基于ERIC-PCR技术分析黄连解毒汤对2型糖尿病大鼠肠道菌群结构及DNA同源性的影响

目的:基于ERIC-PCR技术分析黄连解毒汤对2型糖尿病(diabetes mellitus type 2,T2DM)大鼠肠道菌群结构及DNA同源性的影响。方法:从36只SD大鼠中随机选取6只作为对照组,其余大鼠给予高脂饲料联合1%链脲佐菌素(30 mg·kg^(-1))建立糖尿病模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、黄连解毒汤高剂量组(6.25 g·kg^(-1))、黄连解毒汤中剂量组(3.13 g·kg^(-1))、黄连解毒汤低剂量组(1.56 g·kg^(-1))及二甲双胍组(100 mg·kg^(-1)),每组各6只。各药物组按照相应剂量灌胃给药,对照组和模型组灌胃等体积生理盐水,连续21 d。第7天、第14天及第21天灌胃后,收集大鼠粪便,提取肠道菌群DNA。利用ERIC-PCR技术和Sanger测序检测大鼠肠道菌群结构与DNA同源性。结果:灌胃第7天,对照组条带较多集中在100~750 bp;与对照组比较,模型组条带在1 000~2 000 bp的亮度增强,在300~750 bp的亮度减弱;与模型组比较,黄连解毒汤各剂量组和二甲双胍组条带在750 bp的亮度增强。灌胃第14天,与模型组比较,黄连解毒汤各剂量组和二甲双胍组条带在1 000 bp以上的亮度减弱。灌胃第21天,与模型组比较,黄连解毒汤各剂量组和二甲双胍组条带在300~750 bp的亮度增强。DNA测序结果显示,灌胃第21天,对照组500 bp条带的优势菌群为拟杆菌属、杜氏邓氏菌和金黄杆菌属;模型组400 bp和1 000 bp条带的优势菌群为梭菌目细菌、普拉梭菌、铜绿假单胞菌和杆菌属。灌胃第7天,黄连解毒汤高剂量组750 bp条带的优势菌群为布劳特菌和拟杆菌属;黄连解毒汤中剂量组200 bp条带的优势菌群为脆弱拟杆菌和拟杆菌属;黄连解毒汤低剂量组1 200 bp条带的优势菌群为双发酵副梭菌;二甲双胍组1 000 bp条带的优势菌群为大肠埃希杆菌。灌胃第14天,黄连解毒汤高剂量组700 bp条带的优势菌群为拟杆菌目细菌和假单胞菌;黄连解毒汤中剂量组550 bp条带的优势菌群为假锁杆菌属和链霉菌属;黄连解毒汤低剂量组350 bp条带的优势菌群为Muribaculum gordoncarteri、肠杆菌、杜氏邓氏菌和杆菌科细菌;二甲双胍组290 bp条带的优势菌群为弗格森埃希菌和大肠埃希杆菌。灌胃第21天,黄连解毒汤高剂量组1 000 bp条带的优势菌群为普雷沃氏菌属;黄连解毒汤中剂量组600 bp条带的优势菌群为Muribaculum gordoncarteri、杜氏邓氏菌和拟杆菌属;二甲双胍组400 bp条带的优势菌属为Muribaculum gordoncarteri、肠杆菌、普雷沃氏菌属、杆菌科细菌和杆菌属。结论:黄连解毒汤对T2DM大鼠的肠道菌群结构具有调节作用,菌群调节效果受药物剂量和治疗时间的影响。

