不同转染方式用于modRNA转染人脂肪干细胞的初步研究

目的筛选更优的转染方式,探讨其用于modRNA转染人脂肪干细胞(Human adipose-derived stem cell,hADSC)并表达特定蛋白的可行性。方法分别采用2种电转染方式Optimization4及Optimization6和脂质体转染试剂RNAiMAX,将modGFP转染到hADSC中去。应用流式细胞分析仪和荧光显微镜分析,比较不同转染方式的转染效率和蛋白表达情况;通过细胞死活染色,评估转染后24 h细胞的存活情况;将更优的电转方式与RNAiMAX用于modVEGFA转染hADSC,收集其培养24 h的上清用于人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,hUVECs)成管和transwell迁移实验,并与基质胶混合后注射于裸鼠皮下,通过大体观、HE染色及免疫荧光染色,分析其在体内促进血管再生的情况。结果Optimization6电转转染hADSC的效率为87.75%±1.52%,高于Optimization4转染组(80.85%±1.48%)和RNAiMAX转染组(81.80%±1.08%),且荧光显微镜观察及流式分析均表明电转染方式的蛋白表达优于RNAiMAX脂质体转染。3种转染方式对细胞的毒性均较小,无统计学差异。与RNAiMAX相比,Optimization6电转能更高效地介导modVEGFA转染hADSC,能更好地促进体外hUVECs成管和迁移,皮下血管再生的效果也更佳。结论相比于RNAiMAX和Optimization4电转染,Optimization6电转方式转染hADSC的效率更高,蛋白表达高效,且能在体内外快速高效促进血管再生。

内源性骨膜引导骨再生过程中信号通路富集及FZD家族动态表达研究

目的研究内源性骨膜引导骨再生过程中信号通路富集及卷曲蛋白(FZD)家族动态表达。方法建立猪闭合肋骨膜引导下的骨再生模型,选择7个时间点采集骨膜和再生骨组织进行基因测序,分析差异基因筛选以及相关信号通路富集的情况。选取与骨再生过程中密切相关的FZD分子家族,检测并分析FZD各成员的动态表达变化及其表达相关性。结果实验组相较于对照组,共有7个基因在建模后1个月内的不同时间点持续存在差异表达。差异基因富集显示,早期主要存在免疫反应,后实现组织发展和重塑。FZD家族各成员在不同时间点的表达存在波动,大多数成员的表达高峰在术后3 d,而实验组的倍数改变高峰在术后1个月最为明显,FZD1和FZD2最高,且二者具有较高的相关性。结论本研究筛选出的骨膜引导性骨再生过程中的差异基因以及相关信号通路,为进一步的分子机制研究提供了理论依据,而FZD分子家族动态表达变化在该过程中发挥着重要作用,其具体参与的生物机制尚需进一步研究验证。

生物膜与牙周炎研究现状与热点的可视化分析

目的采用文献计量学方法分析2013—2023年生物膜与牙周炎相关的研究现状和热点。方法在Web of Science(Wos)数据库中检索生物膜与牙周炎相关文献,并运用VOSviewer和CiteSpace等可视化软件来分析国家/地区、作者、机构、期刊及关键词。结果共纳入1821篇文献,结果显示文献发文量逐年上升。发文量排名前3位的国家是美国、巴西和中国;排名前3位的机构是圣保罗大学、哈佛大学和福赛斯研究所;发文量最高的作者是Feres Magda;在发文量前10位的期刊中,Journal of Periodontology的发文量最多(87篇),其次是Plos One(69篇)和Clinical Oral Investigations(51篇)。氧化应激、标志物、辅助治疗及药物缓释是最主要的研究热点;前沿主要集中于群体感应、光动力疗法、活性氧、铜纳米颗粒及光学相干层析成像。结论生物膜和牙周炎的研究在逐年增长,未来的研究方向可重点关注氧化应激、辅助治疗、群体感应及光动力疗法。

