中华大蟾蜍甾醇-4α-羧酸酯-3-脱氢酶基因的克隆、表达与生物信息学分析

目的为获得中华大蟾蜍甾醇-4α-羧酸酯-3-脱氢酶(NSDHL)以便于研究其功能,本文建立了该重组蛋白原核表达方法。方法以中华大蟾蜍耳后腺总RNA为模板,采用RT-PCR技术克隆中华大蟾蜍NSDHL基因(Bbg-NSDHL),对Bbg-NSDHL基因进行生物信息学分析,并以大肠埃希菌为宿主菌,采用pCOLD-TF表达载体,构建Bbg-NSDHL原核表达系统,优化诱导表达条件。结果Bbg-NSDHL cDNA全长1521 bp,开放阅读框长1038 bp,编码345个氨基酸,所表达蛋白分子量为38.6 kD,理论等电点为8.70,分子式为C_(1756)H_(2729)N_(455)O_(495)S_(14)。Bbg-NSDHL具有核苷二磷酸糖差向异构酶结构域和短链脱氢酶/还原酶超家族结构域,在270-292处存在1个明显的跨膜区。Bbg-NSDHL单体由5个α-螺旋和9个β-折叠组成。系统进化分析表明,Bbg-NSDHL与两栖动物的NSDHL聚为一类,与哺乳动物遗传距离较远。Rosetta菌株为Bbg-NSDHL重组蛋白表达适合宿主,最佳诱导条件为15℃条件下,细菌生长至OD_(600)值为1.0时,加入0.1 mmol/L的IPTG诱导24 h。去除Bbg-NSDHL跨膜区截短表达可显著提升Bbg-NSDHL重组蛋白表达量。结论本研究首次获得了中华大蟾蜍NSDHL cDNA全长序列,并建立了Bbg-NSDHL原核表达系统,为进一步研究该基因在中华大蟾蜍蟾毒配基类成分生物合成中的作用奠定了基础。

UPLC-MS/MS同时测定使君子药材中9个成分的含量

目的:建立超高效液相色谱串联三重四级杆质谱法(UPLC-MS/MS)同时测定使君子药材中9个成分(葫芦巴碱、香草酸、阿魏酸、丁香酸、儿茶素、鞣花酸、苹果酸、没食子酸和没食子酸甲酯)的含量。方法:采用Welch Xtimate C 18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm),以0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱,流速0.25 mL·min-1,柱温45℃。质谱采用电喷雾离子源(ESI),多反应监测模式。检测34批次不同产地(福建、四川、广西、广东)使君子中9种成分的含量,并结合化学计量学分析筛选出使君子的质控标志物。结果:在所设定的色谱、质谱条件下,8 min内完成使君子中9个成分的定量分析。9个成分分别在考察的质量浓度范围内与峰响应值呈良好的线性关系,平均加样回收率均大于95%,RSD均小于4%。34批次不同产地使君子的含量经热图聚类,按照地域福建、四川、广西、广东分别独立聚类,主成分分析筛选出主要贡献成分为胡芦巴碱、鞣花酸和苹果酸。结论:首次建立UPLC-MS/MS同时测定使君子中9个成分的含量,分析方法快捷准确、灵敏度高,为使君子药材质量控制提供参考。建议胡芦巴碱、鞣花酸和苹果酸3个成分可作为使君子的质控标志物。

钩藤总碱与钩藤碱神经阻滞作用实验研究的初步报告

目的与方法：采用中草药钩藤提取物钩藤总碱和钩藤碱，观察其对动物神经的阻滞作用。结果：钩藤总碱有明显的神经传导阻滞、浸润麻醉和椎管内麻醉作用，而钩藤碱则无。钩藤总碱神经阻滞作用强、起效快、维持时间９０±１５ｍｉｎ。结论：钩藤总碱含有更有效的神经阻滞作用成份，有待于进一步筛选。

人血高密度脂蛋白对内毒素血症急性肝衰竭小鼠的防护作用

目的:研究高密度脂蛋白(HDL)抗内毒素,保护肝细胞作用.方法:用超离心方法分离纯化血浆脂蛋白,建立内毒素血症急性肝衰竭小鼠模型,观察HDL处理后各组肝衰竭小鼠的存活率及主要脏器的组织学改变,RT-PCR检测小鼠肝细胞TNFα和IL-6 mRNA表达水平.结果:HDL对内毒素及半乳糖胺所致小鼠肝衰竭有明显保护作用,治疗组存活率明显高于对照组(85%vs15%);内毒素血症肝衰竭小鼠肝脏发生了广泛的变性坏死,而HDL治疗组小鼠肝细胞仅发生了轻微变性坏死,单纯无脂蛋白血浆(LFF)则无此保护作用;内毒素小鼠肝组织TNFα和IL-6 mRNA表达水平增高,HDL治疗组TNFα和IL-6 mRNA表达水平接近正常.结论:HDL具有抗内毒素血症保护小鼠肝细胞,预防肝衰竭的作用.其作用机制可能是通过降低肝衰竭小鼠TNFα和IL-6的过度表达而发挥作用的.

