M_3R介导的cAMP-PKA信号途径对L-型钙通道的调控作用研究

目的研究M3受体激动剂通过cAMP-PKA信号途径对L-型钙通道的影响。方法应用全细胞膜片钳技术记录M3受体激动剂胆碱对大鼠单个心室肌细胞L-型钙通道电流(ICa-L)的影响;采用激光扫描共聚焦技术观察细胞内钙离子的变化。结果胆碱使大鼠心室肌细胞ICa-L密度从(9.07±0.68)pA/pF减少至(5.58±0.62)pA/pF(n=4,与对照组相比,P<0.01),H89加胆碱组使ICa-L电流密度减少至(7.68±0.75),幅度明显高于胆碱组(n=4,与胆碱组相比,P<0.01)。胆碱抑制KCl除极诱导的心肌细胞[Ca2+]i的升高,从(2.83±0.08)降至(1.17±0.09)FI/FI0(n=30,与KCl组相比,P<0.01),胆碱与H89组可使[Ca2+]i降至(1.65±0.17)FI/FI0,幅度高于胆碱组(n=30,与胆碱组相比,P<0.05)。结论 M3受体激动剂胆碱通过抑制PKA活性调控L-型钙通道,使外钙内流减少,降低细胞[Ca2+]i,从而发挥抗心肌保护作用。

肥胖大鼠心律失常易感性的分析

目的研究高脂饮食诱导肥胖易感(OP)大鼠心律失常易感性的发生机制。方法高脂饲料喂饲60只健康雄性SD大鼠12周后,筛选出OP大鼠、基础组大鼠动物模型,二组分别为15只大鼠。实验结束后,处死动物,测量体脂肪水平,并收集血清,以检测血脂水平。采用酶法分离心肌细胞,Fluo-3/AM负载后采用激光共聚焦扫描显微镜观察各组大鼠心肌细胞内钙离子强度([Ca2+]i)。同时取心脏组织常规抽提总RNA,采用含有468种miRNA的芯片检测系统进行miRNA表达谱差异分析。结果 OP大鼠睾周脂肪、肾周脂肪、网膜脂肪、体脂比[(20.15±3.38)、(8.74±1.66)、(9.23±0.94)、(7.71±0.74)mmol/L]均显著高于基础组大鼠[(8.98±1.19)、(4.70±0.59)、(6.28±0.40)、(4.69±0.37)mmol/L],OP组与基础组比较差异有统计学意义(P<0.05);OP大鼠血清总胆固醇、三酰甘油和低密度脂蛋白水平[(1.26±0.04)、(0.58±0.10)、(0.51±0.04)mmol/L]显著高于基础组大鼠[(0.92±0.08)、(0.29±0.03)、(0.31±0.04)mmol/L],OP组与基础组比较差异有统计学意义(P<0.05);OP组大鼠心室肌细胞内游离钙离子荧光强度(247.96±20.03)明显高于基础组大鼠(174.25±23.13),OP组与基础组比较差异有统计学意义(P<0.05)。与基础组相比,OP模型组的miRNA表达谱中明显差异表达的miRNA共有7个,其中有3个miRNA上调,4个miRNA下调。结论肥胖大鼠miRNA的表达异常可导致心肌细胞内[Ca2+]i发生改变,可能是肥胖心律失常发生机制之一。