H2O2及PTEN在肽类生长因子活化Akt激酶中的作用

目的研究H2O2、PTEN与肽类生长因子(胰岛素等)在调控Akt激酶活性中的作用及其相互关系。方法Western Blot检测对照小鼠胚胎成纤维细胞PTEN+/+ MEFs和PTEN基因敲除小鼠胚胎成纤维细胞PTEN-/-MEFs中PTEN蛋白表达的差异。用胰岛素及NADPH氧化酶(NOX)抑制剂——DPI作用PTEN+/+M EFs和PTEN-/-MEFs细胞,Western Blot检测Akt激酶蛋白磷酸化水平的变化。将细胞接种于96孔板,加入胰岛素及DPI,96h后MTT法检测细胞增殖的变化。结果在对照PTEN+/+ MEFs细胞内,加入胰岛素(100mU/ml)15min后Akt激酶磷酸化水平明显上调,加入10μmol/LDPI处理30min后,Akt激酶磷酸化恢复到基础水平,在PTEN-/-MEFs细胞中未观察到上述变化。经胰岛素作用后PTEN+/+ MEFs细胞增殖加快(P<0.05),加入DPI作用后可减缓细胞的增殖(P<0.05),胰岛素和DPI同时作用对其增殖无明显影响(P>0.05);各种处理因素对PTEN-/-MEFs细胞增殖均无明显影响(P均>0.05)。结论肽类生长因子可以通过磷酸化激活Akt激酶,这一过程依赖于H2O2的产生和抑癌基因PTEN的存在。