灵芝孢子油体内外抗氧化作用研究

为研究灵芝孢子油(GLSO)体内外抗氧化作用,试验采用体外测定GLSO对DPPH、ABTS、超氧自由基(·O^(-)_(2))的清除率,体内通过D-半乳糖构建小鼠衰老模型,测定衰老小鼠血清及肝组织中SOD、CAT、MDA含量和肝组织PI3K/AKT蛋白表达水平。结果显示,GLSO对DPPH、ABTS、超氧自由基(·O^(-)_(2))的清除作用相当于VC的84.05%、22.05%、46.48%;模型组的小鼠血清和肝组织与空白组相比,SOD、CAT值降低,MDA有所升高,p-AKT/AKT和p-PI3K/PI3K比值降低,同时各剂量间呈一定的依赖效应。研究结果表明,GLSO可能通过激活PI3K/AKT通路发挥抗氧化作用。

穿心莲片在健康人体内的药物动力学研究

目的:研究穿心莲片中脱水穿心莲内酯在中国健康志愿者体内的药物动力学。方法:8名男性健康志愿者,单剂量口服穿心莲片2片,用高效液相色谱-质谱联用法测定血浆中脱水穿心莲内酯的含量,用PK Solution软件计算药物动力学参数。结果:穿心莲片中的脱水穿心莲内酯主要药动学参数tmax,Cmax,t1/2ka,t1/2α,t1/2β,AUC0-t分别为(1.50±0.21)h,(147.30±53.29)μg.L-1,(0.51±0.28)h,(0.60±0.33)h,(3.62±1.16)h,(256.63±64.18)μg.h.L-1。结论:穿心莲片中脱水穿心莲内酯在体内吸收迅速,达峰较快,消除半衰期较长,结果可为穿心莲片在临床用药的安全和有效提供实验依据。

小建中汤抗炎免疫作用的实验研究

目的研究小建中汤的抗炎免疫作用。方法以二甲苯所致小鼠耳廓肿胀及醋酸诱发小鼠血管通透性增高的炎症模型研究小建中汤的抗炎作用;采用小鼠炭粒廓清实验和溶血空斑生成,观察小建中汤对免疫系统的作用。结果小建中汤对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀、醋酸诱发小鼠血管通透性增加有明显的抑制作用,给药组与模型组比较差异显著;能提高吞噬指数和溶血空斑OD值。结论小建中汤具有抗炎、增强机体免疫力的作用,为其临床应用提供药理学实验基础。

皮神经卡压大鼠模型缓激肽、组胺的变化

目的:探讨皮神经卡压大鼠模型致痛物质缓激肽(BK)、组胺(HIS)的变化。方法:Wistar大鼠40只,分成4组,A组:隐神经不做任何处理;B组:以内径0.5 mm的硅胶管卡压隐神经;C组:以内径0.5 mm的硅胶管卡压隐神经,两周后去除硅胶管;D组:以内径0.5 mm的硅胶管卡压隐神经,两周后行铍针治疗。4周后测定机体自身所分泌的致痛因子BK、HIS的浓度。结果:4周后B组致痛因子BK、HIS的浓度明显高于A组,有统计学意义,C组和D组致痛因子BK、HIS的浓度比较无统计学意义。结论:皮神经卡压大鼠致痛物质BK、HIS明显高于正常,导致疼痛,经减压后,疼痛缓解,致痛物质BK、HIS浓度趋于正常,证明通过减压可抑制机体释放降低痛阈的物质达到缓解疼痛的疗效。

山橿对幽门螺杆菌的抑菌实验研究

目的:研究山橿各部位对幽门螺杆菌(helicobacterpyleri,HP)的体外抗菌作用。方法:采用棋盘法设计,以琼脂平板法测定山橿不同部位不同浓度提取物对HP的最低抑菌浓度。结果:山橿石油醚部位提取物对HP的最低抑菌浓度为每升含相当于125g生药)。结论:找出山橿不同部位提取物的最低抑菌浓度,为进一步研究药材中抗HP活性物质提供依据。

