoproterenol, ISO)诱导的小鼠心力衰竭的作用。方法 60 mg/kg ISO连续腹腔注射28 d建立C57BL/6小鼠心力衰竭模型,生理盐水连续腹腔注射28 d作为对照,第29天行超声心动图评估心力衰竭模型。模型建立后对miR-1治疗组、模型组和对照组分别予以agomir-1、agomir对照试剂和生理盐水尾静脉注射,2次/周,第7天再次行超声心动图检查,取小鼠心脏组织行HE染色、天狼星红染色、Masson三色染色、WGA及Ki67免疫荧光染色。酶联免疫法检测血清NT-proBNP水平。Western blot检测与免疫组化染色评估miR-1靶基因线粒体钙单向转运蛋白(mitochondrial calcium uniporter,MCU)的表达。结果 ISO连续腹腔注射28 d成功建立小鼠心力衰竭模型。超声心动图检测结果显示,miR-1治疗组小鼠心功能较模型组明显改善(P<0.05);组织学观察结果显示,miR-1治疗组小鼠心肌排列紊乱、心肌纤维化、心肌细胞肥大及细胞增殖等心室重构情况较模型组明显改善。miR-1治疗组血清NT-proBNP水平较模型组明显下降(P<0.05),但仍高于对照组(P<0.05)。Western blot检测与免疫组化结果显示,miR-1治疗组小鼠MCU的表达较模型组明显减少(P<0.05)。结论输注miR-1可能通过调节MCU的表达来改善ISO诱导的小鼠心力衰竭。

全反式维甲酸与苯那普利对肾硬化大鼠肾脏组织α-SMA表达的影响

目的研究全反式维甲酸(ATRA)与苯那普利对肾硬化大鼠肾脏组织α-SMA表达的影响。方法80只Wistar♂大鼠随机分为假手术组、模型组、苯那普利组和ATRA组,每组均为20只。采用单侧肾切除加1wk后尾静脉注射阿霉素(5mg·kg-1)的方案建立大鼠肾小球硬化(GS)模型,造模后12wk末处死。HE染色观察肾脏病理改变,计算肾小球硬化指数(GSI)。RT-PCR结合免疫组织化学方法检测肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达情况。结果与模型组相比,ATRA组和苯那普利组GSI、α-SMA mRNA相对表达量和α-SMA阳性面积比均明显下降(P<0.05),但两组间各项指标比较无差异(P>0.05)。结论ATRA与苯那普利对大鼠肾硬化均有明显的延缓效应,且疗效一致。

益肾化浊方对阿尔茨海默病模型小鼠内化作用的影响

目的:观察益肾化浊方对快速老化小鼠亚系8(SAMP8)小鼠谷氨酸受体2(GluR2)内化作用的影响,探讨其改善阿尔茨海默病学习记忆能力的作用机制。方法:采用激光共聚焦、蛋白质印迹法(Western Blotting)和免疫共沉淀检测小鼠海马神经元突触后膜GluR2相对表达量,相关蛋白的表达以及各蛋白间相互结合情况。结果:经益肾化浊方干预后,SAMP8小鼠突触后膜GluR2含量较前增多,降低了谷氨酸受体2L-丝氨酸(GluR2 Ser880)蛋白水平,提高了AMPA受体结合蛋白(ABP)、谷氨酸受体结合蛋白(GRIP)水平,同时促进了GluR2-N-乙基马来酰亚胺敏感因子(NSF)结合,抑制了GluR2-转接蛋白复合物(AP2)结合。结论:益肾化浊方可抑制SAMP8小鼠AMPA受体GluR2内化作用,该作用与减轻GluR2磷酸化和上调内化抑制蛋白GRIP、ABP的表达,促进GluR2-NSF的结合,减少GluR2-AP2的结合有关。

