含pCMV-IL-2-IRES-NK4质粒减毒沙门菌的制备及其稳定性研究

目的制备含pCMV-IL-2-IRES-NK4质粒减毒沙门菌TPIN并检测其稳定性。方法将pCMV-IL-2-IRES-NK4质粒转进减毒沙门菌Ty21a感受态,制备成重组的减毒沙门菌菌株TPIN;将TPIN在含有氨苄西林(+)和氨苄西林(-)的LB培养板传代培养至第10代、20代、30代和40代时用灭菌的牙签分别挑取含有氨苄西林(+)和氨苄西林(-)LB培养基上的单克隆菌落,质粒提取、PCR扩增酶切鉴定;TPIN转染HepG2细胞后采用RT-PCR检测IL-2和NK4基因表达,ELISA法检测细胞培养上清IL-2和NK4蛋白。结果构建菌株经提取质粒、酶切、PCR扩增获得目的基因IL-2、NK4特异条带;在氨苄西林(+)和氨苄西林(-)LB培养板传代培养40代的TPIN菌株均可扩增并双酶切出目的基因IL-2及NK4;TPIN体外转染HepG2细胞后,IL-2及NK4表达水平均显著升高。结论重组携带IL-2/NK4双基因的减毒沙门菌菌株TPIN可稳定遗传,不受无选择性压力的影响而丢失质粒,且在体外IL-2、NK4基因及蛋白可以稳定高效表达。

TPIN对HepG2肝癌细胞生物学特性的影响

目的研究重组减毒沙门菌菌株TPIN对HepG2细胞生物学性能的影响。方法 TPIN转染HepG2细胞36 h时收集细胞表达上清,MTT法检测表达产物对HepG2细胞生长的作用;Transwell迁移实验观察TPIN表达产物对HepG2细胞迁移的影响;将不同剂量表达产物分别加入甲基纤维素小碟,并将小碟小心放入鸡胚绒毛尿囊膜,37.8℃继续孵化3 d,观察IL-2/NK4表达产物体外对鸡胚绒膜尿囊膜血管的效应。结果 TPIN表达上清显著抑制HepG2细胞增殖的活性,且有一定剂量依赖效应;表达产物可明显抑制肿瘤细胞迁移,且明显抑制鸡胚绒膜尿囊膜血管形成。结论 TPIN在体外能高效转染肿瘤细胞,表达目的蛋白IL-2及NK4,且表达产物能够抑制HepG2细胞的增殖和迁移,对鸡胚绒膜尿囊膜血管的形成有抑制效应。

麻疹疫苗高覆盖率背景下麻疹流行特征的变化与免疫策略调整必要性的探讨

目的探讨控制麻疹的策略和措施。方法对芜湖市1996～2005年麻疹的发病情况、麻疹爆发疫情、麻疹疫苗接种率、麻疹疫苗强化免疫等进行综合分析。结果1996～2005年，芜湖市麻疹疫苗报告接种率为98．47％，儿童疫苗免疫后抗体阳性率为95．77％。期间共报告麻疹病例697例，年平均发病率为3．19／10万，其中爆发疫情11起，爆发病例占总数的16．5％，其中有免疫史者占72．3％。与全国大多数地区相似，小于8个月和15岁以上年龄组的发病有增高趋势。根据国内文献资料，近年来全国部分地区13992例麻疹病例中，有麻疹疫苗免疫史的为3921例（28．0％），无免疫史的4753例（34．0％），免疫史不祥的5318例（38．0％）。结论有较好的计划免疫基础并不能避免麻疹的爆发，为达到消除麻疹的目标，除需要扎实开展儿童免疫规划基础工作外，还需对我国现行的麻疹免疫策略及免疫程序进行调整，建立新的成人免疫规划体系，适时研究开发更有效的麻疹疫苗毒株提高疫苗的免疫效力。

真菌疫苗的研究进展

近年来,条件致病性真菌引起的真菌病发病率显著上升,临床应用的抗真菌药物疗效不佳。真菌疫苗的开发显示了良好的应用前景。由于我们对真菌及宿主的免疫应答认识有限,真菌疫苗的研制也因此受到限制。但随着对上述问题的深入探索,真菌疫苗的研究在过去几年中取得了很大的发展。现将几种常见真菌疫苗的研究进展作一综述。