大黄配伍药对的泻火作用变化及其共性关系研究

目的:研究大黄枳实、大黄黄连、大黄牡丹、大黄桃仁、大黄甘遂5个药对配伍后大黄泻火作用的变化及其共性关系。方法:将90只实验动物随机分为生理盐水组、模型组、阿司匹林组、大黄组、大黄枳实组、大黄黄连组、大黄牡丹组、大黄桃仁组、大黄甘遂组,每组10只。大黄组及大黄药对组(大黄生药量为15 g/kg)按10 ml/kg的容量给药3 d后,于第4 d尾静脉注射内毒素及干酵母复制大鼠发热模型,0.5 h后分别灌胃给药,观察比较各大鼠给药后7 h内的体温变化。结果:与模型组比较,大黄各药对配伍后其泻火作用均有不同程度的改变,其中大黄组、大黄黄连组对内毒素及干酵母所致的发热具有显著退热作用;且与大黄组比较,大黄黄连组对内毒素及干酵母所致的发热具有更显著的退热作用。结论:大黄药对配伍后其泻火作用均有不同程度的改变,其中大黄黄连组的泻火作用最强,与大量文献报道的大黄药对配伍后蒽醌类成分的变化相对应。

清泻浊毒法对小鼠高尿酸血症的影响及机制研究

目的：观察清泻浊毒法治疗高尿酸血症的疗效，拆方研究并探讨其作用机制。方法：将70只雄性小鼠随机分为空白组、模型组、别嘌呤醇组、苯溴马隆组、土茯苓熟大黄组、金银花蒲公英组及清泻浊毒方组，以氧嗪酸钾盐腹腔注射建立高尿酸血症模型．观察药物对各组小鼠血清尿酸和肝脏黄嘌呤氧化酶活性的影响。结果：药物组中，苯澳马隆组和清泻浊毒方组血尿酸下降最为明显．土茯苓熟大黄组血尿酸数值最高，与清泻浊毒方组比较有显著性差异（P〈0．05）；清泻浊毒方组降低小鼠肝脏黄嘌呤氧化酶活性最为明显，优于土茯苓熟大黄组和苯溴马隆组（P〈0．05-0．01），与别嘌呤醇组和金银花蒲公英组作用相当（P〉0．05）。结论：清泻浊毒法能够明显降低高尿酸血症模型小鼠的血尿酸水平，其中清热解毒类药物金银花蒲公英发挥了主要作用．抑制肝脏黄嘌呤氧化酶活性是其主要作用机制之一。

健胎液对人脐静脉内皮细胞分泌血管活性物质的影响

采用血清药理学方法观察健胎液对缺氧人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）分泌血管活性物质──内皮素（ＥＴ）、前列环素（ＰＧＩ２）、一氧化氮（ＮＯ）的影响，以及对缺氧ＨＵＶＥＣ形态结构的保护作用，旨在探讨健胎液防治胎儿宫内生长迟缓（ＩＵＧＲ）的机理。结果表明：健胎液可显著提高缺氧ＨＵＶＥＣ合成分泌ＰＧＩ２、ＮＯ（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１），同时减少ＥＴ的释放（Ｐ＜０．０５）；从超微结构上观察，健胎液能明显减轻缺氧对ＨＵＶＥＣ细胞器和细胞核的损伤。结果提示：健胎液通过增强ＨＵＶＥＣ对缺氧的耐受性，调节血管活性物质的分泌是其防治胎儿宫内生长迟缓的机制之一。

雷公藤内酯醇单独及联合硼替佐米作用于PC3细胞的研究

目的:观察雷公藤内酯醇(triptolide,TPL)单独及联合硼替佐米(bortezomib,BZM)对激素抵抗性前列腺癌PC3细胞的体外生长和凋亡的影响。方法:选用递增浓度的TPL和BZM单独及联合作用于PC3细胞,MTT法检测PC3细胞生长抑制率;流式细胞仪检测PC3细胞凋亡;RT-PCR分析血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达。结果:TPL、BZM单独对PC3细胞生长均有抑制作用且呈时间和剂量依赖性。相同浓度时,TPL单独作用强于BZM(P<0.05),两药联合可明显提高细胞生长抑制率(P<0.05);流式细胞检测发现,联合用药引起细胞凋亡也明显高于单独用药(P<0.05);TPL和BZM均能下调VEGFmRNA的表达,联合用药下调作用更加明显(P<0.05)。结论:不论是单独还是联合应用TPL和BZM均可抑制PC3细胞增殖并诱导其凋亡,两药联合作用明显强于单独用药,两者作用有协同性。

