成骨细胞特异性识别多肽对人成骨细胞增殖和矿化影响的实验研究

目的观察成骨细胞特异性识别多肽对人颅骨成骨细胞(HCO)增殖和矿化作用的影响。方法体外常规培养人颅骨成骨细胞,分为5个实验组(10^(-4)、10^(-5)、10^(-6)、10^(-7)、10^(-8)mol/L)以及空白对照组,MTT法检测细胞的增殖,紫外分光光度法检测细胞碱性磷酸酶(ALP)的表达,茜素红染色及半定量分析检测细胞矿化程度,RT-QPCR法检测细胞骨钙素(OCN)mRNA的表达。结果此浓度范围内的特异性多肽对成骨细胞增殖有促进作用(P<0.05),最大效应浓度是10^(-5)mol/L;能增加ALP活性(P<0.05),最大效应浓度是10^(-4)mol/L。通过茜素红染色观察和半定量分析,14、21 d实验组钙盐沉积量高于对照组,半定量分析结果显示浓度10^(-5)mol/L时,吸光度(OD)值最高,但差异无统计学意义;RT-QPCR法显示14、21 d实验组OCN mRNA表达量均高于对照组(P<0.05)。结论 10^(-8)~10^(-4)mol/L浓度范围的成骨细胞特异性识别多肽能够促进人颅骨成骨细胞的增殖和矿化,且在10^(-5)mol/L浓度促进成骨细胞增殖及矿化相关蛋白表达最为显著。

不同方法对未成熟树突状细胞体外诱生的研究

目的筛选最佳体外诱生大鼠未成熟树突状细胞(imDC)的方法。方法用低剂量(0.2ng/mL)粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(recombination rat GM-CSF,rrGM-CSF)体外诱导imDC;用常规剂量(5ng/mL)的GM-CSF加大鼠白细胞介素-4(recombinationratIL-4,rrIL-4)(5ng/L)体外诱导imDC;rrGM-CSF+rrIL-4再加大鼠白细胞介素-10(recombination rat IL-10,rrIL-10)(10ng/mL)体外诱导imDC;第13天收获细胞,观察形态;流式细胞仪检测表面抗原;混合淋巴细胞培养(MLR)检测DC刺激同种异体T淋巴细胞的能力,培养上清白细胞介素-12(IL-12)的浓度和细胞增殖情况等方面进行考察,对比筛选。结果低剂量GM-CSF组和IL-10组DC与GM-CSF+IL-4组DC相比,符合imDC的特点;GM-CSF+IL-4组DC表现成熟DC的特点,但细胞增殖情况低剂量GM-CSF组明显低于GM-CSF+IL-4+IL-10组,两组相比差别具有显著性。结论GM-CSF+IL-4+IL-10组是最佳诱导imDC的方法。

国产缓降解聚酰胺可吸收螺钉在关节部位新鲜骨端骨折中的应用

目的:观察缓降解聚酰胺可吸收螺钉在关节部位新鲜骨折内固定中的临床应用效果。方法:选择2001-03/2005-12中山大学附属第二医院骨科病区住院的各种关节部位新鲜骨折患者46例,男36例,女10例;年龄1663岁。其中肱骨内髁骨折7例,肱骨外髁骨折6例,肱骨大结节骨折5例,桡骨远端骨折7例,股骨外髁撕裂骨折3例,胫骨内、外侧平台撕裂骨折5例,内踝骨折5例,外踝骨折4例,后踝骨折4例。骨折后1～6d,平均3d。①所采用的缓降解聚酰胺可吸收螺钉(深圳昌华生物医学工程有限公司提供),为全螺纹或半螺纹拉力螺钉,直径为2.7mm、3.5mm和4.5mm,长度20～70mm。②手术方法同传统AO内固定术。术后结合早期肢体功能康复与锻炼。③治疗效果以末次随访患者肢体局部功能恢复情况评估,分为优、良、差。疼痛采用目测类比评分法(VAS)评定,0分为无痛,10分为剧痛。结果:除1例失访外,45例获随访,随访期3～21个月,其中随访3个月1例,6个月5例,9个月11例,12个月13例,15个月8例,18个月5例,21个月2例,平均随访12月。依据末次随访结果评估治疗效果。①患者肢体局部功能恢复情况:优42例,骨折均达解剖复位,关节功能基本正常,活动时目测类比评分为0分,伤口一期愈合;良3例,骨折功能复位,关节功能基本正常,仅有轻度功能障碍,运动过多时有轻度疼痛(目测类比评分为一二分)。②不良事件及副反应:术后病例复查无螺钉变形、断裂而引发骨折再移位或骨折不愈合情况,也无感染、积液和特异性炎症反应现象。结论:国产缓降解聚酰胺可吸收螺钉治疗新鲜关节部位骨端骨折患者术后肢体功能恢复状态较好,且无明显不良反应。

