基于高通量测序技术的9种铁线莲属药材混合粉末分子鉴定

目的建立基于高通量测序技术的9种铁线莲属混合粉末分子鉴定方法。方法采用高通量测序技术,对9种铁线莲属药材混合粉末样品中的总DNA经提取,对ITS2片段进行PCR扩增,利用Illumina MiSeq平台对DNA片段进行双端测序,最后采用FLASH、QIIME、GraPhlAn及MEGA 7.0软件对序列进行整理并聚类分析,鉴定混合粉末中的物种。结果混合粉末样品中得到高质量的ITS2序列共496条,铁线莲属物种含有序列72条,比对出棉团铁线莲、女萎铁线莲、短尾铁线莲、灌木铁线莲、单叶铁线莲、黄花铁线莲、粗齿铁线莲等7个物种,未能比对出东北铁线莲和芹叶铁线莲。结论以ITS2作为DNA条形码,采用高通量测序技术,可以鉴定出铁线莲属药材混合样品中的7个物种,为混合药材的鉴定提供依据。

参柏舒心颗粒HPLC指纹图谱建立

本文旨在建立参柏舒心颗粒HPLC指纹图谱。本研究采用Waters C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:乙腈-0.05%三氟乙酸水溶液;流速为0.8 mL/min,进行梯度洗脱;柱温为40℃;检测波长为288 nm。建立10批参柏舒心颗粒HPLC指纹图谱,利用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)”软件对其进行相似度评价。建立了参柏舒心颗粒HPLC指纹图谱,共确定了25个共有峰,鉴定了5个成分,分别为丹参素钠,原儿茶醛,黄柏碱,丹酚酸B,欧前胡素;10批样品相似度均大于0.93,方法可靠。本研究分析方法具有较强的可行性,达到良好的分离效果,可为提高参柏舒心颗粒生产质量控制提供一定的科学依据。

不同产地玉叶金花质量比对研究

目的:对湖南桃源、广西玉林、广东茂名三地的玉叶金花中药材进行质量比对研究。方法:根据各地玉叶金花中药材质量标准,通过状性鉴别、薄层鉴别、显微鉴别、理化鉴别、含量测定等方法,鉴定各地玉叶金花药材质量。结果:三地的玉叶金花在薄层鉴别、理化鉴别、显微鉴别方面差别不大,外观性状方面叶面有稍微差别。湖南桃源玉叶金花中的新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C的总量最低,为0.598%,而广西玉林和广东茂名玉叶金花中这些成分总含量较高,分别为0.986%和1.098%。结论:通过对三地玉叶金花中药材质量进行比对,可为玉叶金花中药材的鉴别、种植、质量评价提供参考。

芪归养血颗粒质控标准研究

目的研究建立芪归养血颗粒质控的标准。方法采用薄层色谱法(TLC)对黄芪、淫羊藿、菟丝子进行定性鉴别,通过超高效液相色谱-蒸发光散射检测器(UPLC-ELSD)测定制剂中黄芪甲苷含量:色谱柱:Acclaim RSLC 120 C_(18)(100 mm×2.1 mm,2.2µm),ELSD,流动相为乙腈-水(32∶68),流速为0.4 ml/min;柱温30℃;进样体积为1μl。结果TLC能特异性鉴别黄芪、淫羊藿、菟丝子。黄芪甲苷的注射量与峰面积具有良好的线性关系,线性范围为0.0826~0.8260µg,r=0.9996;平均回收率为99.19%,相对标准偏差(RSD)为0.74%。结论采用TLC法和UPLC-ELSD检测对芪归养血颗粒分别进行了定性鉴别和定量分析,所建立的方法专属性强,结果准确,可作为芪归养血颗粒的质控方法进行应用。

