熟地黄-山茱萸药对通过PI3K/AKT通路对Aβ25-35诱导的N2a细胞凋亡的影响

目的研究熟地黄-山茱萸药对通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导小鼠脑神经瘤细胞株(N2a)细胞凋亡的抑制作用。方法以Aβ25-35(20μmol/L)处理N2a细胞构建阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)细胞模型,给予低、高浓度的熟地黄-山茱萸醇提物作用24 h。采用CCK8法测定细胞存活率,寻求最佳的Aβ25-35的诱导浓度;Hoechst 33342和Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡;比色法检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性;Western Blot法检测cleaved Caspase-3、p-PI3K、PI3K、p-AKT和AKT蛋白表达。结果与空白对照组比较,经过Aβ25-35处理后的N2a细胞凋亡率和Caspase-3蛋白表达及活性显著升高,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值下降(P<0.05);给予低、高浓度的熟地黄-山茱萸醇提物作用24 h后,N2a细胞的凋亡率和Caspase-3蛋白表达及活性降低,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值升高,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05);与低剂量组比,高剂量组N2a细胞的凋亡率和Caspase-3活性降低,p-AKT/AKT比值升高(P<0.05)。结论熟地黄-山茱萸醇提物可对Aβ25-35诱导的N2a细胞凋亡具有保护作用,其机制可能与促进PI3K/AKT信号通路有关。

防风多糖体内外免疫调节活性研究

目的采用体内外多指标免疫调节活性评价方法,研究防风多糖体内外免疫功能的调节作用。方法体外实验选用RAW 264.7小鼠巨噬细胞系,采用CCK-8法检测巨噬细胞的增殖能力,中性红染色法检测巨噬细胞的吞噬能力,Griess法测定巨噬细胞NO释放量,酶联免疫吸附法(ELISA)测定巨噬细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)释放量。体内实验选用环磷酰胺诱导的免疫低下BALB/c小鼠,通过碳粒廓清实验探讨防风多糖对小鼠网状内皮系统吞噬功能,以小鼠免疫器官指数评价防风多糖对小鼠免疫器官的影响,并采用ELISA法测定小鼠体内免疫球蛋白(IgM、IgG、IgA)和补体(C3、C4)含量。结果体外实验结果表明,防风多糖能够显著提高巨噬细胞的增殖和吞噬能力,并促进巨噬细胞释放NO、TNF-α和IL-6,但对IL-1β的释放量影响不显著。体内实验结果表明,防风多糖可使免疫低下小鼠模型的吞噬能力和免疫器官指数显著提高,并使免疫低下小鼠体内的免疫球蛋白(IgM、IgG、IgA)和补体(C3、C4)的含量升高。结论防风多糖在体内外水平均具有较好的免疫调节活性,参与调节机体的特异性免疫和非特异性免疫。

比较蛋白质组学揭示茉莉酸甲酯诱导的雷公藤甲素生物合成

目的:探索雷公藤甲素生物合成途径,以提高其产量或用于合成生物学异源生产。方法:使用无标记(lable-free)比较蛋白质组学对茉莉酸甲酯(MeJA)诱导的雷公藤悬浮细胞进行测序,通过京都基因与基因组百科全书(KEGG)、基因本体(GO)分析等方法,结合基因转录表达分析和基因体内功能研究,逐步筛选参与雷公藤甲素生物合成的功能基因。结果:MeJA诱导不同时间的样品组鉴定得到376个差异蛋白质,包括8个细胞色素P450酶(CYP450)、3个转录因子(TF)和2-氧戊二酸依赖的双加氧酶(2ODD)。其中CYP71BE89、CYP82AQ2和Tw2ODD基因在MeJA诱导及植物不同组织部位中,均与已知参与雷公藤甲素母核环化的二萜合酶TwTPS7(v2)和TwTPS27(v2)基因具有相似的表达模式,表明其可能与雷公藤甲素生物合成相关。进一步利用植物细胞体内功能研究,验证了CYP71BE89、CYP82AQ2和Tw2ODD基因干扰使雷公藤甲素积累分别降低了24.1%、41.4%和71.4%,表明了3个基因与雷公藤甲素生物合成直接相关。结论:利用比较蛋白质组学技术揭示了几种与雷公藤甲素生物合成相关的蛋白,进一步表征了雷公藤甲素生物合成与外源激素刺激之间的关系,并为发掘中药活性成分生物合成途径提供了一种有效方法。

