IGFBP5增龄性表达促进胸腺上皮细胞线粒体自噬和凋亡

目的 探讨在胸腺上皮细胞中随年龄增长而上调表达的胰岛素样生长因子结合蛋白5(Insulin Like Growth Factor Binding Protein 5,IGFBP5)在胸腺衰退中的作用和机制。方法 使用基因差异表达分析方法从已发表人胸腺基质细胞单细胞数据集(GSE147520)中筛选出随年龄增长表达上调程度最高的基因IGFBP5;Mfuzz趋势分析筛选出与IGFBP5具有相同表达趋势的基因;富集分析注释与IGFBP5共趋势基因集;使用蛋白序列比对工具研究IGFBP5蛋白氨基酸序列的人鼠同源性;使用NIH基因数据库研究IGFBP5在人鼠器官组织中表达模式;免疫组化研究IGFBP5在不同年龄C57/BL6小鼠胸腺中的表达模式;构建IGFBP5过表达胸腺上皮细胞系;透射电镜观察IGFBP5过表达胸腺上皮细胞系中线粒体的形态变化;免疫蛋白印记(Western Blot, WB)对线粒体及全细胞组分线粒体自噬标志物微管相关蛋白1B(Microtubule Associated Protein 1 Light Chain 3 Beta, LC3B)、PTEN诱导激酶1(Pten Induced Kinase 1, PINK1)、Parkin泛素蛋白连接酶(Parkin Rbr E3 Ubiquitin Protein Ligase, Parkin)、BCL2互作蛋白3(BCL2 Interacting Protein 3, BNIP3),细胞凋亡标记物活化型胱天蛋白酶3 (Cleaved-Caspase3)表达水平进行检测;细胞双重免疫荧光对线粒体标志物与线粒体探针(MitoTracker)胞内定位进行检测;使用流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)对细胞系凋亡水平进行检测。结果 IGFBP5是人胸腺上皮细胞中随年龄增长表达上调程度最大的基因,与其具有共同表达模式的基因集显著富集在线粒体相关通路上。人与小鼠IGFBP5蛋白序列高度保守,其在人、小鼠多器官组织中表达模式相近,且IGFBP5在人、小鼠胸腺中均呈现中等表达水平;此外,IGFBP5在人和小鼠胸腺上皮中随年龄增长表达升高;在IGFBP5过表达小鼠胸腺上皮细胞系中,透射电镜结果表明线粒体自噬体增多,WB结果表明线粒体组分和细胞组分LC3B、PINK1、Parkin蛋白表达水平上调,BNIP3无明显差异;细胞双重免疫荧光结果表明LC3B、PINK1、Parkin蛋白胞质表达增多且与线粒体共定位;WB表明IGFBP5过表达鼠胸腺上皮细胞系中细胞凋亡标志物Cleaved-Caspase3水平升高;FCM表明IGFBP5过表达细胞系凋亡细胞比例增加。结论 人、小鼠胸腺上皮细胞中随年龄增长而表达升高的IGFBP5促进线粒体自噬和细胞凋亡,从而导致胸腺上皮细胞减少和胸腺功能衰退,因此,IGFBP5可成为干预胸腺衰老、重构人体免疫力的潜在靶标。

异位胸腺癌一例

病例资料患者,男,66岁。咽痛、咽部发堵感4个月,伴发热,最高体温37.5℃,多于午后出现,可自行降至正常,诊断为“咽喉炎”给予药物治疗,症状未见好转。10d前患者出现呼吸困难,稍活动即可出现,伴乏力、咳嗽、咳痰,咳白色粘痰,不易咳出,伴恶心、进食哽噎感,只能进流食。患者自发病以来,精神可,睡眠欠佳,大小便无明显异常,近4个月来体重下降10kg。既往史:既往心律失常病史2年,未规律诊治;结肠息肉结肠镜下切除术后病史2年。