2015年成都市狂犬病暴露处置门诊监测信息分析

目的通过对2015年成都市狂犬病暴露处置门诊监测信息分析,为控制狂犬病的流行提供参考。方法收集成都市所有犬病暴露处置门诊监测数据,采用描述性方法,对2015年成都市狂犬病暴露处置资料进行分析。结果2015年成都市全年共处置狂犬病暴露人群147145人,全年的每个月均有人群暴露,5-8月间病例数占总暴露人群的52.1%;暴露分级中,以Ⅲ级暴露为主,占51.1%,其次为Ⅱ级暴露,占46.7%,Ⅰ级暴露比例较小;暴露人群伤口规范处置率及狂犬病疫苗接种率为100%,Ⅲ级暴露人群狂犬病免疫球蛋白使用率为14.3%。结论 2015年成都市狂犬病暴露人群上升明显,需进一步做好犬只管理、普及市民狂犬病预防知识,同时加强医务人员狂犬病暴露后规范化处置。

融合基因DNA疫苗STxB-VP1和MDC-VP1对CVB3的免疫效果研究

目的构建融合基因DNA疫苗pcDNA3/STxB-VP1和pcDNA3/MDC-VP1,并免疫小鼠,观察其免疫效果。方法从痢疾志贺菌PCR扩增志贺毒素B亚单位(STxB)基因片段,用RT-PCR法从小鼠脾细胞扩增巨噬细胞来源的趋化因子(MDC)基因片段。将这两个基因片段分别与柯萨奇病毒B组3型(CVB3)的衣壳蛋白VP1通过一个编码15肽的柔性接头(Linker)相连接,构建真核表达质粒pcDNA3/STxB-VP1和pcDNA3/MDC-VP1。120只BALB/c小鼠随机均分为6组,分别在胫骨前肌注射pcDNA3、pcD-NA3/STxB、pcDNA3/MDC、pcDNA3/VP1、pcDNA3/STxB-VP1和pcDNA3/MDC-VP1,每3周1次,共3次。每次免疫后20d检测血清中中和抗体水平,最后1次免疫后20d用7LD50的CVB3进行致死性攻击,观察小鼠生存率。结果成功构建了融合基因疫苗pcD-NA3/STxB-VP1和pcDNA3/MDC-VP1。各组小鼠的生存率分别是10%、10%、15%、40%、20%和75%,中和抗体水平及血中病毒滴度均与生存率一致。结论与pcDNA3/VP1相比,pcDNA3/MDC-VP1可诱导产生高水平的中和抗体,提高小鼠生存率,而pcDNA3/STxB-VP1仅诱导出低水平的中和抗体,小鼠的生存率降低。

携带IL-2和NK4双基因真核共表达载体的减毒沙门菌株的构建

目的构建携带IL-2/NK4双基因真核表达载体的减毒沙门菌菌株。方法利用分子克隆技术将IL-2及NK4基因分别插入PIRES-SEQ质粒IRES序列的上下游中,构建为双基因真核共表达载体pCMV-IL-2-IRES-NK4,将该质粒利用脂质体转染入细胞,采用ELISA及PCR法检测pCMV-IL-2-IRES-NK4转染细胞后IL-2/NK4基因及蛋白表达情况。将所构建质粒以电转化法转化减毒沙门菌菌株Ty21a,从而得到能够表达IL-2/NK4双基因的重组减毒沙门菌菌株。结果 ELISA及PCR法检测该质粒可在细胞中以较高的效率稳定表达IL-2及NK4基因和蛋白;同时表达IL-2/NK4双基因的减毒沙门菌菌株TPIN构建成功。结论本研究成功构建了携带IL-2/NK4双基因的减毒沙门菌菌株。

HPV疫苗安全性与有效性的研究现状及进展

人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染是最普遍的性传播感染之一。研究发现在99.7%的宫颈癌标本中存在高危型HPV的DNA。现已明确HPV持续感染是HPV相关疾病如宫颈癌等恶性肿瘤的主要致病因素,因此通过接种HPV疫苗来预防HPV感染和治疗HPV相关疾病显得尤为重要。HPV疫苗分为两种:一种是预防性HPV疫苗,用于预防健康人被HPV感染;一种是治疗性HPV疫苗,具有对已出现的HPV感染和病变患者产生治疗效果的潜能。本文就HPV疫苗安全性与有效性的研究现状及进展展开综述。

裂解与灭活流感疫苗免疫效果对比研究

目的了解病毒全颗粒灭活流感疫苗与病毒裂解流感疫苗对中国健康人群的血清学免疫效果,为流感疫苗选择使用提供科学依据。方法接种两种疫苗于2组健康人群,在免疫后不同时间检测其抗体滴度,计算其抗体保护率和抗体阳性率。结果除乙型抗体几何平均滴度(GMT)在免疫后150d2组差异有统计学意义外(t=2.127,P<0.05),其余各检测期,各型抗体GMT、抗体保护率及阳性率两种疫苗之间的差异无统计学意义。结论病毒全颗粒灭活流感疫苗与病毒裂解流感疫苗血清学免疫效果基本相同。