略论中国古代的麻醉药

《尚书·说命》曾说:“若药弗眩眩,厥疾弗廖。”后来《孟子》又引用了这句话。说明早在先秦时期,人们已经发现了药物的毒副作用和麻醉作用,认为某些药物吃了令人头晕眼花或者昏昏欲睡是正常的,不如此反而疗效不佳。 乌头具有毒副作用和麻醉作用,是后世常用的中药麻醉药。早在马王堆汉墓帛书《五十二病方》中,就载有“毒乌喙者”方七首,都是用来解乌头毒的方剂。西汉宣帝时,宫廷女医淳子衍已发现与乌头同类的附子能麻醉人和毒杀人。

五种活血化淤药物对家兔血液流变学的影响

将家兔分为正常组、服药组(分服丹参、红花、降香、泽兰、郁金5种中药),观察服药后血液流变学指标的变化。结果丹参、红花、郁金可明显降低全血表现粘度、红细胞压积和红细胞聚集指数;红花则能明显提高红细胞变形能力。它们对抑制血小板聚集也有一定作用。因此认为,各种活血化淤药物都能不同程度或不同方式地改善血液流变性质。

蟾酥制剂快速无痛去髓的临床疗效观察

目的 评价用蟾酥制剂进行去髓术的临床疗效。方法 选取需行牙髓治疗的患牙243例，封蟾酥制剂2h．4h后去髓，术后10个月复察，评价效果。结果用蟾酥制剂去髓的有效率为93．7％，与患者性别、患牙的临床诊断、穿髓点大小、封药时间等因素无明显关系(P＞O．05)，但受颌别、牙位和洞型等因素影响(P＜O．05)。结论用蟾酥制剂做牙髓去除术临床疗效较理想。

六味地黄煎剂对高血脂、耐缺氧及麻醉动物血压的影响

六味地黄煎剂(1:1)po高、低剂量(20,29ml/kg)均能明显延长小鼠常压耐缺氧时间;对预先给以异丙肾上腺素的小鼠,则高剂量有明显效果而低剂量无效。po 六味地黄煎剂10ml/kg(Bid)能明显降低实验性高血脂大鼠的总胆固醇(TC)和肝中脂肪含量,还能明显升高血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及HDL-C/TC比值,对肝、脾、肾上腺重量则无明显影响。六味地黄煎剂2,10ml/kg十二指肠给药能明显降低麻醉大鼠血压,对心电和心率无明显影响。25ml/kg十二指肠给药对麻醉大鼠心肌收缩力无明显影响。

蒲黄镇痛作用的实验研究

目的观察蒲黄镇痛作用的效果。方法 6 0只小白鼠随机分为 3组 ,以 10 0 %蒲黄溶液进行灌胃 ,用扭体法和热板法测其镇痛作用的抑制率。统计学上采用 t检验。结果蒲黄对热及化学剌激致痛都有非常明显的镇痛作用。热板法显示其镇痛用与吗啡相当但较持久 ,化学剌激法则显示其镇痛作用比吗啡稍弱。结论蒲黄有显著的镇痛作用。

人参芦皂甙治疗冠心病的临床研究(附294例报告)

本文报告294例中老年冠心病患者口服人参芦皂甙片的临床观察结果:人参芦皂甙对冠心病心绞痛症状有缓解作用.能提高窦性心律,对伴发的多种心律失常有一定疗效,以房性早博与室性早博为著。对心功能有增强作用,并能提高男性睾(?)(T)水平,降低雌二醇(E_2)及E_2/T比值.对高密度脂蛋白——胆固醇水平有提高作用。对冠心病心气虚证型的症候改善明显。经临床应用未发现毒副作用和不良反应。

中药表面麻醉剂在耳鼻咽喉手术中的应用

本文报告 60例中药粘麻在耳鼻咽喉手术中的应用 ,对麻醉的效果、药理进行了综合分析 ,可推广运用。

高效液相色谱法测定消炎止咳浸膏中黄芩甙的含量研究

将消炎止咳浸膏用60%乙醇超声提取,制成供试品,用高效液相色谱法测定其黄芩甙的含量。平均回收率为98.32%,RSD=2.43%。三批样品中,黄芩甙含量分别为0.481%、0.524%、0.537%。

