人关节软骨来源CD105^+/CD166^+间充质干细胞的分选及其多向分化特性的鉴定

目的建立免疫磁珠技术高效分选人关节软骨CD166+/CD105+间充质干细胞(MSCs)的方法,并鉴定其多向分化特性。方法酶消化法获取5例手术切除的膝关节软骨组织细胞,并行原代(P0代)和传代(P2、P4、P6代)培养;流式细胞仪检测其中CD166+/CD105+细胞百分比。比较免疫磁珠连续法与间断法分选P4代培养细胞中CD166+/CD105+细胞的所需时间、分选细胞活度及其百分比和收获率。对连续法分选CD166+/CD105+细胞进行成骨、成软骨、成脂肪诱导,Gomori钙钴法碱性磷酸酶(ALP)、Ⅱ型胶原免疫组化、油红O染色检测其分化特性。结果人关节软骨组织分离细胞和原代培养细胞中的CD105+/CD166+细胞百分比较低[(1.13±0.68)%、(5.16±3.59)%],传代培养细胞中的CD105+/CD166+细胞百分比随传代次数增加而明显增高[P2、P4、P6代培养细胞中CD166+/CD105+细胞百分比分别为(12.68±2.59)%、(17.81±3.80)%、(19.36±3.93)%](P<0.05),传代培养至P4代,其CD105+/CD166+细胞百分比与P6代[(19.36±3.937)%]比较差异不显著(P>0.05)。免疫磁珠连续法分选P4代培养细胞中CD105+/CD166+细胞的百分比高于间断分选法[(93.8±3.95)%vs(90.1±2.43)%,P<0.05],且分选时间显著缩短[(6.8±0.40)hvs(120.0±10.21)h,P<0.01),而细胞收获率[(62.0±7.5)%vs(68.5±7.0)%]和细胞活度[(93.8±1.48)%vs(94.6±1.14)%]差异不显著(P>0.05)。连续法分选CD166+/CD105+细胞成骨诱导后ALP染色阳性;成软骨诱导前Ⅱ型胶原弱阳性,诱导后Ⅱ型胶原阳性;成脂肪诱导后,细胞内可见脂肪滴,油红O染色阳性。结论人关节软骨P4、P6代培养细胞中的MSCs比例较高。免疫磁珠连续法能够高效分选人关节软骨MSCs,所分选的MSCs具有成骨、成软骨及成脂肪分化功能。