黄芪甲苷抑制Fas/FasL信号通路减轻创伤性脑损伤大鼠神经功能缺损和神经元凋亡

目的探究黄芪甲苷通过Fas/FasL信号通路对创伤性脑损伤(TBI)大鼠神经功能缺损和神经元凋亡的影响。方法将大鼠随机分为5组:假手术组、模型组、黄芪甲苷组(20 mg/kg)、Fas沉默组[4µg Fas小干扰RNA(siRNA)慢病毒载体]、黄芪甲苷+Fas沉默组(20 mg/kg黄芪甲苷+4µg Fas siRNA慢病毒载体),每组10只。除假手术组外,其余各组大鼠制作TBI模型。各组按照对应剂量进行给药干预,每日1次,持续7 d。水迷宫实验检测大鼠神经功能缺损;荧光定量PCR法检测脑组织Fas、FasL mRNA表达;苏木精-伊红、β-微管蛋白Ⅲ(Tuj1)免疫荧光、TUNEL染色分别观察脑组织病理变化、神经元活性及神经元凋亡;Western blot法检测脑组织中Fas/FasL通路、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠脑组织细胞间隙增加、变性明显,第1~5天大鼠逃避潜伏期,神经元凋亡率,Caspase-3、Bax蛋白,Fas、FasL mRNA和蛋白水平升高,穿越平台次数、Tuj1阳性细胞数目、Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05)。与模型组比较,黄芪甲苷组、Fas沉默组大鼠脑组织细胞间隙缩小,变性减轻,第1~5天大鼠逃避潜伏期,神经元凋亡率,Caspase-3、Bax蛋白,Fas、FasL mRNA和蛋白水平降低,穿越平台次数、Tuj1阳性细胞数目、Bcl-2蛋白水平升高(P<0.05)。黄芪甲苷组和Fas沉默组大鼠脑组织病理变化和上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。与黄芪甲苷组和Fas沉默组比较,黄芪甲苷+Fas沉默组大鼠脑组织病理损伤进一步降低,神经元凋亡率,Caspase-3、Bax蛋白,Fas、FasL mRNA和蛋白水平降低,Tuj1阳性细胞数目、Bcl-2蛋白水平升高(P<0.05)。结论黄芪甲苷通过抑制Fas/FasL信号通路介导的凋亡途径减轻TBI大鼠神经功能缺损和神经元凋亡。

HPLC-“内标”多控法测定四逆散中芍药苷、柚皮苷、橙皮苷、甘草酸和新橙皮苷

目的以四逆散为研究载体,建立"内标"多控法中药复方质量评价模式,并对该评价模式进行方法学考察。方法选取芍药苷作为四逆散中各成分的参照"内标",在不同的波长下测定各成分相对于内标成分的校正因子,利用校正因子和芍药苷对四逆散中柚皮苷、橙皮苷、甘草酸和新橙皮苷进行测定。结果芍药苷0.2812-1.6870μg(r=0.9996)、柚皮苷0.5700-3.4200μg(r=0.9994)、橙皮苷0.0502-0.3012μg(r=0.9999)、新橙皮苷0.523-3.1380μg(r=0.9999)、甘草酸铵0.3310-1.9860μg(r=0.9998)与峰面积呈良好线性关系。结论建立四逆散中柚皮苷、橙皮苷、甘草酸和新橙皮苷相对于芍药苷的校正因子。比较外标法与"内标"多控法测定的结果,表明"内标"多控法对中药复方多成分质量控制是可行的、实用的。