耐替加环素鲍曼不动杆菌中外排泵AdeB与Bfs过表达生物膜形成的关系

目的研究生物内被膜相关基因和向外排水泵基因之间在对耐替加环素鲍曼不动杆菌抗性上的相互作用。方法根据替加环素药敏敏感试验,将72株临床分离的鲍曼不动杆菌分为耐替加环素鲍曼不动杆菌组和替加环素敏感鲍曼不动杆菌组。采用结晶紫染色法观察两株菌的生物被膜形成情况。用RT-PCR方法分析生物被膜相关基因和外排泵基因。结果耐替加环素组生物被膜形成率为82.2%,替加环素敏感组生物被膜形成率为14.8%。转录水平上,耐药组生物被膜合成基因BfmS阳性率明显高于敏感组(P<0.01)。替加环素的最小抑菌浓度生物被膜组明显高于生物被膜缺失组(P<0.01)。外排泵AdeB基因在生物被膜形成组阳性率为95.2%,生物被膜缺失组为38.7%。结论BfS基因和AdeB外排泵基因的共表达可能与鲍曼不动杆菌生物被膜的形成有关。AdeB与BfS转录水平的提高促进了生物膜的形成,从而提高了鲍曼不动杆菌对替加环素的抗性。

载绿色荧光蛋白基因壳聚糖纳米粒载体的制备和转染的研究

目的优化试验条件,制备合适的壳聚糖纳米粒,并连接上质粒,研究壳聚糖纳米粒对DNA的结合力。方法以离子交联法制备壳聚糖纳米粒,并送激光微粒度仪及扫描电子显微镜检测,了解粒径的分布与态;通过静电吸附作用连接上增强型绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-C1 (报告基因);经琼脂糖凝胶电泳分析体与DNA结合能力,并通过紫外分光光度计检测其载药量和包埋率。结果微粒度分析仪及电镜检测证实聚糖纳米粒呈均匀分散的球形颗粒,最小粒径为50 nm,平均直径为95 nm。琼脂糖凝胶电泳的结果显示壳聚纳米粒能有效地结合增强型绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-C1,紫外分光光度计检测不同比例结合(纳米:质粒)pEGFP-C1质粒的壳聚糖纳米粒的包埋率分别为:100%(50:10),100%(50:20),92%(50:75)和5%(50:100)。结论制备出粒径较小、均匀的壳聚糖纳米粒,并且壳聚糖纳米粒能有效地连接上质粒。

膝关节在体稳定性评价系统的建立

目的利用2D/3D图像配准技术建立膝关节在体稳定性评价系统。方法采集健康成年志愿者膝关节的CT影像,并采集志愿者保持某一姿势时互成直角的正侧位X线平片,先进行膝关节CT图像的三维重建,并在软件中建立虚拟X线摄像再现2张互成直角的X线平片,采用2D/3D图像配准还原摄X线平片时膝关节的位置,计算2种位置之间的相对位移及角度变化。结果利用2D/3D图像配准方法对膝关节的三维模型和二维影像之间进行了配准,计算出2种位置之间的相对位移及角度变化,与CT扫描时的位置相比,摄X线平片时左股骨下段后伸19.21°,外翻1.73°。结论利用2D/3D图像配准技术可实现膝关节的在体稳定性评价,但其配准效率及精度尚需进一步研究。

载药传递体的制备及体外分析方法的建立

目的以苯磺酸氨氯地平为模型药,制备传递体并对其体外分析方法进行确立。方法采用薄膜-超声法制备苯磺酸氨氯地平传递体(AM-T),用激光粒度分析仪分析其大小与分布,采用紫外分光光度法(UV)和反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定药物的回收率及含量等。结果苯磺酸氨氯地平传递体的平均粒径在60nm左右。UV法和HPLC法所得苯磺酸氨氯地平检测浓度线性范围均为1～50μg/mL;平均回收率分别为(100.12±0.54)%和(99.88±0.57)%;含量分别为(101.40±1.75)%和(100.60±0.86)%。结论该传递体的制备方法可行,建立的体外分析方法稳定、可靠。