阿霉素联合他巴唑诱导慢性肾脏病肾阳虚证大鼠模型的建立与评价及真武汤干预作用的研究

目的探讨阿霉素联合他巴唑诱导慢性肾脏病肾阳虚证大鼠模型的建立方法与评价及真武汤干预作用的研究。方法SPF级体质量200-220 g的SD雄性大鼠52只,适应性喂养2周,随机分为正常组10只、模型组42只,模型组大鼠第3周、第4周分别按照3 mg·kg^(-1)、4mg·kg^(-1)体重尾静脉注射阿霉素进行慢性肾脏病大鼠模型造模。模型成功大鼠按体质量与尿蛋白进行分层随机,分为阿霉素组14只、他巴唑组14只、真武汤组14只,第13周起真武汤组按照5.39 g/kg/天进行干预。观察大鼠一般情况,每周称取大鼠体质量,每4周检测大鼠24 h尿蛋白定量、采用红外测温枪检测大鼠体温,采用大鼠游泳实验检测游泳时间。24周后股动脉取血并处死大鼠,称取大鼠肾脏、脾脏、睾丸重量并计算脏器指数,采用HE染色、Masson染色观察各组大鼠肾组织病理情况。采用比色法检测血清Scr、BUN、UA、TC、TG、TP、ALB、SOD的水平;采用酶联免疫吸附法检测血清T3、T4、TSH、FSH、LH、T、E2、CORT的水平。结果与正常组比较,他巴唑组大鼠出现毛发枯槁、弓背、懒动、蜷缩、喜扎堆、肛周污秽、体型较为瘦弱、行动迟缓等典型肾阳虚体征,真武汤组较他巴唑组一般情况有所好转,肾阳虚体征减轻,体重显著升高(P<0.01),肾脏指数、24 h尿蛋白定量明显下降(P<0.01),体温、游泳时间增加;肾脏组织HE、Masson染色结果显示,阿霉素组、他巴唑组肾小球系膜区增宽,系膜细胞增生,系膜区有大量胶原纤维沉积,肾小管扩张或萎缩,存在蛋白管型,肾间质有大量炎性细胞浸润,阿霉素组球囊壁粘连明显,真武汤组病理变化有所改善;血清指标显示,与他巴唑组相比,真武汤组Scr、UA、BUN、TC、TG有降低趋势,ALB含量升高(P<0.05);甲状腺轴指标T3有升高趋势,T4显著升高(P<0.01),TSH显著降低(P<0.01);真武汤组性腺轴指标FSH、LH、E2显著升高(P<0.01),T无差异;肾上腺轴指标CORT各组之间无统计学差异;真武汤组SOD显著升高(P<0.01)。结论阿霉素联合他巴唑可以成功建立慢性肾脏病肾阳虚证动物模型,真武汤干预作用也证明了该病证结合模型的成功建立,该模型主要模拟了慢性肾脏病下丘脑-垂体-甲状腺轴功能低下的肾阳虚证动物模型。

更年康对大鼠心肌线粒体作用的分析

应用透射电镜观察更年康作用于更年期大鼠心肌细胞线粒体的变化特点，分析了线粒体变异发生率，并采用ＩＢＡＳ－２０００图像分析系统和体视学方法，测定心肌线粒体的三维结构参数体密度、数密度。结果表明：更年期大鼠经更年康药物处理后，心肌线粒体数目增多，结构清晰，变异率减小，体密度、数密度明显增大。体视学量化分析说明，更年康具有促进心肌细胞能量代谢。