何首乌醋酸乙酯提取部位与二苯乙烯苷的调血脂作用

目的研究何首乌醋酸乙酯提取部位(EAFF-PM)与有效成分二苯乙烯苷的调血脂作用。方法观察EAEF-PM和二苯乙烯苷对正常小鼠血脂及肝脏指数的影响;小鼠ipTriton致急性高脂血症模型,观察EAEF-PM和二苯乙烯苷对模型小鼠血脂水平的影响;以大鼠食饵性高脂血症为模型,给予高脂饲料的同时给予EAEF-PM和二苯乙烯苷,连续28d,测定血脂、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)水平和超氧化物歧化酶(SOD)活性,肝组织中总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)水平以及肝脏指数。结果对正常小鼠,二苯乙烯苷和EAEF-PM均有升高血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),降低血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的作用。EAEF-PM和二苯乙烯苷对ipTriton致高脂血症小鼠的血清TC、TG和LDL-C均有降低作用,对HDL-C均有升高作用。EAEF-PM60mg/kg明显降低大鼠食饵性高脂血症模型的肝脏指数;EAEF-PM30、60mg/kg明显降低大鼠食饵性高脂血症模型的血清TC、TG、LDL-C、MDA水平和TC/HDL-C值,明显升高血清HDL-C和NO水平以及SOD活性,二苯乙烯苷对各项指标的作用强度略EAEF-PM,但无显著性差异。结论何首乌中EAEF-PM及二苯乙烯苷均具有调血脂、抗氧化,保护血管内皮的功能,二苯乙烯苷为发挥药效作用的主要物质,提示可用于预防高脂血症。

板蓝根体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型作用

目的探讨板蓝根5个化学部位体外抗单纯疱疹病毒型(HSV-Ⅰ)的活性及作用机制。方法利用Hep-2细胞体外培养系统,通过观察细胞病变效应(CPE)、噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性,测定板蓝根不同化学部位抑制HSV-Ⅰ对Hep-2细胞感染的作用;以治疗指数(TI)为评价指标,比较各部位抗病毒活性强弱。结果板蓝根各部位均有抑制HSV-Ⅰ生物合成作用,其中部位活性最强,TI为8.2;部位对HSV-Ⅰ有直接灭活作用;各部位均不能阻止HSV-Ⅰ侵入细胞。结论板蓝根在体外主要通过抑制生物合成而发挥抗HSV-Ⅰ作用。

补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血后血管内皮生长因子及其受体Flk1的影响

目的探讨补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血后血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(Fetal liver kinase1,Flk1)的影响。方法大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组、补阳还五汤组,大脑中动脉线栓法复制局灶性脑缺血模型,采用免疫组织化学法和酶联免疫法检测各组动物脑内VEGF、Flk1的表达和蛋白水平,同时评价动物神经功能。结果在正常大鼠脑内有少量VEGF和Flk1阳性细胞,脑缺血后VEGF和Flk1阳性细胞增加;与模型组比较,尼莫地平、补阳还五汤均能改善模型大鼠的神经功能缺失症状,增强VEGF和Flk1的表达,提高VEGF蛋白水平(P<0.05);于7、14d补阳还五汤作用强于尼莫地平(P<0.05)。结论补阳还五汤增强大鼠局灶性脑缺血后VEGF及Flk1的表达和提高VEGF蛋白水平,是其抗脑缺血的可能作用机制之一。

高速逆流色谱法分离纯化银杏叶中白果内酯和银杏内酯A、B、C

目的从银杏叶中分离纯化白果内酯和银杏内酯A、B、C。方法银杏叶提取液经醋酸乙酯萃取、D-101大孔吸附树脂柱和Al2O3柱纯化后得到总内酯提取物,提取物再经两次高速逆流色谱分离制备4种内酯单体。结果25%乙醇热提取、醋酸乙酯萃取、D-101柱、pH4.0的Al2O3柱对总内酯的提纯最终使总内酯质量分数达到44.98%。经高速逆流色谱制备得到的白果内酯和银杏内酯A、B、C最高质量分数分别为98.3%、98.9%、98.8%、98.4%。结论本法简便快速、回收率高。

异硫氰酸苯酯衍生化-HPLC法测定龟甲中胶原蛋白

目的 采用异硫氰酸苯酯衍生化法分析龟甲中胶原蛋白。方法 龟甲中胶原蛋白经酸水解后分解为含有羟脯氨酸的氨基酸混合物，经异硫氰酸苯酯衍生化后，以0．1mol／L醋酸钠溶液-乙腈（94：6，pH6．5）与乙腈-水（80：20）为二元流动相，经C18色谱柱分离，254nm处测定羟脯氨酸。通过测定样品中羟脯氨酸的量来计算样品中胶原蛋白的量。结果 羟脯氨酸在0．02～0．20mg／mL时与峰面积呈良好的线性关系，回收率为102．0％。结论 建立的龟甲中胶原蛋白的HPLC分析方法分离效果好、准确、快速、干扰少。