广西灵山县狂犬病疫苗人体免疫效果分析

目的了解狂犬病疫苗的免疫效果。方法对2 085名狂犬病暴露人群按规定接种狂犬病疫苗,全程接种疫苗后10天取静脉血用ELISA法检测狂犬病抗体IgM。结果全程免疫后10天,狂犬病抗体IgM阳转率为96.83%,20-30岁年龄组阳性率最低,10-20岁年龄组阳性率最高。不同性别的血清抗体阳性率差异无显著性。结论全程接种狂犬病疫苗后10天阳性率能达96.83%,但以接种狂犬病疫苗后狂犬病抗体IgM阳转率达100%为工作目标,故应对所有狂犬病暴露者全程接种疫苗并检测抗体,对阴性结果者进行及时加强疫苗接种。接种疫苗期间注意饮食禁忌。

不同年龄人群接种风疹疫苗十年追踪观察

目的 为了解国产BRDII株风疹疫苗的免疫新途径 ,做好该病预防提供科学依据。方法 采用血清学方法对城区 30 0名不同年龄人群分别于免前、免后 6W、1年、3年、5年、7年、10年采血、查风疹抗体。结果 免前风疹抗体总阳性率为 5 9.6 7% ,GMT为 2 6 .75。各年龄组抗体水平经方差分析有非常显著性差异 (F =12 .36 ,P <0 .0 1)。免后 6W无论免前抗体高低 ,均能 10 0 %阳转 ,说明风苗具有良好的免疫效果 ,在观察期内 ,抗体变化不大 ,说明该疫苗具有良好的免疫原性。结论 风疹减毒活疫苗具有良好的免疫效果 ,接种 10年后可暂不考虑加强免疫。

标准化屋尘螨变应原制剂治疗195例儿童哮喘安全性的初步评价

目的评价标准化屋尘螨变应原制剂治疗儿童哮喘的安全性。方法195例轻、中度过敏性哮喘患儿,男性122例,女性73例,年龄(7.7±s 2.8)岁。采用常规免疫注射疗法,给予皮下注射标准化屋尘螨变应原制剂治疗,疗程1～3年。观察治疗过程中不良反应的表现和处理情况,以及可能与全身不良反应相关的危险因素。结果195例病人共完成6 004次注射。其中全身不良反应人均发生率为26.7%(52/195),每注射发生率为2.55%(153/6 004);局部不良反应人均发生率为89.7%(175/195),每注射发生率为29.20%(1 753/6 004)。剂量递增阶段全身不良反应每注射发生率为0.53%(18/3 374),明显低于维持阶段(5.13%,135/2 630,P<0.01)。所有不良反应均较轻微,经对症处理缓解。Logistic回归分析全身不良反应的相关危险因素提示,维持治疗阶段与全身不良反应发生相关(P<0.05)。结论标准化屋尘螨变应原制剂用于治疗儿童哮喘全身不良反应发生率相对较低,安全性较高,维持阶段是免疫治疗的一个独立危险因素。

儿童A群C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗基础免疫后A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗加强免疫的免疫原性和持久性

目的观察儿童A群C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗(Group A and group C meningococcal polysaccharide conjugate vaccine,MPCV-AC)基础免疫后A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗(Group A and group C meningococcal polysaccharide vaccine,MPV-AC)加强免疫的免疫原性和持久性。方法在安徽省部分乡镇选择已完成2剂次MPCV-AC基础免疫的3岁儿童进行1剂次MPV-AC加强免疫,采集免疫前和免疫后1个月血标本;选择已完成2剂次MPCV-AC基础免疫和1剂次MPV-AC加强免疫的6岁儿童在第2剂MPV-AC加强免疫前采集血标本;检测所有儿童的A群和C群脑膜炎奈瑟菌血清功能性杀菌抗体,分析抗体阳性率、阳转率和几何平均滴度(Geometric mean titer,GMT)。结果在69名3岁儿童中,MPV-AC免疫前A、C群抗体阳性率分别为73.91%、47.83%;免疫后阳性率均为100%,阳转率分别为75.36%、94.20%,GMT分别为1:1109.69、1:2632.68。在75名6岁儿童中,A、C群抗体阳性率分别为94.67%、64.00%(与3岁儿童免疫后相比,Fisher精确概率法,P=0.121;x2=30.57,P=0.000),GMT分别为1:149.78、1:42.22(与3岁儿童免疫后相比,U=866.00,P=0.000;U=570.00,P=0.000)。结论完成MPCV-AC基础免疫的3岁儿童进行1剂次MPV-AC加强免疫的免疫原性良好但免疫持久性不足3年,建议增加第2剂次加强免疫。

