绿原酸促进成骨前体细胞成骨分化的作用

背景:绿原酸是干李子中含量最丰富的多酚类物质,作为一种食源性药物有望用于骨质疏松治疗之中。目的:探究绿原酸对成骨前体细胞成骨分化的影响及其机制,并在骨质疏松小鼠模型中进行相关验证。方法:(1)体外实验:以含不同质量浓度(0,0.1,1,10,100 mg/L)绿原酸的培养基培养MC3T3-E1细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖。采用含0,10,20 mg/L绿原酸的成骨诱导培养基培养MC3T3-E1细胞,进行碱性磷酸酶染色、茜素红染色、成骨基因表达与BMP-2/RUNX2/SMAD4信号通路蛋白检测。(2)体内实验:将32只雌性C57BL/6小鼠随机分成4组,假手术组、去卵巢组及低、高剂量绿原酸组,每组8只,低、高剂量绿原酸组去卵巢后腹腔注射25,50 mg/(kg·d)的绿原酸,连续给药8周。给药8周后,进行骨组织Micro-CT扫描与组织形态学观察。结果与结论:(1)体外实验:当绿原酸质量浓度≤10 mg/L时,对MC3T3-E1细胞的增殖无明显影响。碱性磷酸酶染色与茜素红染色显示,随着绿原酸质量浓度的增加,MC3T3-E1细胞的碱性磷酸酶活性、钙沉积和钙结节生成能力提高,成骨相关基因碱性磷酸酶、骨桥蛋白、骨钙素、骨形态发生蛋白2、RUNX2、SMAD4表达升高,骨形态发生蛋白2、RUNX2、SMAD4蛋白表达升高。(2)体内实验:Micro-CT扫描显示,去卵巢组小鼠骨密度、骨体积分数、骨小梁厚度及数量均低于假手术组(P <0.05),骨小梁分离度高于假手术组(P <0.05);经过不同质量浓度绿原酸干预后,去卵巢小鼠的上述指标均有所改善,其中高剂量绿原酸组改善效果有显著性意义(P <0.05)。苏木精-伊红染色显示,去卵巢组小鼠骨量少于假手术组,经过绿原酸干预后骨量增加。(3)绿原酸可能通过BMP-2/RUNX2/SMAD4信号通路促进成骨分化,预防去卵巢小鼠的骨丢失。

CP-25调控GRK2/p38MAPK信号在血管紧张素Ⅱ诱导小鼠系膜细胞增殖中的作用

目的研究芍药苷-6′-O-苯磺酸酯(CP-25)在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的肾小球系膜细胞(MCs)增殖中的作用及相关机制。方法体外培养SV40 MES 13系膜细胞,以AngⅡ诱导MCs增殖,高内涵成像显微镜检测不同浓度CP-25(10、100、1000 nmol/L)对AngⅡ诱导的MCs增殖的影响;Western blot检测MCs中G蛋白偶联受体激酶-2(GRK2)和磷酸化p38(p-p38)蛋白表达水平;激光共聚焦显微镜检测GRK2和p-p38蛋白的荧光信号并分析二者共定位率;成像流式细胞仪检测MCs中GRK2入胞质的细胞比例。结果与对照组比较,AngⅡ可诱导MCs的增殖,增加GRK2和p-p38蛋白表达,上调GRK2和p-p38MAPK共定位率,提高GRK2入胞比例,差异有统计学意义(P<0.01)。CP-25(10、100、1000 nmol/L)可不同程度地抑制AngⅡ诱导的增殖,抑制GRK2、p-p38蛋白表达及GRK2和p-p38的共定位水平,降低GRK2入胞比例。结论CP-25可抑制AngⅡ诱导的MCs增殖,其机制与调节GRK2/p38信号有关。