不同产地管花肉苁蓉中有效成分的定量分析

目的建立管花肉苁蓉药材中松果菊苷、毛蕊花糖苷和半乳糖醇的HPLC测定方法。方法采用Agilent ZORBAX SB C18色谱柱,甲醇-0.1%甲酸梯度洗脱,体积流量为1.0mL/min,在检测波长330nm、柱温为35℃的条件下对松果菊苷和毛蕊花糖苷的量进行测定;采用Prevail Carbohydrate ES聚合凝胶柱色谱柱,以乙腈-水(77∶23)为流动相,体积流量为0.7mL/min,以ELSD为检测器,在柱温为25℃的条件下对半乳糖醇进行测定。结果松果菊苷的平均回收率为100.29%,RSD为1.32%;毛蕊花糖苷的平均回收率为102.10%,RSD为1.14%;半乳糖醇的平均回收率为99.42%,RSD为2.83%。结论本方法对管花肉苁蓉质量标准的制定和栽培基地的选择具有很好的参考价值。

冰片对大鼠下丘脑单胺类神经递质的影响

目的观察天然冰片对大鼠下丘脑单胺类神经递质NE、E、5-HT、DA含量的影响,同时进行其时效和量效关系的观察,初步探讨冰片的作用靶点和作用机理。方法将168只Wistar大鼠随机分组,分别灌服生理盐水、1%CMC-Na,以及高、中、低剂量的冰片,每天灌胃2次,在0、45min、24h、72h、120h不同时相,用高效液相-电化学法检测大鼠下丘脑单胺类神经递质NE、E、5-HT、DA含量。结果灌服冰片45min后,冰片中、高剂量组对下丘脑NE含量有显著降低作用(P<0.05);对下丘脑E的含量,中、高剂量组和CMC-Na组相比有明显的降低作用(P<0.05);连续灌胃后,不同时相冰片各组下丘脑NE、E含量和CMC-Na组相比,继续呈现不同程度的下降作用,但对下丘脑5-HT无显著影响;在连续灌胃5d后,对DA含量有显著降低作用(P<0.05)。对大脑皮层乙酰胆碱含量无显著影响,对单胺氧化酶含量有升高的趋势,但除在24h时相,冰片中、高剂量组差异有显著性意义外(P<0.05),其余时相无显著差异。结论冰片在各个时相均有降低下丘脑NE、E含量的作用,而且随着剂量的递增,对下丘脑中的NE、E含量有逐渐降低的趋势,表现出一定的量效关系。推测芳香开窍中药冰片的药理作用方式可能通过调节中枢神经组织中单胺类神经递质含量达到稳态平衡有关。

川续断对Alzheimer病模型大鼠顶叶皮质内淀粉样蛋白沉积的作用

目的 研究川续断和 Vit E对 Alzheimer(AD)模型大鼠学习记忆力及顶叶皮质内淀粉样蛋白沉积的影响。方法 用行为学、免疫细胞化学结合图像定量分析手段 ,观察研究川续断和 Vit E在不同时间段对 AD模型大鼠的作用。结果 行为学测试表明各时间段各组间均有显著性差异 (P<0 .0 5或 P<0 .0 1 ) ;AP- L I神经元主要分布在顶叶皮质的第 、 、 层 ,在脑血管壁上也见有 β- AP沉积 ;图像分析提示 ,川续断和 Vit E处理 AD大鼠后 ,顶叶皮质内淀粉样蛋白样免疫反应 (AP- LI)神经元的截面积和光密度都有减少和降低 ,与对照组间有显著性差异 (P<0 .0 5或 P<0 .0 1 ) ,同时随处理时间的延长 ,这种变化更加明显。结论 川续断可能具有与 Vit E相似的抗 AD作用 ,其机制可能是通过抑制和清除 β-