复方冬凌草含片微生物限度检查方法学研究

目的建立适用于复方冬凌草含片的微生物限度检查方法,以保证其质量和安全性。这个方法要能测量需氧菌的数量、霉菌和酵母菌的数量,并且限制菌中的肠道埃希菌。方法根据《中华人民共和国药典(2020年版)》第四部分中通用规则1107的规定,本研究对该方法的适应性和回收效率进行了评估和测试。试验中,本研究采用常规法和稀释法,对复方冬凌草含片样品进行菌落计数。结果复方冬凌草含片具有显著的抑菌作用。利用标准方法进行测试,结果显示,复方冬凌草对各种细菌如青色链状真菌(pseudomonas aeruginosa)、枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)、金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus)及白色念珠菌(candida albicans)等有良好的抑制作用。同时,对黑色发霉体与酿酒酵母也有较好的控制能力。然而通过降低浓度的方法检测时,无论是需要空气的微生物还是发酵类生物都呈现出了较低水平,即低于或接近于0.5的比例值上限。在控制菌检查中,采用常规法检出了阳性菌。结论成功地建立了一种适用于复方冬凌草含片微生物限度检查的稀释法。该方法能可靠地评估复方冬凌草含片的微生物质量,并为其合规生产提供了可行的检测方案。

多组分定量联合化学计量学及灰色关联度分析骨力胶囊质量评价

目的建立骨力胶囊多组分定量检测方法,探索化学计量学及灰色关联度分析模型在其质量评价中的应用。方法采用HPLC法,乙腈-0.2%醋酸为流动相梯度洗脱;检测波长为270、430和250 nm;以葛根素为内参物,建立多组分定量分析模式。再通过化学计量学及GRA评价其综合质量。结果外标法方法学验证结果均符合要求;相对校正因子法和外标法的定量结果显示二者差异无统计学意义。化学计量学分析结果显示淫羊藿苷、葛根素、朝藿定、补骨脂素和姜黄素为骨力胶囊的代表性差异成分;GRA模型稳定,相对关联度在0.3095~0.6145。结论所建立的方法简便实用,化学计量学和GRA可用于评价骨力胶囊的整体质量。

中药鉴定学课程思政教学探索

在专业框架下进行思政教育是实现高校“三全育人”模式的重要抓手。引导学生将专业知识内化为个人素养,在育才过程中实现育德。笔者对中药鉴定学教学实践融合课程思政进行总结,为实现专业教育与思政教育的有机融合与统一提供借鉴。

基于指纹图谱和网络药理学对经典名方五味消毒饮质量标志物的预测分析

目的 基于HPLC指纹图谱和网络药理学对五味消毒饮中的质量标志物(Q-marker)进行预测。方法 建立15批五味消毒饮的指纹图谱,并对其进行峰指认和峰归属,利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2012年版)进行分析;通过网络药理学对核心靶点及通路进行筛选,构建“成分-靶点-通路”网络图;以Q-marker“五原则”为核心预测五味消毒饮的质量标志物。结果 15批五味消毒饮指纹图谱相似度大于0.95,标定13个共有峰,对其中11个特征峰进行指认,分别为新绿原酸、绿原酸、秦皮乙素、隐绿原酸、马钱子苷、断氧化马钱子苷、菊苣酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、蒙花苷;通过网络药理学分析,推测绿原酸、秦皮乙素、断氧化马钱子苷、菊苣酸、蒙花苷5个成分可能为五味消毒饮的潜在Q-marker,其可能通过调节肿瘤抑制因子p53/癌蛋白Mdm2、酪氨酸蛋白激酶SRC等多个基因以及胰腺癌、前列腺癌等多条癌症疾病通路来发挥抗肿瘤、抗癌功效;同时还对五味消毒饮可用于治疗新型冠状病毒肺炎进行预测分析。结论 建立的五味消毒饮HPLC指纹图谱分析方法灵敏、快速且稳定;结合网络药理学筛选出具有溯源性和可预测性,且与五味消毒饮临床应用相关的5个化合物作为其潜在Q-marker,为今后五味消毒饮的进一步研究提供参考。