荨麻多糖提取及其对HepG_(2)细胞的降糖作用研究

该文以荨麻为原材料,通过单因素试验和响应面试验优化半仿生提取荨麻多糖工艺。采用α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制实验,测定荨麻多糖的降糖作用。通过构建胰岛素抵抗HepG_(2)细胞(insulin resistant HepG_(2),IR-HepG_(2))模型,测定甘油三酯(triglyceride,TG)、己糖激酶(hexokinase,HK)、丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)、糖原含量来探讨荨麻多糖的降糖作用。结果表明,当pH_(1)3、pH_(2)8、料液比1∶16(g∶mL)、提取温度65℃、提取时间77 min时,荨麻多糖的得率为7.04%。α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制实验表明,荨麻多糖可通过抑制α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶来表现降糖作用。细胞实验表明,荨麻多糖可通过影响IR-HepG_(2)细胞的葡萄糖消耗来减轻胰岛素抵抗;通过提高HK、PK含量,促进糖原合成,降低TG含量来调节糖脂代谢,从而发挥降糖作用。综上所述,荨麻多糖具有较强降糖活性,为将其应用于糖尿病患者辅助功能食品提供理论依据。

白芍标准煎液指纹图谱及化学成分指认

目的建立白芍饮片标准煎液的指纹图谱,对白芍有效成分进行指认,以期为白芍饮片的质量控制及临床应用提供理论依据。方法收集10批白芍饮片,分别制备白芍标准煎液;采用超高效液相色谱(ultra performance liquid chromatography,UPLC)法建立白芍标准煎液的指纹图谱,以2012版《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》进行指纹图谱相似度分析;通过与对照品比对、与文献核对质谱数据,对共有峰进行指认。结果经检测,10批白芍标准煎液指纹图谱共标定了22个共有峰,各峰分离度较好,各样品间相似度均>0.9;共指认出5个共有峰:儿茶素,芍药内酯苷,芍药苷,除虫菊素Ⅱ,苯甲酰芍药苷。结论该研究建立的指纹图谱方法精密度、重复性、稳定性良好,可为白芍饮片的质量评价提供理论参考。

基于有效性完整表达的白芍质量标志物研究

目的:基于中药质量标志物(Q-marker)有效性原则,采用“性-效-物”三元论研究思路,从药性(味)和药效角度揭示白芍Q-marker。方法:采用液相色谱-质谱联用法(LC-MS),解析白芍、炒白芍、赤芍化学物质组;在此基础上,通过分子对接方法,选择白芍中各结构类型代表化合物为配体小分子,通过与苦、酸味受体进行分子对接实验,预测白芍潜在药性(味)物质基础;采用网络药理学方法,通过SwissTargetPrediction、中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)等数据库预测化合物潜在作用靶点,并进行生物信息学分析,构建化合物-靶点-信号通路-药理作用-功效网络,进一步以体外抗炎药效筛选模型,验证白芍及关键化合物的抗炎药效作用,明晰基于药效的白芍物质基础,进而基于有效性完整表达结果确定白芍Q-marker。结果:共解析出白芍中42个成分、炒白芍中41个成分、赤芍中34个成分。其中单萜及其苷类化合物可能为白芍最主要的苦味物质基础,带有没食子酰基的鞣质类化合物可能为白芍最主要的酸味物质基础。网络药理学结果发现,白芍中17个成分通过作用于191个潜在靶点干预了165条相关通路,可发挥促进骨髓造血功能、抑制子宫收缩、抗炎、镇痛、保肝、抗高血压和抑制汗腺分泌等作用;验证实验表明,白芍中8个主要成分可通过下调白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α和一氧化氮等炎症因子的表达发挥抗炎作用。结论:初步确定芍药苷、芍药内酯苷、氧化芍药苷、没食子酰芍药苷、苯甲酰芍药苷、儿茶素、五没食子酰葡萄糖及没食子酸为基于有效性完整表达的白芍Q-marker。