质粒pBV220-PTD-tCNTF转化BL21菌株感受态细胞的高效制备方法

目的比较几种常用大肠杆菌感受态制备方法,探讨影响pBV220-PTD-tCNTF转化大肠杆菌感受态细胞的因素并得出最优水平组合。方法采用4种制备感受态细胞的方法即CaCl2法,CaCl2-甘油法,TSSG法和INOUE法,比较4种方法制备的感受态细胞即时和-80℃保存30 d对质粒PBV220-PTD-tCNTF的转化效率;L8(27)正交设计研究Mg2+、INOUE重悬液、PEG、甘油和DMSO对pBV220-PTD-tCNTF转化大肠杆菌感受态的影响;对得出的最佳水平组合进行验证并对转化好的细胞进行测序验证。结果 CaCl2法,CaCl2-甘油法,TSSG法,INOUE法4种方法的转化率分别为:(5.43±0.72)×106、(7.45±0.65)×106、(9.71±1.81)×106、(8.52±1.22)×107;-80℃保存30 d的转化效率为:(6.20±0.31)×104、(6.57±0.97)×106、(9.76±1.31)×106、(1.63±0.019)×106;正交结果 Mg2+(A)、IN-OUE重悬液(B)、PEG(C)、甘油(D)和DMSO(E)各因素的P值分别为0.0357、0.0154、0.0677、0.2503和0.1749;最佳水平组合实施的转化率为(29.63±4.95)×107并经测序确定转入质粒的正确性。结论分析出各因素对pBV220-PTD-tCNTF转化感受态细胞转化率的影响程度,得出了其最佳水平组合A1B1C1D2E1,并得到了(29.63±4.95)×107的转化效率。

血管网分形研究进展

论述了血管网中分形问题的研究意义、内容、进展及其相应的基本理论与实验研究方法,重点评述了分形理论在血管网结构、血管生成和血管病理中的研究进展,以及血管网结构对肿瘤血管内物质输运的影响,分析了分形理论在血管网研究中的难点,并归纳了该领域内若干可供探索的途径和新方向。

病人监测的呼吸测量方法及其有效性的评价

介绍了基于阻抗法的呼吸测量方法、评价指标及评价方法,包含实验室和临床数据库的评价,为提升呼吸监测的有效性评价提供一个参考。

FNS肢体运动疲劳特性的实验研究

研究了功能电刺激作用下的人体神经肌肉的疲劳特性和生理反应 ,初步确定了适合于人体神经肌肉电刺激脉冲信号的的基本特性。以正常男性成人的曲肘运动 (右手 )为研究对象 ,将表面电极置于右手肱二头肌肌腹处 ,在肘关节 (右手 )处安装一个微型角位移传感器 ,通过多功能神经肌肉电刺激肢体运动测控仪器 ,获取曲肘运动时的肘关节角位移变化曲线。结果表明 ,在任何一种刺激模式作用下 ,曲肘运动均呈现严重非线性时变特性 ;缓慢连续变化的刺激脉冲能有效地缓解肱二头肌的疲劳程度 ;最佳的功能电刺激脉冲频率为 30 Hz～ 5 0

六神曲对实验动物肠道运动功能的影响

目的:观察不同产地和不同炮制方式的六神曲对实验动物肠运动功能的作用。方法:取用生、炒香、炒焦,三个状态的山东产六神曲和自制的未经发酵的六神曲为实验材料,采用离体方法研究实验材料对家兔回肠平滑肌收缩活动的影响;采用在体方法研究实验材料对小鼠肠内容物推进的影响。结果:离体实验结果表明,三种六神曲都能引起大鼠肠平滑肌的收缩作用增强。小鼠肠内容物推进实验结果表明,与模型组比较,三种六神曲都对小鼠肠内容物推进具有提高作用,未经发酵的六神曲作用不明显。结论:六神曲可增强家兔离体回肠平滑肌的收缩和小鼠小肠推进作用。六神曲中促进肠道运动的物质产生于发酵过程中,炮制和煎煮的过程对其影响不大。

茯苓配方颗粒质量标准分析

探讨茯苓配方颗粒的质量控制及检验方法。方法 采用薄层色谱方法对茯苓配方颗粒及饮片进行对比,采用HPLC法测定茯苓配方颗粒中腺苷、鸟苷和尿苷总量。结果 供试品溶液与对照药材蒲层色谱荧光斑点位置相同;鸟苷进样量在2.0087~30.1299μg、尿苷进样量在2.1852~32.7783μg范围内与峰面积呈现良好线性关系;鸟苷的平均回收率为101.6%(RSD=1.43,n=6),尿苷的平均回收率为97.02%(RSD=0.93,n=6)。结论 该方法灵敏度高,耐用性好,可用于产业化中茯苓配方颗粒的质量控制。