白花蛇舌草总黄酮的抗炎及抗菌作用

目的观察白花蛇舌草总黄酮抗炎及抗菌作用。方法采用二甲苯诱导小鼠耳肿胀模型、大鼠松节油气囊肉芽增生模型、新鲜蛋清诱导大鼠足爪肿胀模型、醋酸所致小鼠毛细血管通透性增高试验和体外抗菌试验,观察白花蛇舌草总黄酮的抗炎及抗菌作用。结果白花蛇舌草总黄酮(15、30、60mg·kg-1)对二甲苯诱导的小鼠耳肿胀和醋酸所致小鼠毛细血管通透性增高有一定的抑制作用;白花蛇舌草总黄酮(12、24、48mg·kg-1)对大鼠松节油气囊肉芽增生和新鲜蛋清诱导大鼠足爪肿胀亦有明显的抑制作用;在体外,白花蛇舌草总黄酮对球菌和杆菌均具有不同程度的抑菌和杀菌作用,且对球菌的作用优于杆菌。结论白花蛇舌草总黄酮具有抗炎及抗菌作用。

人参果皂苷注射液对高脂血症大鼠血脂代谢的影响

目的:观察人参果皂苷注射液(IGFS)对实验性高脂血症大鼠血清总胆固醇(TC)、脂蛋白-胆固醇代谢的影响及其抗氧化作用。方法:大鼠连续腹腔注射IGFS10、2 0和4 0 m g·kg- 1 ·d- 1 15 d,测血清TC、脂蛋白-胆固醇、过氧化脂质(L PO)及血浆前列环素(PGI2 )、血栓素A2 (TXA2 )含量,血清和肝脏超氧化物歧化酶(SOD)活性及全血和血浆黏度,并观察肝脏脂肪沉积情况。结果:IGFS2 0、4 0 m g·kg- 1·d- 1能明显降低甘油三酯(TG)、TC、低密度脂蛋白-胆固醇(L DL- c)、TXA2 、L PO及全血黏度,并能明显提高实验性高脂血症大鼠PGI2 水平及SOD活性,亦能使TC/ HDL- c及L DL- c/ HDL- c比值明显降低,PGI2 / TXA2 比值明显升高,病理检查可见肝脏脂肪沉积明显减轻。4 0 mg·kg- 1 ·d- 1 亦能明显提高HDL - c含量。结论:IGFS可能通过调节体内血脂代谢,提高PGI2 / TXA2 比值,纠正自由基代谢紊乱,发挥抗动脉硬化作用。

大鼠精索静脉曲张后附睾上皮细胞凋亡及管腔α-1,4-葡糖苷酶、唾液酸含量观察

目的:探讨大鼠左侧精索静脉曲张后同侧附睾上皮细胞凋亡与附睾管腔中-α1,4-葡糖苷酶和唾液酸含量改变的关系及意义。方法:16只雄性SD大鼠建立左侧精索静脉曲张模型,分为对照组和实验组,每组8只。缺口末端转移酶标记技术检测附睾上皮细胞凋亡;硝基酚法和5-甲基苯二酚法分别检测附睾管腔液-α1,4-葡糖苷酶和唾液酸含量。结果:大鼠左侧精索静脉曲张模型建立后的第7 d,实验组同侧附睾上皮细胞凋亡指数显著高于对照组(P<0.001);实验组附睾管腔液-α1,4-葡糖苷酶、唾液酸含量显著低于对照组(P<0.05,P<0.005)。结论:大鼠左侧精索静脉曲张可导致同侧附睾上皮细胞凋亡增加,进而影响该侧附睾上皮细胞的合成和分泌功能。