太子参脱毒苗培养、化学成分及指纹图谱研究进展

太子参是我国的传统中药材,含有多种生物活性成分,如糖类、环肽类、皂苷类、微量元素、挥发油类等。现代药理学研究表明这些化学成分具有增强记忆、免疫调节、抑制食管癌、降血糖、促血管新生等活性。近年来,多地大力推广人工栽培,建设太子参GAP基地。但亦出现了一些问题,如太子参病毒病呈逐年加重、品种混乱、内在质量参差不齐等。针对这些问题学者们开展了诸多研究。本文从太子参脱毒苗研究、化学成分研究及指纹图谱研究等方面进行综述,以期为该资源的种植栽培、药物研发、质量标准建立等提供参考。

牛白藤化学成分、药理作用及临床应用研究

牛白藤[Hedyotis hedyotidea(DC.)Merr.]为茜草科耳草属干燥全草,在我国广西、广东、福建、台湾地区、贵州、云南等地广泛分布,资源丰富。现代研究表明,牛白藤中含有萜类、甾体类、香豆素类、木脂素类等化合物,具有镇痛、抗肿瘤、抗菌消炎、抗白血病效应等作用。目前,牛白藤的药理活性研究大多以萜类为主,但是相关的药理机制研究较少。因此,本文对牛白藤的化学成分与药理作用及临床应用研究进行归纳总结,为今后对牛白藤的开发利用提供理论参考。

龙胆苦苷对果糖诱导小鼠高尿酸血症的作用

目的:研究龙胆苦苷对果糖诱导小鼠高尿酸血症的治疗作用。方法:昆明种小鼠连续饮用10%果糖溶液12周以制备高尿酸症小鼠模型,从第9周开始,别嘌呤醇组,龙胆苦苷高、中、低剂量组(80 mg/kg、40 mg/kg、20 mg/kg-)每天灌胃给药1次,共给药4周。末次给药后取血,检测血清谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、尿酸(UA)、肌酐(Cr)和血尿素氮(BUN)水平,苏木精-伊红(HE)染色观察肝、肾组织的变化;酶联免疫吸附试验法检测肾组织中超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平,比色法和蛋白质免疫印迹法检测肝组织中黄嘌呤氧化酶(XOD)活性及蛋白表达水平。结果:与模型组比较,龙胆苦苷各给药组小鼠血清GPT、GOT、UA、Cra和BUN水平显著降低(P<0.01),肝、肾病理学变化有所改善;肾脏SOD水平显著升高(P<0.01),MDA、TNF-α和IL-6水平显著降低(P<0.01);同时肝脏XOD的活性及蛋白表达水平显著下调(P<0.01或P<0.05)。结论:龙胆苦苷通过降低XOD活性和表达,降低尿酸水平,进而减轻肾脏氧化应激和炎症水平,达到肾脏保护作用。