接种甲型H1N1流感疫苗人群血清抗体阳性率及相关因素分析

目的分析甲型H1N1流感疫苗接种效果和影响因素，为流感疫苗接种规划制定提供依据。方法采用分层随机抽样的方法，在2010年1月、4月、8月共抽取1941名甲型H1N1流感疫苗接种者进行问卷调查，并运用血清抗凝实验方法检测抗体水平。结果接种甲型H1N1流感疫苗抗体阳性率为59．5l％，0～岁和60岁及以上人群抗体阳性率较低，6～岁和16～岁人群抗体阳性率较高，抗体水平随时间推移逐渐下降。结论流感疫苗是防止疫情最有效措施之一，在流感高峰期来临前，要加强疫苗接种、补种，特别是60岁及以上的老年人和5岁以下儿童。

乙型脑炎减毒活疫苗细菌内毒素凝胶法的检测

目的建立乙型脑炎减毒活疫苗细菌内毒素检测方法和质量标准,检测样品中的内毒素含量。方法中国药典2010年版三部细菌内毒素检测法(凝胶限度试验、凝胶半定量试验)。结果选用λ为0.5 EU/ml的鲎试剂,采用凝胶限度法对乙型脑炎减毒活疫苗进行细菌内毒素检查,样品经稀释至80倍或以上稀释度后对内毒素检查均无干扰,确定该疫苗的内毒素限度值为40 EU/ml[即20 EU/剂(0.5 ml)]。凝胶限度试验结果显示,疫苗每1 ml中含内毒素的量均小于40EU,即每1次人用剂量(0.5 ml)中含内毒素的量均小于20 EU。凝胶半定量测定结果显示,1人份规格疫苗中含内毒素的量为2.50～10.00 EU/ml(平均5.36 EU/ml);5人份规格疫苗中含内毒素的量为1.50～6.00 EU/ml(平均3.02 EU/ml)。结论凝胶法两种试验均可用于乙型脑炎减毒活疫苗细菌内毒素检测,与凝胶半定量试验相比,凝胶限度试验更为简便、且易于操作;采用凝胶限度法本研究建立了乙型脑炎减毒活疫苗细菌内毒素检测方法和质量标准;凝胶半定量法测定结果用准确数据显示该疫苗的内毒素含量均在人体安全限度以内。

Prion疾病疫苗研究策略

朊病毒病是一类侵袭人类及多种动物中枢神经系统的致死性退行性脑病，目前缺乏有效的预防和治疗方法。朊病毒病的重组蛋白亚单位疫苗、DNA疫苗、合成肽疫苗、病毒样颗粒疫苗、树突状细胞疫苗、黏膜免疫疫苗等已取得一定进展，但现有的免疫策略仅能部分克服免疫耐受，诱导较低或中等滴度的抗体，对PrPSc感染动物模型只能提供部分保护，Prion疫苗研究任重而道远。

广州市初中生家长对HPV疫苗接种的态度及影响因素调查

目的调查广州市初中生家长对其子女接种人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)预防性疫苗的接受情况,探讨其影响因素,发现HPV预防性疫苗广泛应用的潜在障碍并提出解决办法,为提高公众对HPV预防性疫苗的知晓、接受程度和宫颈癌的预防提供参考依据。方法对广州市542名初一学生家长进行自填式问卷调查,获得家长对其子女HPV预防性疫苗接种的态度,并通过单因素和多因素非条件Logistic回归分析,探索影响接种意愿的因素。结果在接受调查的家长中,32.1%在本次调查前听说过HPV,22.9%听说过HPV预防性疫苗,26.7%愿意让子女接受疫苗,疫苗的安全性是不愿接种疫苗的主要原因,大多数家长赞成HPV预防性疫苗在国内广泛应用,希望政府能将其纳入国家免疫接种计划,并进行适当的价格调控和补贴。高收入、认为预防比治疗更重要、认识到疫苗的重要性、主动咨询疫苗信息、对HPV疫苗认知程度高和担心得HPV感染相关疾病的家长更愿意让其子女接受疫苗,担心疫苗副作用的家长则反之。结论广州市初中生家长对于HPV和HPV预防性疫苗的认知度、对其子女接种HPV预防性疫苗的接受度都低。政府需要根据不同人群背景,加大对HPV相关疾病和HPV预防性疫苗的宣传,制定适应我国国情的HPV疫苗接种政策。

江山中心小学接种流感疫苗的效果调查分析

目的了解流行性感冒的传播途径、症状、易感人群及预防措施,认识流感疫苗对预防流感的重要性。方法对2008—2010年一到六年级学生接种流感疫苗情况进行问卷调查。结果 2008年接种率35.66%;2009年接种率43.17%;2010年接种率66.67%,接种率呈逐年上升的趋势。结论通过宣传教育,增强了对流感疫苗的普遍认识,为预防流感起到关键的作用。