接骨丹片质量标准提升研究

目的 提升接骨丹片的质量标准。方法 采用薄层色谱法鉴别制剂中的制马钱子和大黄;采用高效液相色谱法同时测定马钱子碱和士的宁的含量,色谱柱为Kromasil 100-5-C_(18)柱(250 mm×4.6 cm,5μm),流动相为乙腈-0.01 mol/L庚烷磺酸钠与0.02 mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液进行梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为260 nm,柱温为30℃,进样量为10μL。结果 制马钱子、大黄的薄层色谱图斑点清晰,分离度高,且阴性对照无干扰。马钱子碱和士的宁的质量浓度分别在1.46~116.73μg/mL和1.60~128.30μg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 5,0.999 7,n=6);精密度、重复性、稳定性试验结果的RSD均小于2.0%(n=6);平均加样回收率分别为97.28%和96.23%,RSD分别为1.16%和1.36%(n=6)。结论 该方法专属性好,结果准确、可靠,可用于接骨丹片的质量评价。

高效液相色谱指纹图谱结合一测多评法评价诃子药材质量

目的评价诃子药材的质量。方法建立诃子药材的高效液相色谱指纹图谱,采用相似度计算、聚类分析和主成分分析法对其质量进行评价。以柯里拉京为内参物,建立测定诃子药材中莽草酸、没食子酸、没食子酸甲酯、没食子酸乙酯、诃黎勒酸、鞣花酸、诃子酸含量的一测多评法,并将计算结果与外标法测定结果进行比较。结果18批诃子药材的指纹图谱有23个共有峰,指认出2号峰为莽草酸、7号峰为没食子酸、11号峰为没食子酸甲酯、14号峰为柯里拉京、15号峰为没食子酸乙酯、16号峰为诃黎勒酸、20号峰为鞣花酸、22号峰为诃子酸,相似度均大于0.95。聚类分析结果显示,18批诃子药材聚为2类,其中产地为青海的2批药材聚为一类,其余药材聚为一类。主成分分析结果显示,主成分特征值大于1的5个成分累积方差贡献率为84.088%。采用一测多评法计算的18批诃子药材中莽草酸、没食子酸、没食子酸甲酯、没食子酸乙酯、诃黎勒酸、鞣花酸、诃子酸的含量与外标法测定结果无显著差异(P>0.05)。结论高效液相色谱指纹图谱结合一测多评法可有效评价诃子药材的质量。

淫芎颗粒质量标准研究

目的建立淫芎颗粒的质量标准。方法采用薄层色谱法对制剂中川芎、白芍进行定性鉴别;采用高效液相色谱法同时测定制剂中芍药苷、甘草苷、阿魏酸、柚皮苷、橙皮苷、淫羊藿苷、甘草酸铵的含量,色谱柱为Agilent Zorbax SB-C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5µm),流动相为乙腈-0.3%磷酸溶液(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测波长为230 nm,柱温为30℃,进样量为10µL。结果薄层色谱斑点清晰,分离度良好,且阴性对照无干扰。芍药苷、甘草苷、阿魏酸、柚皮苷、橙皮苷、淫羊藿苷、甘草酸铵的质量浓度分别在8.886~222.156µg/mL、3.935~98.385µg/mL、3.805~95.118µg/mL、4.457~111.416µg/mL、4.574~114.360µg/mL、3.512~87.794µg/mL、4.274~106.850µg/mL范围内与各自峰面积线性关系良好(r≥0.9991,n=7);精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均小于3.0%;平均加样回收率分别为99.68%,99.19%,100.31%,100.70%,99.74%,98.77%,98.99%,RSD分别为1.57%,1.89%,2.77%,1.52%,1.58%,1.27%,2.18%(n=9);平均含量分别为5.743,0.547,0.472,1.426,1.376,1.982,1.480µg/mL(n=2)。结论该方法操作方便、结果准确、专属性和重复性好,可用于淫芎颗粒的质量控制。

午时茶颗粒微生物限度检查方法的验证

按照《中华人民共和国药典》(2020年版四部)要求,采用平皿倾注法(1∶10,1∶20,1∶50,1∶100)和常规培养基体积直接接种法对午时茶颗粒进行微生物计数方法和控制菌检查方法适用性试验,通过计算3批次的试验菌回收比值筛选需氧菌总数计数、霉菌和酵母菌总数计数方法.当采用平皿倾注法(1∶10)时,各试验菌回收比值均在0.5~2.0范围内.控制菌阳性对照组生长良好,经革兰氏染色显微镜检查和生化鉴定试验,符合试验菌形态学和生化特性.研究建立的方法准确可行,重现性好,可用于午时茶颗粒的微生物限度检查.