蟾酥制剂与两种常用牙髓失活剂的细胞毒性比较

目的 比较蟾酥制剂与多聚甲醛制剂和三氧化二砷制剂 2种临床常用牙髓失活剂的细胞毒性。方法 实验用细胞为L92 9细胞 ,采用四唑盐比色法观测。结果 多聚甲醛制剂的细胞毒性最强 ,其次为蟾酥制剂 ,三氧化二砷制剂较弱。

蟾酥制剂的临床疗效和作用特点

在现有蟾酥制剂配方中，以蟾酥加局麻药(以可卡因为主)配方无痛切髓的疗效较高，而且所需封药时间短，其中蟾酥70％乙醇提取物的疗效高于未提取过的商品蟾酥，而配伍其它中药成分对提高制剂疗效似无明显的作用；在蟾酥加局麻药配方中，起主要作用的为蟾酥，而局麻药可降低封药后疼痛反应；去髓术，干髓术一次法的近、远期疗效与局麻状态下切髓的疗效相近。

西伯利亚白刺L-半乳糖-1-磷酸磷酸酶基因克隆与序列分析

目的克隆西伯利亚白刺Nitraria sibirica维生素C合成过程中L-半乳糖-1-磷酸磷酸酶(L-galactose-1-phosphate phosphatase,GPP)编码基因。方法利用生物信息学方法对西伯利亚白刺三代转录组数据进行分析,共鉴定出2个GPP基因,并从西伯利亚白刺中成功克隆得到2条NsGPP基因序列,进一步利用生物信息学方法对其理化性质、蛋白结构、保守序列以及系统进化等进行分析,并结合RNA-seq数据分析其在盐胁迫下的表达模式,利用qRT-PCR实验检测其在不同组织中的表达水平。结果从西伯利亚白刺中成功鉴定克隆出2个NsGPP基因,2个NsGPP基因所编码蛋白均含有保守的FBPase/IMPase/glpX-like(FIG)结构域,且与其他植物GPP蛋白具有较高的相似性。利用多个物种的GPP蛋白序列构建系统进化树,结果显示西伯利亚白刺与灌木或半木质化草本植物亲缘关系更近。Motif分析发现NsGPP蛋白与拟南芥等GPP蛋白较为相似,但也存在差异,并且2个NsGPP蛋白之间也存在差异。此外,NsGPP1与NsGPP2的蛋白三维结构之间也存在微小差别。RNA-seq分析表明,不同浓度NaCl处理下,NsGPP1的表达逐步升高的趋势,而NsGPP2的表达量则较低,且在盐胁迫后其表达水平逐渐降低。qRT-PCR实验结果显示,白刺GPP基因的表达存在组织表达特异性,且在同一组织中NsGPP1的表达水平显著高于NsGPP2。结论从西伯利亚白刺中成功克隆到2个NsGPP基因,其编码蛋白均含有保守的FIG结构域,且与拟南芥等草本植物的GPP蛋白更为相似。NsGPP基因在不同组织中表达水平具有显著差异,其中NsGPP1可能参与西伯利亚白刺维生素C生物合成并参与白刺抵抗盐胁迫。为进一步解析白刺维生素C生物合成以及耐盐分子机制提供了理论依据。

喜马拉雅紫茉莉野生居群叶和花表型变异研究

目的对喜马拉雅紫茉莉不同居群进行形态学研究,揭示其表型变异特征,为其种质收集、利用和保护、品种选育等提供依据,并探讨其种下分类问题。方法采用野外调查取样,对28个野生居群叶、花的18个性状进行测量和统计分析。结果18个性状的变异系数在12.06%~51.01%,花梗长变异最大,雄蕊数目变异最小。各性状在不同居群间、不同省区间差异均极显著;主成分分析显示,叶长宽比、叶形、花梗长、叶长、总苞裂片宽、叶柄长、花梗及总苞腺毛黏性7个性状是造成居群间表型差异的主要因素;相关性分析表明,喜马拉雅紫茉莉多个性状之间存在显著的相关性。经度和海拔对性状的影响较大;聚类结果显示,28个居群可分为3个类群,聚类结果与各居群的地域分布和地理距离并无关联。结论喜马拉雅紫茉莉在叶和花的形态上具有丰富的表型变异,种质资源的保存要依据变异规律进行广泛的采样。目前用于喜马拉雅紫茉莉种下等级分类鉴定的性状并不可靠。

金匮肾气丸及其加味对中老年人甲襞微循环及载脂蛋白的影响

我们于1989年10～12月应用金匮肾气丸及其加味对60例老年人甲襞微循环及载脂蛋白的影响进行临床观察,报告如下。材料与方法 (一) 观察对象共60例,均为离退休干部;其中男性35例,女性25例;