地黄低聚糖诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的实验研究

目的观察地黄低聚糖(RGOs)体外诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)定向分化为心肌样细胞的作用。方法采用贴壁培养法分离大鼠MSCs,反复传代及纯化后,取第8代MSCs进行分组诱导:RGOs组(RGOs终浓度100μg/ml)、5-氮胞苷(5-Aza)组(5-Aza终浓度10μmol/L)、RGOs+5-Aza组和空白对照组。诱导后继续培养4周。采用Access化学发光法和干化学法分别检测诱导后MSCs内心肌特异性肌钙蛋白I(cTnI)和心肌酶CK、CK-MB的表达,免疫荧光法和Western blotting法检测诱导后MSCs内cTnI、缝隙连接蛋白43(Cx43)的表达。结果诱导后各组MSCs均表达cTnI、CK和CK-MB,RGOs+5-Aza组中CK、CK-MB的表达水平较RGOs组、5-Aza组增高,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光结果显示:在未诱导MSCs的空白对照组中未发现cTnI、Cx43阳性细胞,各诱导组MSCs均可见cTnI阳性细胞和Cx43阳性细胞,且RGOs+5-Aza组cTnI、Cx43荧光强度较RGOs组、5-Aza组增高。Westernblotting结果显示空白对照组无阳性条带出现,各诱导组均出现cTnI和Cx43阳性条带,且RGOs+5-Aza组cTnI和Cx43表达量较RGOs组、5-Aza组增高。结论RGOs可以在体外诱导大鼠MSCs分化为心肌样细胞,与5-Aza联合应用后其诱导MSCs内心肌特异性物质表达的作用较单药更强。

成骨细胞特异性识别多肽对人成骨细胞黏附和迁移作用的实验研究

目的探讨成骨细胞特异性识别多肽对人颅骨成骨细胞黏附和迁移作用的影响。方法常规培养人颅骨成骨细胞,分为10^(-4)、10^(-5)、10^(-6)、10^(-7)、10^(-8)mol/L 5个实验组及对照组,应用黏附实验、划痕实验及Transwell迁移小室实验检测不同浓度的成骨细胞特异性识别多肽对人成骨细胞黏附、迁移作用的影响。结果成骨细胞特异性识别多肽在10^(-8)~10^(-4)mol/L浓度范围内能够促进人颅骨成骨细胞迁移与黏附,其中10^(-5)mol/L浓度促进作用最为显著。结论成骨细胞特异性识别多肽能够促进成骨细胞黏附及迁移。

C-FOS在断肢后大鼠中枢神经系统内表达的研究

目的:通过观察离断大鼠前肢损伤后C-FOS在中枢神经系统内的表达来研究断肢后大鼠神经通路发生的变化。方法:取Wistar大鼠56只,建立大鼠断肢模型,随机分为7组,每组8只。疼痛刺激后2小时将大鼠处死,取丘脑、脑干作连续切片后,采用HE染色,光镜下观察进行定位。用C-FOS免疫组化染色,对照图谱在显微镜下观察C-FOS于不同刺激情况下在脊神经节、背侧丘脑腹后外侧核、背侧丘脑腹后内侧核、三叉神经脊束核、三叉神经节中的阳性细胞数。结果:对照组C-FOS在脊神经节、背侧丘脑腹后外侧核、背侧丘脑腹后内侧核、三叉神经脊束核、三叉神经节中,表达极低;I组、Ⅲ组C-FOS在脊神经节、背侧丘脑腹后外侧核、背侧丘脑腹后内侧核表达较高;Ⅱ组、Ⅳ组C-FOS在背侧丘脑腹后外侧核、背侧丘脑腹后内侧核、三叉神经脊束核、三叉神经节表达较高;Ⅴ组C-FOS在脊神经节、背侧丘脑腹后外侧核表达较高;Ⅵ组C-FOS在背侧丘脑腹后内侧核、三叉神经脊束核、三叉神经节表达较高。结论:验证了正常大鼠在上肢端刺激和面部刺激后的痛觉传导通路;揭示断肢后,上肢痛觉传导通路和面部痛觉传导通路之间存在联系。