骨骼风痛片的综合质量评价

目的建立测定骨骼风痛片中原薯蓣皂苷等11种成分含量的方法,同时进行化学计量学分析及熵权优劣解距离(EW-TOPSIS)法分析,以综合评价骨骼风痛片的质量。方法采用高效液相色谱法。以Agilent Eclipse Plus C18为色谱柱,以乙腈-0.2%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,检测波长为203 nm(0~28 min,原薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷)、280 nm(28~60 min,儿茶素、表儿茶素、甘草素、美迪紫檀素、6-姜辣素、8-姜酚、10-姜酚),进样量为10μL。以表儿茶素为内参物,采用一测多评(QAMS)法计算原薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷、儿茶素、甘草素、美迪紫檀素、6-姜辣素、8-姜酚和10-姜酚的含量,并与外标法检测结果进行比较;采用SPSS 26.0、SIMCA14.1软件进行主成分分析和正交偏最小二乘法-判别分析,以变量重要性投影(VIP)值大于1为标准,筛选影响质量的差异标志物;采用EW-TOPSIS法对15批样品的质量进行综合评价。结果高效液相色谱结合QAMS法测得原薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷、儿茶素、甘草素、美迪紫檀素、6-姜辣素、8-姜酚和10-姜酚的含量分别为6.330~10.863、1.150~2.274、0.431~0.740、2.818~4.823、0.826~1.510、0.043~0.094、0.079~0.231、0.479~1.020、0.146~0.288、0.118~0.318 mg/g,与外标法比较差异均无统计学意义(P>0.05);15批样品可分为3组,S1~S6、S7~S10、S11~S15分别聚为一组;原薯蓣皂苷、表儿茶素、薯蓣皂苷、6-姜辣素的VIP值均大于1;15批样品的最优解欧氏贴近度(Ci)为0.1635~0.7037,其中S11~S15样品的Ci值均大于0.6。结论所建QAMS法准确、简便,结合化学计量学分析及EW-TOPSIS法可用于综合评价骨骼风痛片的质量;原薯蓣皂苷、表儿茶素、薯蓣皂苷和6-姜辣素可能是影响骨骼风痛片质量的差异标志物;S11~S15样品的质量较好。

玉竹的化学成分、药理作用及其食品开发研究进展

玉竹不仅富含糖、蛋白质、氨基酸、维生素和矿物质等营养成分,还含较高的多糖、甾体皂苷、黄酮等生物活性成分,具有抗氧化、调节糖脂代谢、增强免疫、抗肿瘤、抗微生物、抗疲劳、抗衰老、护肝、调节胃肠道菌群、减肥等药理作用,已广泛用于普通食品和健康食品的开发利用。本文对其营养功能成分、生物活性及其在食品加工领域中的应用进展进行系统总结,以为其深入开发提供参考和支持。

HPLC法同时测定杠板归不同部位中5种成分的含量

目的建立高效液相色谱法同时测定杠板归不同部位(茎、叶、根)中5种成分的含量。方法采用Luna?-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸水为流动相梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为320 nm,柱温为30℃,测定杠板归不同部位中绿原酸、咖啡酸、芦丁、阿魏酸、槲皮素的含量。结果绿原酸、咖啡酸、芦丁、阿魏酸、槲皮素分别在0.046~4.6μg/mL,0.212~21.2μg/mL,0.055~5.5μg/mL,0.084~8.4μg/mL,0.114~11.4μg/mL范围内质量浓度与峰面积呈线性关系良好(r>0.9990),平均加样回收率为97.65%~102.09%,RSD为1.76%~2.44%。不同部位中5种成分含量差异较大,绿原酸和咖啡酸2个成分在叶中含量高,且远远高于根和茎中的含量;芦丁和阿魏酸主要存在于茎和根中,叶中未检测到;槲皮素在茎中含量最高,叶中次之,根中最低。结论建立的HPLC方法准确可靠、重复性好、专属性强,可用于杠板归不同部位中5个成分含量的同时测定。