高效液相色谱法测定益肾排石颗粒中黄芩苷含量

目的建立益肾排石颗粒中黄芩苷含量的HPLC测定方法,为益肾排石颗粒的质量控制提供科学、可靠依据。方法采用高效液相色谱法,岛津ODS-2C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为0.2%磷酸水(A)-甲醇(B)梯度洗脱,流速1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长280 nm,进样量均为10μL。结果该方法黄芩苷峰面积和浓度之间线性关系良好,r=1.0000;精密度、稳定性均符合要求;平均加样回收率为103.29%,RSD为2.38%;三批样品中黄芩苷的平均含量为6.12 mg/g,RSD值为1.71%。结论本研究方法重复性好,准确度高,可用于复方益肾排石颗粒中黄芩苷的含量测定。

土培和水培条件下两种党参有效成分含量的比较

采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定了室内土培和水培条件下渭党和纹党中紫丁香苷、党参炔苷和苍术内酯Ⅲ3种活性成分的含量,以期比较室内不同栽养方式对2种党参有效成分积累水平的影响.色谱流动相采用乙腈(A)-0.3%磷酸水溶液(B),体积流量为1 mL·min^(-1),检测波长为220 nm,柱温为30℃.结果表明,3种受测成分在各自质量浓度范围内线性关系良好(R 2>0.9998),土培纹党中紫丁香苷、苍术内酯Ⅲ含量较高,分别为0.025,0.020 mg·g^(-1);水培渭党中党参炔苷含量较高,为3.944 mg·g^(-1).实验重复性和稳定性良好,精密度和准确性可靠.2种栽养条件下,纹党和渭党中3种活性成分含量差异显著,研究结果可为党参栽培方式的选择和优良品种的筛选提供数据参考.

HPLC法测定安普胶囊中红景天苷的含量

目的建立在安普胶囊中以红景天苷为指标性成分的含量的测定方法。方法选用甲醇-水(15∶85)为流动相,流速为1.0mL·min^(-1),检测波长为275nm,柱温为30℃。结果确定了安普胶囊的含量测定方法,在色谱条件下红景天苷回归方程为y=33.998x+2.9436(R2=0.9998),表明红景天苷在0.5~5mg·mL^(-1)浓度范围内线性关系良好。结论该方法简便、快捷,重现性好,能够满足实际质量控制的要求,可以用于安普胶囊中红景天苷含量的测定。

基于多组分定量联合主成分分析正交偏最小二乘法-判别分析及熵权优劣解距离法的抗菌消炎胶囊质量差异性评价

目的建立主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)及熵权优劣解距离法(EW-TOPSIS)评价抗菌消炎胶囊的多组分质量差异。方法采用高效液相色谱法(HPLC)同时测定15批抗菌消炎胶囊中獐牙菜苦苷、獐牙菜苷、绿原酸、3,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、知母皂苷BⅡ、知母皂苷AⅢ、原百部碱、对叶百部碱、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的含量,借助PCA、OPLS-DA及EW-TOPSIS模型对15批消炎胶囊样品进行质量差异分析,筛选出导致差异的特征成分,并进行质量排序。结果12种成分在各自范围内呈现良好的线性关系(r>0.999),平均加样回收率(n=9)96.90%~100.23%(RSD<2.0%)。化学计量学筛选出2个主成分,方差贡献率累计达95.172%;OPLS-DA发掘出黄芩苷、绿原酸、知母皂苷BⅡ和对叶百部碱对抗菌消炎胶囊质量有显著影响;EW-TOPSIS分析结果显示Ci值0.0827~0.8495,15批样品质量差异较大。结论所建立的方法可用于抗菌消炎胶囊质量的综合评价。