藿香正气水质量分析

评价市场上流通藿香正气水药品质量现状及存在的问题。方法:按照2020年版《中国药典》中相关规定,对10个厂家10批次药品性状、鉴别、检查、含量测定等项目进行检查,并统计实验结果。结果 不同厂家生产的藿香正气水在性状、鉴别、检查的各项(装量、乙醇量、甲醇量)高效液相色谱法进行含量测定以及微生物限度等项目的检测结果均符合规定,但甲醇量、厚朴酚与和厚朴酚总量、橙皮苷含量这三项的检测结果分析,差异较大。结论 建议进一步把好原料入库关,改进生产工艺,进行标准化、自动化生产。

混合糖电解质在肠外营养应用中的稳定性评价

目的探索混合糖电解质作为能量补充剂配制肠外全营养混合液的稳定性及合理性。方法模拟临床应用处方并按照“全合一”混合原则，实验组营养液采用混合糖电解质为能量补充剂配制全营养混合液，对照组营养液使用10％葡萄糖注射液为能量补充剂配制全营养混合液，两组分别采用酸度计、微粒分析仪、渗透压仪、高倍显微镜等在室温下测定及观察配制营养液的0～72h的pH值、不溶性微粒数、微量元素、渗透压、脂肪乳滴的变化，比较两者之间的差异并进行稳定性分析评价。结果实验组pH值波动于6．07～633，渗透压波动于2050～2100kPa，pH值明显低于对照组（相差约0．4），实验组营养液渗透压明显高于对照组营养液（相差约250kPa），两者pH、渗透压经时变化曲线相似，72h内基本稳定；实验组营养液中Na^＋、K^＋、P、Mg^2＋、Ca^2＋、Cl^-的含量明显高于对照组，特别是二价离子Mg“、Ca“的含量相差近3倍；对照组营养液脂肪乳颗粒稳定性较好，12h内脂肪乳颗粒未发生明显聚集，实验组营养液脂肪乳颗粒稳定性较差，不溶性微粒数4h后超出药典规定，脂肪乳颗粒发生聚集且随时间延长颗粒明显增多增大。结论混合糖电解质注射液过高的离子浓度特别是二价离子易导致脂肪乳颗粒聚集，影响营养液的稳定性；不建议选用混合糖电解质作为全营养混合液唯一糖类补充剂使用，如需使用应和脂肪乳分别输注或在4h内输注完毕。

肠球菌表面蛋白基因与生物膜形成关系的探讨

目的探讨肠球菌表面蛋白(esp)基因与生物膜形成之间的关系,以利临床采取预防措施和选药治疗。方法应用PCR方法检测145株临床分离肠球菌中esp的携带率,并用斑点杂交确证。用96孔聚苯乙烯板进行生物膜形成试验。结果96株粪肠球菌和49株屎肠球菌中esp的检出率分别为34.4%和36.7%;生物膜形成率分别为93.8%和91.8%;esp阳性的肠球菌生物膜形成率为100%。结论肠球菌普遍具有形成生物膜的能力,但生物膜的形成并不仅限于携带esp的肠球菌。

两种心室─血管优化耦合模型的比较

本文以输出平均振荡势功率最小作为左心室与体动脉优化耦合的判据 ,对主动脉根部压力施加不同约束条件建立左心室 体动脉的两种不同优化耦合模型 ,分别确定主动脉根部的压力和流量 ,并讨论心血管参数对动脉中压力和流量的影响 ,所得结果与生理事实相当吻合。文章最后通过比较这两种模型在偏离优化耦合状态下平均振荡势功率变化情况 ,发现本文中的模型 2看来比模型 1具有更高的合理性。

张善举教授治疗功能性消化不良临证经验

张善举教授从事中医内科临床工作近30年,对消化病的诊治有其独特的见解,选用参苓白术散加味治疗功能性消化不良,疗效甚佳。

大鼠背根神经节分离神经元的延时整流的钾离子单通道

运用膜片钳技术对急性分离的大鼠背根神经节神经元细胞上的电压依赖性钾离子通道进行了研究。在细胞贴附式记录模式下 ,去极化可以激活一个电导为 2 0pS的钾离子单通道电流 ,分析了其单通道的特性 ,提出了其动力学的模型。