鸡血藤在大鼠体内的排泄动力学研究

目的:研究大鼠灌胃鸡血藤水提取物的排泄动力学,为其临床应用提供科学依据。方法:给雄性SD大鼠灌胃鸡血藤水提取物(30 g·kg^(–1),以生药量计),分别在给药后的2、4、6、8、12、24、48 h收集每组的粪便和尿液。采用超快速液相色谱-质谱法检测大鼠排泄物样品,通过与对照品比对后鉴定和定量鸡血藤水提取物中化合物。结果:在大鼠48 h排泄的尿液和粪便中可检测到20个原型化合物,即烟酸(1)、对羟基苯甲酸(2)、水杨酸(3)、6,9-二羟基大柱香波龙-4,7-二烯-3-酮(4)、大豆苷(5)、8,9-二羟基大柱香波龙-4,6-二烯-3-酮(6)、异落叶松脂素(7)、芒柄花素(8)、4′,8-二甲氧基-7-O-β-D-吡喃葡萄糖基异黄酮(9)、(+)-松脂酚(10)、(+)-表松脂酚(11)、8-甲雷杜辛(12)、芒柄花素钠(13)、3′-甲氧基大豆素(14)、鸡血藤黄醇A (15)、毛蕊异黄酮(16)、艳紫铆素A (17)、奥刀拉亭(18)、鹰嘴豆芽素A (19)和(6a R,11a R)-高丽槐素(20)。结论:鸡血藤中的一些原型化合物可通过大鼠尿液和粪便排出体外。

探究中药体内代谢过程的内稳态

中药体内代谢过程是中药的系统性、复杂性和需要首先阐明的重大基础科学问题,构建中药体内过程评价体系是中医药现代研究水平全面提升的关键所在。中药多组分在体内代谢过程十分复杂,即使是单味药也含有成千上万种难以追踪的化学成分,但对于中药代谢物之间自洽的协调和平衡关系尚不清楚,同时缺少中药体内代谢自洽与内稳态之间的相关性研究。为全面揭示中药在体内代谢内稳态的整体逻辑性,现从机体中肝脏、肾脏、肠道及其微生物的生物酶-转运蛋白之间的内稳态调节机制出发,系统梳理体内中药代谢产物之间、外源性代谢产物与内源性代谢物之间、内源性代谢物与非共价结合的大分子蛋白之间的内稳态关系,旨在阐明中药体内代谢自洽作用与内稳态调节关系的科学内涵,以期揭示中药药效物质基础、有效成分的体内动态规律。

灯心草及其炮制品质量标准提升研究

目的:通过对灯心草及其炮制品的各项常规物质检查和薄层色谱以及主要成分的检视,为灯心草、煅灯心草及朱砂拌灯心草饮片质量标准的建立提供参考依据。方法:通过TCL对10批样品进行鉴别;根据2015版《中国药典》对灯心草生品及其炮制品饮片的水分、总灰分与浸出物含量以及主要成分进行检测。结果:灯心草生品水分含量(8.17%±0.25%),灰分含量(2.36%±0.91%),浸出物含量(5.03%±1.21%);煅灯心草水分含量(3.14%±1.74%),灰分含量(16.84%±5.34%),浸出物含量(6.56%±1.20%);朱砂拌灯心草水分含量(7.93%±3.55%),浸出物含量(4.83%±1.36%);灯心草去氢厄弗酚含量在0.0390~1.2039 mg/g。薄层色谱主斑点清晰,专属性强,液相色谱含量测定方法可靠,稳定性强。结论:本次实验操作方法便捷,重现性良好,为灯心草生品、煅灯心草、朱砂拌灯心草的质量控制提供参考。

