重庆市育龄期妇女中心肥胖与心血管疾病危险因素的关联性分析

目的使用腰围(WC)和腰围身高比(WHR)来探讨重庆市育龄期妇女中心肥胖及其与心血管疾病危险因素的关联性。方法在重庆市"一小时经济圈"内采用整群抽样的方法抽取8 769名18～59岁的在职成年妇女,以其中6 833名年龄在18～49岁正处于育龄期的妇女为研究对象。测量其身高、WC、体质量,计算其体质指数(BMI)和WHR,检测其血压、血脂、血糖等指标的水平。分析非中心肥胖组(WHR<0.5且WC<80 cm)和中心肥胖组(WHR≥0.5或WC≥80 cm)各指标间有无差异以及两组间心血管病危险因素聚集发生率有无差异,用Logistic回归分析中心肥胖与心血管疾病各危险因素间的关联性。结果在6 833名育龄期妇女中,有1 069名(15.64%)为中心肥胖。非中心肥胖组与中心肥胖组WC、收缩压、舒张压、总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、血糖水平比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。中心肥胖组危险因素聚集的发生率为39.76%,非中心肥胖组的发生率为13.78%,两组发生率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,中心肥胖的独立危险因素是居住地区、年龄、收缩压、舒张压、三酰甘油、高密度脂蛋白和血糖。结论联合使用WC和WHR能够比较有效地分析中心肥胖和各心血管疾病危险因素;中心肥胖患者心血管疾病风险较高,保持WHR和WC均在参考值范围对心血管健康是很重要的。

人参皂甙Rb1对大鼠心肌缺血再灌注后血管再生的影响

目的观察人参皂甙Rb1对大鼠缺血再灌注后血管再生和心肌VEGF蛋白表达的影响,并对其作用机制作初步探讨。方法结扎SD大鼠左冠状动脉前降支,将大鼠随机分为Rb1治疗组、单纯手术组及假手术组。手术2周,4周后分别测定有关心功能指标,TTC和伊文思兰染色测定梗死区、缺血区的面积比值,免疫组化方法检测心肌VEGF的表达量,VIII因子和SAM染色观察微血管密度和功能血管再生情况。结果人参皂甙Rb1治疗组心功能好转,心肌微血管密度和功能血管数量明显高于单纯手术组,差异有显著统计学意义(P<0.01),缺血区和梗死区的范围也明显缩小,差异有统计学意义(P<0.05),VEGF的表达量也高于单纯手术组,差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论人参皂甙Rb1有促进缺血心肌血管生成、保护缺血心肌、缩小梗死面积、改善心功能的作用。

人胚胎心肌组织发育过程中Cx43和Bcl-2蛋白表达的研究

目的观察连接蛋白43(Cx43)和Bcl-2蛋白在人胚胎心室肌组织中的表达,探讨其与心脏发育的关系。方法应用免疫组织化学法检测第2、3、4三个月胎龄段Cx43和Bcl-2蛋白在人胚胎心室肌组织中的表达。结果第2月胚龄时,人胚心室肌组织内可见单个散在分布的Bcl-2阳性细胞,随着胎龄的增加,Bcl-2阳性细胞数量逐渐增多,到第4月胎龄时,在心室肌组织内可见三五成群分布的Bcl-2阳性细胞。第2月胚龄时,Cx43蛋白呈斑点状散在分布于心室肌细胞的细胞质,随着胎龄的增加,其分布范围逐渐扩大,在心室肌细胞与心室肌细胞连接处也出现Cx43蛋白的阳性表达,到第4月胎龄时,Cx43蛋白在心室壁内逐渐形成成片弥散样分布。结论Cx43和Bcl-2蛋白参与了人胚胎早期心室肌组织细胞的生长发育。

肝泰对肝纤维化大鼠肝组织中神经递质受体作用的研究

目的研究肝泰对CCl4诱导的肝纤维化大鼠肝组织中神经递质受体的作用,探讨其抗肝纤维化的作用机制。方法将40只Wistar大鼠分为4组:正常对照组(N)10只、肝复乐胶囊对照组(G)10只、肝泰组(Z)10只及模型组(M)10只。采用光镜及电镜观察肝组织病理学改变;应用免疫组织化学法、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和West-ern-blot方法检测各组肝组织α1肾上腺素能受体(α1A-AR)、β2肾上腺素能受体(β2-AR)的表达。结果肝泰组、肝复乐胶囊对照组病理改变较模型组明显改善;免疫组织化学、RT-PCR、Western blot三种不同层次水平的研究结果均表明:肝泰组和肝复乐胶囊对照组α1A-AR及β2-AR的表达较模型组显著降低(P<0.05)。结论肝泰能通过抑制肝组织中α1A-AR及β2-AR的表达,从而调节神经递质在肝纤维化中的作用。