青藤碱对SSNI模型大鼠镇痛效应及脑内兴奋性氨基酸递质的影响

目的观察青藤碱对部分坐骨神经损伤(SSNI)模型大鼠疼痛敏感行为及纹状体细胞外液兴奋性氨基酸-谷氨酸(Glu)的影响。方法 SD大鼠,随机分为假手术组和SSNI手术组,后者再分为模型组、加巴喷丁组(100 mg.kg-1)、青藤碱低剂量组(20 mg.kg-1)和青藤碱高剂量组(40 mg.kg-1)。采用机械痛敏和冷痛敏测试,评价大鼠的疼痛行为,以最大镇痛效应百分比(%MPE)反映药效。纹状体微透析采样,高效液相-荧光方法检测其细胞外液Glu浓度。结果 SSNI模型大鼠的机械、冷刺激痛感行为明显改变,脑内Glu水平明显升高。%MPE效应-时间曲线在120min内青藤碱高剂量组最高(达81.28%),加巴喷丁组第2(达50.56%),青藤碱低剂量组第3(达7.22%)。与模型组纹状体细胞外液Glu水平相比,加巴喷丁组有3个时间点、青藤碱低剂量组有4个时间点、青藤碱高剂量组有5个时间点明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论青藤碱减轻SSNI模型大鼠疼痛敏感行为,其镇痛效应可能与抑制纹状体细胞外液Glu水平有关。

刺五加叶皂苷对实验性脑缺血大鼠血液流变学及血小板功能的影响

目的 :观察刺五加叶皂苷 (ASS)对实验性脑缺血大鼠血液流变学及血小板功能的影响。方法 :大鼠连续腹腔注射 ASS 2 5、 5 0和 1 0 0 mg· kg- 1 3d后 ,结扎双侧颈总动脉伴低血压制作实验性脑缺血模型 ,1 5 m in后测定大鼠血液流变学各参数、血小板粘附及聚集功能等指标。结果 :ASS 5 0、 1 0 0 mg· kg- 1 均能明显降低实验性脑缺血大鼠全血粘度、血浆粘度、血浆纤维蛋白原浓度、血沉、红细胞压积、红细胞聚集指数、红细胞刚性指数及抑制血小板粘附、聚集功能 (P<0 .0 5～ P<0 .0 0 1 )。结论

人参皂苷Rb1对H_2O_2诱导新生大鼠心肌细胞凋亡的保护作用

目的观察人参皂苷Rb1对H2O2诱导的新生大鼠心肌细胞凋亡的保护作用,并探讨其可能作用机制。方法在培养的新生大鼠心肌细胞上建立H2O2损伤模型,观察不同剂量组人参皂苷Rb1(20、40、80mg·L-1)对心肌细胞凋亡率、丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)活性,以及细胞内钙离子变化的影响。结果不同剂量组人参皂苷Rb1可以减少心肌细胞凋亡率、降低MDA含量、增加SOD活性、减少细胞内钙超载。结论人参皂苷Rb1可以抑制H2O2引起的新生大鼠心肌细胞凋亡,其作用机制可能与其抗脂质氧化和减少细胞内钙超载有关。

女贞子多糖抗肿瘤作用研究

目的探讨女贞子多糖(LLP)的抗肿瘤作用及机制。方法观察LLP对小鼠肉瘤(S180)、小鼠肝癌(H22)的抑制作用;采用MTT法观察LLP对人肝癌细胞(SMMC-7721)增殖的影响;ConA刺激T-淋巴细胞法研究LLP的免疫刺激作用。结果LLP对S180、H22实体瘤均有抑制作用(P<0.05);对SMMC-7721肿瘤细胞无直接杀伤作用,可提高Co-nA对T淋巴细胞刺激的转换率,提高由淋巴细胞YAC-1所致NK细胞的活性。结论LLP具有抗实体肿瘤的作用,LLP抗实体瘤的作用与其提高机体免疫,改善机体免疫能力而抑制肿瘤细胞生长有关。

