奥扎格雷钠对缺血再灌注大鼠脑海马区细胞保护作用的研究

目的观察奥扎格雷钠对大鼠脑缺血/再灌注后IL-6和TNF-α蛋白表达的影响,探讨奥扎格雷钠对缺血再灌注大鼠脑海马区细胞的保护作用及其作用机制。方法将40只SD雄性大鼠随机分为假手术组、缺血/再灌注组、生理盐水对照组和奥扎格雷钠治疗组。采用大鼠大脑中动脉线栓(MCAO)法制备局灶性脑缺血/再灌注模型,应用免疫组化技术分别检测各组大鼠脑组织IL-6和TNF-α蛋白表达情况。结果与假手术组相比较,脑缺血/再灌注组IL-6和TNF-α蛋白的表达明显增多(P<0.05),奥扎格雷钠能够明显减少TNF-α的表达(P<0.05),而对IL-6表达无影响(P>0.05)。结论奥扎格雷钠对大鼠脑缺血/再灌注具有保护作用,其机制可能与抑制TNF-α表达有关。

舒必利致心律失常的电生理研究

目的:观察不同浓度舒必利对缺血兔心浦肯野纤维动作电位的影响及舒必利对豚鼠心室肌细胞钠通道电流的作用。方法:采用标准微电极技术,观察不同浓度(1～100μmol/L)舒必利对模拟缺血液灌流的离体兔心浦肯野纤维动作电位0期去极化幅值(APA)、最大除极速率(Vmax)、有效不应期(ERP)及90%动作电位时程(APD90)的影响。应用酶解法分离豚鼠单个心室肌细胞,应用全细胞膜片钳技术记录舒必利对钠通道电流(INa)的影响。结果:不同浓度的舒必利对缺血兔浦肯野纤维动作电位的APA和APD90无明显影响,对Vmax有降低趋势。舒必利(3～300μmol/L)浓度依赖性地抑制INa(IC50=10.79μmol/L,测试电压-35 mV)。10μmol/L舒必利降低了INa的最大电导gmax,使半激活、失活电压负值分别减小了1.91 mV(P<0.01)和5.22 mV(P<0.01);恢复时间常数增加,但最大激活电流可以基本恢复至给药前。结论:舒必利可轻度逆转缺血液灌流造成的心浦肯野纤维动作电位缩短,并浓度依赖性地抑制钠电流,舒必利作用于钠通道的失活态。

Rapamycin和cyclosporin A对同种排斥过程中TLR5及Foxp3表达的影响

目的:研究雷帕霉素(Rapamycin,RAPA)和环孢素A(cyclosporin A,CsA)体内处理对同种移植小鼠急性排斥过程中TLR5及Foxp3表达的影响。方法:建立同种皮肤移植模型,术后给予RAPA或CsA,1次/d,连续14d,同时设生理盐水对照组。每日观察移植物存活状况。术后选取1、7、10、14、21d共5个时间点,提取受体小鼠脾细胞,RT-PCR检测TLR5及Foxp3mRNA表达,探讨不同处理组基因表达与移植物生存的相关性。体外实验利用鞭毛蛋白(flagellin)联合RA-PA和CsA处理正常小鼠T细胞6h,RT-PCR检测TLR5表达。结果:RAPA和CsA可明显延长小鼠同种移植皮片存活期。RAPA可促进脾细胞TLR5mRNA表达升高,停药后的第21天仍明显高于CsA组和对照组(P<0.05);CsA组在第7、10天有显著升高,第21天降低(P<0.05);3组中最高表达的时间点为移植后第10天,此时正值排斥高峰期。RAPA可引起Foxp3mRNA的表达升高(P<0.05),停药后仍维持较高水平;CsA组仅在移植后第7、10天短暂升高,第14天低于对照组(P<0.05)。移植后1、7、10、21d3组的TLR5与Foxp3mRNA变化趋势正相关。体外实验中,RAPA或CsA与flagellin联合使用,可促进TLR5的表达,以前者的作用更为明显。结论:RAPA和CsA在同种移植急性排斥高峰期可引起TLR5和Foxp3表达的协同升高,且RAPA的作用更加明显和持久,鞭毛蛋白体外可以增强这种作用效果。

昆明种小鼠胚胎干细胞的培养及鉴定

目的从昆明种小鼠的早期胚胎中获取并培养胚胎干细胞。方法收集小鼠3.5d的囊胚培养,用小鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层,形成的ES细胞样集落,72h后分离隆起生长的内细胞团并继续培养,观察集落的生长状态,并通过碱性磷酸酶染色进行鉴定。结果ES细胞有其典型的形态学特征:集落呈鸟巢状,边缘清楚,表面平滑,结构致密,隆起生长,细胞之间界限不清楚;单个细胞体积小、核大;对ES细胞碱性磷酸酶进行检测,在AKP底物作用下,未分化的ES细胞显微镜下为棕褐色,分化的不着色。结论昆明种小鼠囊胚在小鼠胚胎饲养层细胞上可以发育为胚胎干细胞。