羌活胜湿汤物质基准多指标成分含量测定及量值传递分析

[目的]建立经典名方羌活胜湿汤(QSD)物质基准的高效液相(HPLC)含量测定方法,进行量值传递分析。[方法]制备15批QSD物质基准冻干粉,以羌活醇、二氢欧山芹醇当归酸酯、5-O-甲基维斯阿米醇苷、蔓荆子黄素、异欧前胡素、甘草酸铵为专属性指标成分,建立含量测定的检测方法,明确指标成分的含量范围、转移率范围及出膏率,对饮片到物质基准对应实物间的量值传递进行分析。[结果]15批物质基准指标成分含量(转移率)分别为:羌活醇1.09~1.70 mg/g(10.17%~32.62%),二氢欧山芹醇当归酸酯0.06~0.20 mg/g(7.30%~10.85%),5-O-甲基维斯阿米醇苷1.27~2.81 mg/g(66.13%~92.13%),蔓荆子黄素0.09~0.59 mg/g(5.24%~13.37%),异欧前胡素0.03~0.28 mg/g(0.94%~1.92%),甘草酸铵12.74~33.78 mg/g(48.96%~62.56%);出膏率为30.09%~34.35%。[结论]采用HPLC法初步建立了经典名方QSD物质基准多指标成分含量测定方法,为经典名方QSD后续的研究及相关制剂研发的质量控制提供依据。

响应面法优化药对荆芥-防风中挥发油的提取工艺

目的 优化药对荆芥-防风挥发油的提取工艺。方法 采用水蒸气蒸馏法提取挥发油。采用单因素试验分别考察液料比、浸泡时间和提取时间对挥发油提取量的影响,在此基础上,采用3因素3水平的Box-Behnken响应面法优化挥发油的提取工艺,并进行验证试验。结果 优选的挥发油提取工艺为液料比11∶1,浸泡1 h,提取7.5 h,在该条件下挥发油的提取量为0.63 mL,与预测值的偏差较小。结论 优选的荆芥-防风挥发油的提取工艺稳定可行。

柴胡化学成分及药理作用研究进展

柴胡是临床应用较为广泛的中药材,其药用部位为伞形科植物柴胡或狭叶柴胡的干燥根,具有较高的药用价值。现代药理研究表明,柴胡含有多种化学成分,在心血管系统、呼吸系统、消化系统、神经系统、内分泌系统等多种疾病具有良好的治疗作用。本文梳理近年来柴胡相关文献进行综述分析,阐述柴胡化学成分及药理作用研究进展。

盐酸替罗非班氯化钠注射液与丹红注射液等6种中药注射液配伍稳定性研究

目的:开展盐酸替罗非班氯化钠注射液与丹红注射液等6种中药注射液配伍稳定性研究。方法:采取室温(25℃)条件下考察盐酸替罗非班氯化钠注射液与丹红注射液、苦碟子注射液、银杏达莫注射液、注射用红花黄色素、参麦注射液、灯盏细辛注射液配伍后放置0、1、2、4、6 h的外观性状、p H值、可见异物、不溶性微粒数、吸收度变化等情况。结果:盐酸替罗非班氯化钠注射液与丹红注射液、苦碟子注射液、银杏达莫注射液、注射用红花黄色素、参麦注射液、灯盏细辛注射液配伍后,各配伍溶液在6 h内性状均无显著变化,无沉淀、无结晶、无明显可见异物、pH值无明显变化。与银杏达莫注射液、参麦注射配伍后6 h内的不溶性微粒均超出《中国药典》规定限度。结论:盐酸替罗非班氯化钠注射液与丹红注射液、苦碟子注射液、注射用红花黄色素、灯盏细辛注射液配伍稳定,与银杏达莫注射液、参麦注射液配伍不稳定。

新型汉防己甲素衍生物的合成及其抗肿瘤活性研究

设计合成汉防己甲素衍生物,并研究其抗肿瘤活性。以汉防己甲素为原料经溴代反应制得关键中间体5-溴汉防己甲素,然后经溴锂交换后形成锂盐与芳香醛加成得到3个新型汉防己甲素衍生物,其结构经^(1)HNMR,^(13)CNMR和ESI-MS验证。采用MTT法初步评价4个样品对人肝癌细胞(HepG2)和人胃癌细胞(BGC-823)的抗肿瘤活性。初筛结果表明:对HepG2细胞抑制最强的为化合物2,对BGC-823细胞抑制最强的为化合物1。汉防己甲素通过结构修饰,其衍生物1、2的抗肿瘤活性大于汉防己甲素。