苯那普利与厄贝沙坦对心衰大鼠心室重构过程中AngⅡ受体及ACE2的影响

目的探讨苯那普利、厄贝沙坦及两者联合用药对心衰大鼠心室重构过程中心肌血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)、2型受体(AT2R)及ACE2蛋白表达的影响。方法采用大鼠腹主动脉缩窄法造成压力负荷性心肌肥厚致心力衰竭模型。苯那普利或(和)厄贝沙坦连续给药8wk,检测血流动力学参数、心脏指数、心肌和血浆AngⅡ含量、心肌中AT1R、AT2R和ACE2蛋白的表达情况。结果模型组心脏指数、LVEDP、血浆和心肌AngⅡ的含量及心肌AT1R、AT2R和ACE2蛋白的表达明显升高;各治疗组心脏指数、LVEDP明显下降;苯那普利组血浆和心肌AngⅡ的含量降低,厄贝沙坦组心肌AT1R蛋白的表达明显下降而AT2R和ACE2蛋白的表达明显升高,联合应用具有协同作用。结论联合应用苯那普利和厄贝沙坦对改善心衰大鼠心室重构具有协同作用,可能与AngⅡ和AT1R的下调而AT2R和ACE2的上调有关。

人参皂苷保护小鼠精原细胞氧化损伤的研究

目的观察人参皂苷对活性氧引起的小鼠睾丸生殖细胞氧化损伤的保护作用。方法利用体外培养的小鼠精原细胞建立氧化应激模型,通过检测生殖细胞活性、脂质过氧化产物丙二醛(MDA)生成、超氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱甘肽(GSH)水平评价人参皂苷对精原细胞氧化损伤的缓解作用。结果次黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶(HX/XO)体系产生的活性氧可引起生殖细胞活性降低、MDA的生成量增加、SOD活性和GSH水平降低,而添加人参皂苷(10mg·L-1)能恢复HX/XO引起的生殖细胞活性、SOD活性和GSH水平的下降以及MDA生成的增加。结论人参皂苷可通过抗氧化作用保护活性氧引起的小鼠精原细胞氧化损伤。

安息香对永久性大脑中动脉栓塞大鼠模型的保护作用及其机制研究

目的探讨安息香对永久性局灶性脑缺血(p MCAO)大鼠模型的脑保护作用及其机制。方法健康成年♂SD大鼠65只,随机分为5组:假手术组、模型对照组、溶剂组、尼莫地平组、安息香组。通过线栓法建立永久性局灶性脑缺血(p MCAO)大鼠模型,参照Longa评分法对大鼠神经功能损伤进行评分,计算缺血侧脑组织含水量及脑水肿率,TTC染色法测定脑梗死率,ELISA法检测血清中VEGF和TNF-α含量。结果与溶剂组相比,安息香有降低模型大鼠神经功能评分的趋势,但差异无显著性;安息香能明显地降低模型大鼠缺血侧脑组织含水量、脑水肿率及脑梗死率(P<0.01);升高模型大鼠血清中VEGF的含量(P<0.01),降低TNF-α的含量(P<0.05)。结论安息香降低p MCAO大鼠脑含水量和脑水肿率,减小脑梗死范围发挥脑保护作用,可能是其呈现开窍醒神效应的生物学基础,机制可能与上调VEGF含量和下调TNF-α的含量有关。

关节镜下半月板部分切除制备骨关节炎动物模型

目的探讨经关节镜建立猪双膝骨关节炎动物模型及用磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)监测骨关节炎骨软骨损害的有效性和可行性。方法4只小型猪经关节镜切除双膝外侧部分半月板,术后12周,行大体、组织学和MRI观察与切除半月板相对股骨髁的骨软骨变化。结果大体观察结果显示,局限性软骨表面纤维化,股骨髁间切迹骨赘形成;组织学检测结果显示,软骨细胞数量和蛋白多糖含量减少、成簇排列细胞数量增加;MRI检查结果显示,软骨厚度变薄和骨软骨信号强度改变。结论经关节镜半月板部分切除能有效建立猪双膝关节骨关节炎动物模型,MRI能灵敏地监测到骨关节炎动物模型的骨软骨变化。