HPLC法同时测定五味消渴颗粒中5种成分研究

目的建立高效液相色谱法(HPLC)以同时测定五味消渴颗粒中的芦丁、甘草苷、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、甘草酸铵的成分。方法五味消渴颗粒的甲醇提取液采用Waters SunFire TM C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5µm);以乙腈-0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长为260 nm、370 nm;流速1.0 mL/min;柱温30℃。结果5种成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.9996),平均加样回收率为100.44%~103.50%,相对标准偏差(RSD)为0.92%~3.99%。结论建立的测定方法简便可靠、重现性好,可为五味消渴颗粒的质量评价提供参考。

热毒宁吸入粉雾剂的制备与质量标准研究

目的:建立热毒宁吸入粉雾剂的质量标准。方法:通过实验对热毒宁吸入粉雾剂进行制备工艺优化,采用高效液相色谱法(HPLC)测定热毒宁吸入粉雾剂中绿原酸、栀子苷和青蒿素的含量。运用激光粒度仪测定热毒宁吸入粉雾剂的粉末粒径分布,结合药典和相关法规的要求,制定热毒宁吸入粉雾剂的质量标准。结果:15 g金银花和12 g青蒿在3倍体积的水中提取6 h,可以获得最佳的挥发油提取量,在6倍水体积,pH=2.5的条件下,提取240 min可以获得最优的绿原酸和浸膏得率。在乙醇浓度为70%,提取时间180 min, 6倍加液条件下,获得最佳的栀子醇提物得率。在温度80℃、风速600 L/h,进药量3 mL/min的条件下进行喷雾干燥,发现乙醇含量为60%时为最优条件,其粒径分布在1~5μm的体积百分数为67.6%,且得粉率为71.2%。喷雾微粉在25℃条件下储存1个月和3个月,药物分别降解0.25%和2.13%,水分分别增加0.02%和0.05%,且在避光和正常光照条件下无明显变化。热毒宁喷吸入雾剂中绿原酸含量不低于5.0%、青蒿素含量不低于3.2%、栀子苷含量不低于6.8%。热毒宁喷吸入雾剂中总菌落数低于1 000 cfu/g,真菌和酵母低于100 cfu/g,未检出大肠杆菌。结论:该优化后工艺可靠,含量测定的精密度、准确性、重复性均符合方法学要求,可用于热毒宁吸入粉雾剂的生产和质量控制。

高效液相色谱法同时测定清热祛瘀液中丹皮酚、木香烃内酯、去氢木香烃内酯的含量

目的建立同时测定清热祛瘀液中丹皮酚、木香烃内酯和去氢木香烃内酯的反相高效液相色谱法。方法采用CAPCELL PAK C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水(70:30),流速1.0 ml/min,检测波长:215 nm,柱温为30℃,进样量为10μl。结果丹皮酚在浓度范围0.7541~60.3291μg/ml(r=0.9996)、木香烃内酯在浓度范围1.1563~92.5074μg/ml(r=0.9999)、去氢木香烃内酯在浓度范围1.3818~110.5445μg/ml(r=0.9998),线性良好,三种物质检出限(LOD)为0.01~0.04μg/ml、定量限(LOQ)为0.03~0.13μg/ml;三种物质平均回收率为97.0%~103.5%,回收率RSD为1.3%~1.8%(n=6)。结论该方法操作简便,重复性好,准确度高,可用于清热祛瘀液的含量测定及质量控制。

心脉通胶囊质量标准研究

目的:统一并提高心脉通胶囊的质量标准。方法:采用薄层色谱鉴别法(TLC)检验决明子和槐米;采用高效液相色谱法(HPLC)测定阿魏酸、葛根素的含量。结果:TLC法斑点清晰,分离度好,专属性强。阿魏酸、葛根素在各自范围内线性关系良好(r≥0.999),阿魏酸平均回收率为100.3%,RSD=2.0%(n=6),葛根素平均回收率为99.0%,RSD=0.4%(n=6)。结论:本实验建立的质量标准科学、全面、方法可行,可用于心脉通胶囊的质量控制。