车载运动状态下便携式连续性血液净化机的操作方法及技巧

目的探讨在救护车转运伤员行驶途中实施连续性肾脏替代治疗（continousrenalreplacementtreatment，cRRT）时，便携式连续性血液净化机（mobilecontinousbloodpurificationmachine，MCBPM）的操作方法和技巧。方法选择健康犬在行驶的救护车上进行CRRT，观察试验犬生命体征，妥善摆放置换液及血液管路，体验CRRT及机器操作的最佳方法。结果机器采用四角气压吸盘固定牢靠；在救护车狭小空间中，护士以“蹲姿倚靠”或“坐位操作”为实施CRRT的最佳方式；前臂支撑抽取或配制药液，严禁注射器覆帽动作，防针刺伤；悬挂牢靠或低置袋装液体，防止滚落。结论车载动物试验证明：护士经过特殊培训，完全能够在救护车行驶过程中，准确的操作便携式连续性血液净化机，不间断地实施紧急血液净化治疗。

一种水相反应制备胰岛素衍生物的方法

目的建立一种简易的制备去B30及去B23-30肽胰岛素的方法。方法在转肽方法基础上,改变胰蛋白酶反应条件,在水相反应系统中,使得小C肽猪胰岛素原生成去B30及去B23-30肽胰岛素。阴离子交换层析进行产物分离,并结合HPLC纯度分析及质谱鉴定。结果胰蛋白酶催化猪胰岛素原生成去B30及去B23-30肽胰岛素。离子交换层析可以对两者进行基线分离。结论成功建立了一种制备胰岛素衍生物的方法,并对产物进行有效纯化。

缓释核壳结构利用基因传递用于骨缺损的研究

目的利用巯基烷基化壳聚糖(TACS)与质粒形成纳米粒子,在其外围包裹羟丁基壳聚糖(HBC)用以增加纳米粒子稳定性,并赋予其缓释的功能。方法利用骨形态发生蛋白4(BMP4)-绿色荧光蛋白(EGFP)融合基因的负电性与TACS的正电性相互作用形成核结构(TACS-pBMP4-EGFP),再与HBC相互作用形成核壳结构(TACS/HBC-pBMP4-EGFP)。利用动态光散射,透射电镜,凝胶电泳,体外转染,Western blot及动物成骨实验验证TACS、HBC对pBMP4-EGFP的包裹及缓释。结果随着氮磷比增加,TACS-pBMP4-EGFP直径逐渐减小当氮磷比大于8时,TACS-pBMP4-EGFP直径小于200 nm,包裹HBC后,TACS/HBC-pBMP4-EGFP粒径小幅度增加且电势趋于中性,易于被细胞转染表达出BMP4。流式细胞仪和Western blot结果均显示随着转染时间增加,核壳结构转染率逐渐增高兔桡骨缺损修复过程中,X线片可见携载核壳结构的缺损处骨密度明显增高,皮质骨连续性较好,呈骨性愈合。结论

兔主动脉内皮细胞制备方法的优化

目的：为构建骨组织工程血管化提供优质种子细胞。方法采用血管内膜外翻和胶原酶消化法分离培养兔主动脉内皮细胞并传代；采用倒置显微镜、透射电镜观察和免疫荧光法鉴定。结果培养的血管内皮细胞在第3-5天为对数生长期，倒置显微镜下可见内皮细胞呈紧密排列、短梭多角形的“鹅卵石”形态；透射电镜可见内皮细胞特征性Weible-Palade小体；经免疫荧光法鉴定证明该细胞CD31抗原阳性。结论采用血管内膜外翻等方法制备的兔血管内皮细胞的成活率高，且纯度高、数量多、具有良好的生物学活性。该法可为骨组织工程血管化的研究提供种子细胞。