基于HPLC指纹图谱的茵栀黄注射液质量一致性和稳定性研究

目的建立茵栀黄注射液HPLC指纹图谱,以考察其一致性和稳定性,提高其质量控制水平。方法采用高效液相色谱法,针对23批(包括不同厂家、不同批号、不同加速条件)茵栀黄注射液建立HPLC指纹图谱;利用相似度评价软件对指纹图谱进行相似度分析,并以相似度、共有峰相对峰面积为指标,进行样品聚类分析。结果不同厂家的样品各自聚为一类,表明茵栀黄注射液各批次间产品质量具有稳定性;各厂家产品逐次聚为一类,表明各厂家产品具有差异性和相对一致性;同一批次不同稳定性加速试验样品与正常批次差异明显,表明指纹图谱检测具有灵敏性。结论建立的HPLC指纹图谱可用于茵栀黄注射液质量控制,对保证产品质量的一致性和稳定性具有重要价值。

白芨超微粉对大鼠实验性胃溃疡的影响

目的通过大鼠胃溃疡实验比较白芨普通粉(80、200目)和超微粉的药效学区别及白芨经超微粉碎后可降低的用药剂量。方法采用大鼠无水乙醇和醋酸致胃黏膜损伤型胃溃疡模型,测定溃疡面积,计算溃疡抑制率;取溃疡部组织切片,做HE染色,从病理学角度进一步观察病理情况。结果白芨粉可明显降低大鼠的溃疡面积,且超微粉疗效优于普通粉。结论超微粉碎后有助于提高白芨的药效,减少用药剂量,有利于剂型现代化。

川芎当归单煎共煎液中有效成分含量的变化

目的 比较川芎当归单煎共煎液中有效成分川芎嗪和阿魏酸含量的变化，初步探索二味中药配伍的变化规律。方法 采用RP—HPLC法。Waters symmetry C18色谱柱（4．6mm×150mm，5μm），枉温25℃；梯度洗脱，流动相A（1％冰醋酸），B相为甲醇；流速1mL·min^-1，检测波长298nm处检测。结果 川芎嗪回归方程Y=58.401ρ＋3.9318，r=0.9997，在0．25—25mg·L^-1范围内相关性良好，平均加样回收率91.00％，RSD为2.7％；阿魏酸回归方程Y=76．976ρ-12.375，r=0.9999，在0.35～35mg·L^-1范围内相关性良好，平均加样回收率98．17％，RSD为1.3％。结论 川芎当归共煎液中川芎嗪和阿魏酸含量比各单煎液中含量要高。本法简便，灵敏准确，可用于测定川芎嗪和阿魏酸的含量。

星点设计-效应面法优化川西獐牙菜提取工艺

目的星点设计-效应面法优化川西獐牙菜的提取工艺。方法以乙醇体积分数、提取时间、溶媒比为自变量,龙胆苦苷收率和浸膏得率为因变量,通过对自变量各水平的多元线性回归及二项式拟合,用效应面法选取较佳工艺,并进行预测分析。结果确定最优提取工艺为86%乙醇12.4倍量回流提取3次,每次63 min。结论星点设计-效应面法优选的川西獐牙菜提取工艺,方法简便,精度更高。

附子与不同药味药材配伍后乌头碱类生物碱的电喷雾质谱研究

目的通过研究不同药味药材与附子的配伍机制,揭示酸、甘、辛、苦味中药对附子化学成分的影响规律。方法利用电喷雾质谱和内标法,分别对生附子,生附子加五味子、黄芪、独活、黄连共煎液和药渣中乌头碱类生物碱进行考察。结果附子与五味子合用,双酯型和脂型生物碱的量增加,附子与黄芪、独活配伍双酯型生物碱的量下降,附子与黄连配伍脂型生物碱和生物碱的总量均降低,但双酯型生物碱变化无规律。结论附子与五味子合用毒性增加,附子与黄芪、独活毒性降低。