妊娠期接触糖皮质激素对子代大鼠心肌血清和糖皮质激素调节的蛋白激酶1表达和心脏功能的印迹效应

目的揭示妊娠期暴露于糖皮质激素(glucocorticoids,GCs)对子代大鼠心脏功能的印迹效应,探索GCs对子代心肌保护性因子的调节作用及其可能机制。方法构建妊娠后期GCs暴露大鼠模型,通过2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察子代心肌缺血再灌注损伤后的梗死程度;实时定量PCR检测心肌保护因子血清和糖皮质激素调节的蛋白激酶1(Sgk1)、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)受体2(Crhr2)、CRH家族肽urocortin(Ucn)和Ucn2等基因的表达;蛋白质印迹分析检测SGK1蛋白的表达;亚硫酸氢盐处理后测序确定Sgk1基因启动子的甲基化水平。结果妊娠期GCs暴露大鼠子代出生时和成年后体质量减轻(P<0.01),子代雄性大鼠心肌对缺血再灌注损伤的耐受性下降(P<0.01);SGK1的mRNA和蛋白在子代雄性大鼠心肌中的表达降低(P<0.01或P<0.05);Ucn和Ucn2在子代雌性大鼠心肌中的表达下降(P<0.05);Sgk1基因启动子区域存在多个CpG岛,且近端CpG岛的甲基化水平在妊娠期GCs暴露的子代雄性大鼠心肌中升高(P<0.01)。结论妊娠期GCs暴露可能通过下调心肌保护因子SGK1的表达对子代雄性大鼠心肌功能产生印迹效应,而Sgk1基因启动子区域CpG岛的高甲基化改变可能是介导GCs对Sgk1的印迹效应的重要机制。

Pak1对胚胎血管发育的作用及初步机制

目的 研究p21活化激酶1（p21-activated kinase 1，Pak1）对胚胎血管发育的影响，并初步探讨其相关作用机制。方法 以组成激活型Pak1（constitutively active Pak1，caPak1）的重组过表达质粒PCS2-caPak1为模板，用SP6 RNA聚合酶体外合成caPak1 mRNA，用显微注射法将其注入斑马鱼单细胞期胚胎，观察胚胎发育和表型变化，用透射电镜进一步确认胚胎血管的超微结构。用脂质体转染法将PCS2-caPak1转入人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell，HUVEC），用MTT法检测细胞活力，并用流式细胞术分析HUVEC凋亡情况。结果 斑马鱼胚胎发育至受精后30～36 h时，可见过表达组斑马鱼出现头部出血表型，出血比例约25%～30%，透射电镜下可见血管内皮细胞结构破坏；细胞水平过表达Pak1后，细胞变圆并出现部分脱落，MTT检测发现细胞存活减少（P〈0.01），流式细胞术分析发现内皮细胞凋亡增加（P〈0.01）。结论 过表达Pak1可能通过增加内皮细胞凋亡影响胚胎血管发育。

核心蛋白聚糖基因过表达对5/6肾切除大鼠肾间质纤维化的影响和机制

目的探讨腺相关病毒介导的核心蛋白聚糖(decorin,DCN)基因过表达对5/6肾切除大鼠肾间质纤维化的影响和机制。方法将DCN基因和绿色荧光蛋白基因(GFP)基因克隆入重组腺相关病毒(rAAV)载体中,在HEK293细胞中包装成rAAV-GFP和rAAV-DCN病毒。健康雄性wistar大鼠32只,随机分为假手术组(sham,n=8),手术组(operation,n=8),手术+rAAV-GFP病毒尾静脉注射组(GFP组),手术+rAAV-DCN基因尾静脉注射组(DCN组)。携带相应基因的病毒注射后3周行5/6肾切除术构建肾间质纤维化模型。术后第12周处死动物,肾组织切片行HE染色,天狼星红(Sirius red)染色和Masson染色。免疫组化方法检测TGFβ1和α-SMA。Western Blot检测肾组织TGFβ1、α-SMA、E-cadherin、p-smad2、smad2、samd7和p-P38 MAPK表达水平。结果DCN基因过表达显著抑制了5/6肾切除术所致血压升高和肾功能下降(P<0.05),明显减轻了5/6肾切除大鼠肾小球萎缩与代偿性肥大,肾小管扩张及管型形成。Sirius red和Masson染色表明DCN过表达明显抑制了5/6肾切除大鼠肾脏胶原沉积(P<0.05)。免疫组化结果显示DCN过表达明显减少了肾组织TGFβ1和α-SMA的表达(P<0.05)。Western blot结果显示DCN过表达明显下调了TGFβ1、α-SMA、p-smad2、p-P38 MAPK的表达,显著上调了E-cadherin and samd7的表达(P<0.05)。结论腺相关病毒介导的DCN基因过表达显著抑制5/6肾切除大鼠肾间质纤维化而保护肾功能,其机制与下调TGFβ1、α-SMA、p-smad2、p-P38 MAPK表达和上调E-cadherin和samd7表达有关。

不同部位来源脂肪干细胞促进血管化的作用比较

目的比较不同解剖部位来源脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)在促进血管化方面的作用差异。方法体外分离和培养来自人腹部和大腿的脂肪干细胞。取第3代脂肪干细胞,实验组加入血管内皮细胞诱导培养液定向诱导分化,阴性对照组不加血管内皮细胞诱导培养液进行诱导,观察细胞形态的变化,利用流式细胞仪(FCM)检测细胞表面抗原CD31的表达。利用ELISA法检测实验组脂肪干细胞培养过程中分泌血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的水平。结果实验组脂肪干细胞诱导分化后第10天,其外形开始由梭形转变为上皮样的圆形。第3周,实验组(腹部)、实验组(大腿)和阴性对照组脂肪干细胞CD31表达的百分比分别是(99.45±0.06)%、(84.87±0.03)%和(0.25±0.02)%,实验组和阴性对照组组间比较差异具有统计学意义(P<0.01),实验组组间比较差异亦具有统计学意义(P<0.05)。实验组(腹部)脂肪干细胞分泌的VEGF水平明显高于实验组(大腿),组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论与来自大腿的脂肪干细胞相比较,来自腹部的脂肪干细胞在向血管内皮细胞分化和分泌VEGF方面有更多的优势,可能更利于新生血管的再生。