三七皂苷Rg_1对大鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用及机制探讨

目的探讨三七皂苷R g1对局灶性脑缺血-再灌注损伤大鼠大脑皮质中脑源性神经营养因子(BDNF)阳性蛋白的水平和阳性神经元数目是否具有上调作用。方法选取成年雄性SD大鼠60只,随机分为脑缺血-再灌注模型组、三七皂苷R g1高、中、低剂量(200、100、50 m g/kg)组和阳性对照(尼莫地平,1 m g/kg)组,采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血-再灌注模型,各组ig给药并分别于给药后1、3、7 d随机取4只大鼠,以灌注法取脑组织,冰冻法切片,免疫组织化学ABC法染色,用高清晰度彩色病理图文报告分析系统测量、分析各组大鼠大脑皮质中BDNF阳性蛋白的水平和阳性神经元数目的变化,并观察大鼠脑缺血-再灌注后的神经功能缺失症状。结果与模型组相比,三七皂苷R g1高、中、低剂量均能明显改善脑缺血-再灌注的神经功能缺失症状,并能上调大鼠脑缺血-再灌注损伤的大脑皮质中BDNF阳性蛋白的水平和阳性神经元数量(P<0.05);各剂量的作用强于或相当于阳性对照。结论三七皂苷R g1能上调BDNF阳性蛋白的表达,通过BDNF对脑缺血-再灌注神经元损伤所起的保护作用,从而发挥其对脑缺血的治疗作用。

青藤碱衍生物的合成及其抗炎镇痛活性

目的 为定向设计合成高效低毒的新一代青藤碱类药物提供线索。方法 以青藤碱为先导物 ,对C环进行结构改造。结果 共合成 7个衍生物 ,进行了抗炎镇痛活性的筛选 ,结果表明 ,化合物 2和 5具有较好的抗炎镇痛作用。结论 C环结构修饰值得进一步研究。

RP-HPLC法测定山茱萸生品和酒制品中没食子酸、5-羟甲基糠醛、莫诺苷和马钱素

目的建立用RP-HPLC法同时测定山茱萸生品和酒制品中没食子酸、5-羟甲基糠醛、莫诺苷和马钱素的方法,同时进行比较。方法分别用水煎煮和甲醇超声两种方法提取山茱萸生、制品,用RP-HPLC法测定4种成分并进行比较。结果甲醇超声提取液中没食子酸、5-羟甲基糠醛的量分别上升了250%、1 200%,莫诺苷、马钱素的量分别下降了27.7%、9.9%;水煎提取液中没食子酸、5-羟甲基糠醛的量分别上升了222%、250%,莫诺苷、马钱素的量分别下降了24.5%、11.7%。结论该方法可用于同时测定山茱萸生品和酒制品中没食子酸、5-羟甲基糠醛、莫诺苷和马钱素的量;山茱萸经酒蒸制后,4种有效成分的变化很大。

葡萄籽提取物原花青素诱导乳腺癌MCF-7细胞脱落凋亡

目的 检测葡萄籽提取物原花青素诱导乳腺癌 MCF-7细胞脱落凋亡的作用。方法 采用 DNA ladder检测及软琼脂集落形成试验方法 ,观察乳腺癌 MCF-7细胞对脱落凋亡的敏感性以及原花青素诱导其脱落凋亡的作用。结果 MCF-7细胞具有抗脱落凋亡的特性 ,而 0 .1mmol/L 原花青素即可引起悬浮培养的 MCF-7细胞凋亡。表现为细胞染色质 DNA断裂及软琼脂集落形成受阻。结论 原花青素可诱导乳腺癌 MCF-7细胞脱落凋亡。

二苯乙烯苷对局灶性脑缺血大鼠脑组织细胞凋亡的影响

目的观察何首乌中提取的二苯乙烯苷对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠模型脑组织细胞凋亡及其凋亡调节因子的影响,阐明二苯乙烯苷抗缺血性脑损伤的作用机制。方法采用插线法阻断大脑中动脉,制备局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠模型。用流式细胞术PI单染法检测脑组织细胞凋亡百分率,用流式细胞术间接荧光法检测细胞凋亡调节因子Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果二苯乙烯苷应用于缺血再灌注损伤大鼠可明显降低脑组织细胞凋亡百分率,升高脑组织Bcl-2蛋白表达,减少Bax蛋白表达,提升Bcl-2/Bax比值。结论二苯乙烯苷具有抑制大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后脑组织细胞凋亡的作用,其作用机制可能与升高抑制凋亡的Bcl-2蛋白表达,抑制诱导凋亡的Bax蛋白表达,降低二者比值有关。