足月人胎胸腺实质的肥大细胞

用阿尔新蓝-番红花红(AB-S)、长时间甲苯胺蓝(LTB)、氯醋酸酯酶3种组织化学方法和电镜观察证实,人胎胸腺实质中存在肥大细胞,并分别作了计数。结果表明,皮质中肥大细胞数目较髓质多。用AB-S染色,胞质内含阿尔新蓝阳性(蓝染)颗粒的肥大细胞数较含番红花红阳性(红染)颗粒的数目多。结合超微结构观察表明,胸腺实质中的肥大细胞颗粒特点符合胰蛋白酶阳性肥大细胞(TMC)类型。本文就其存在、数目和染色特性进行了讨论。

当归多糖拮抗致衰剂对大鼠胸腺结构与功能的保护作用

目的探讨当归多糖(ASP)拮抗致衰剂对大鼠胸腺结构与功能的保护作用及相关机制。方法 SD大鼠随机分为4组,每组10只。衰老模型组,每天1次皮下注射D-半乳糖(120mg/kg),共42d;ASP衰老模型组,每天1次注射D-半乳糖剂量与时间同衰老模型组,第15天起腹腔注射ASP(100 mg/kg),至第42天;正常对照组,每天皮下注射等量生理盐水42d;ASP对照组,注射等量生理盐水14d,第15天起腹腔注射ASP 28d(同ASP衰老模型组)。药物注射完成后第2天,取各组胸腺,测定胸腺指数,观察胸腺组织形态学,检测胸腺细胞衰老;制备各组胸腺细胞,体外培养细胞检测其增殖、细胞周期分布,测定细胞因子分泌量、细胞产生活性氧(ROS)及超氧化物歧化酶(SOD)含量。结果 D-半乳糖复制的衰老模型大鼠胸腺结构与功能损伤明显。与衰老模型组大鼠比较,ASP衰老模型组大鼠胸腺指数升高,胸腺皮质与髓质面积比例增加,胸腺细胞的增殖能力提高,处于G1期胸腺细胞比例减少,G2及S期细胞比例增加,衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)阳性胸腺细胞百分率下降,肿瘤坏死因子α(TNF-α)、粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素(IL)-2、IL-6的分泌能力明显提高,SOD活性明显提升,ROS含量下降。结论当归多糖对致衰剂D-半乳糖所致的胸腺损伤有明确的拮抗作用,其机制可能与抑制氧化损伤有关。

比较形态学数字化学习平台的建设

随着社会的进步和科学技术的飞速发展，各学科的相互渗透、相互融合逐渐增强。课程整合也成为当今教学改革的一项重要任务。浙江大学医学院自2004年起，全面实行基础医学整合课程改革，形态学实验课也由原有的解剖学、组织学与胚胎学和病理学实验课组合而成。随着教学改革的深入，医学院自2012年9月起在2011级本科生中全面实施基础医学整合实验课程新体系。为了配合基础医学整合实验课程新体系，形态学分中心建立了专业性、综合性、融合性的比较形态学数字化学习平台，实现多学科资源的集成与融合，促进学科间知识点衔接及横向联系，服务于教学，开放共享，动态更新，与课程改革同步，提高医学形态学的教学效果。

大鼠胸腺皮质酸性磷酸酶的超微结构定位

用Robinson和Karnovsky法,以CeCl_3作捕获剂,观察小鼠胸腺皮质的酸性磷酸酶超微结构定位。结果表明,该酶活性主要见于部分上皮性网状细胞和胸腺细胞的质膜,在两者接触面尤为明显。该酶活性还见于上皮性网状细胞的质膜凹陷、靠近质膜的小泡、高尔基复合体扁囊、溶酶体和部分囊泡内。巨噬细胞的溶酶体、胞质内致密颗粒和部分质膜也呈现酶活性。退化的胸腺细胞的胞质及部分质膜也显示酶活性。本文就胸腺皮质各细胞成分酸性磷酸酶的作用进行了讨论。

小鼠胸腺结构的增龄性变化

目的观察小鼠增龄过程中胸腺结构的形态学改变以及胸腺中CD3+、CD4+、CD8+细胞数目的变化。方法运用HE染色和电镜方法对1、6、12和16月龄小鼠胸腺形态进行观察;用免疫组化方法对不同月龄小鼠CD3+、CD4+、CD8+胸腺细胞进行抗体标记,观察其随增龄的变化情况。结果增龄过程中,小鼠胸腺内胸腺细胞逐渐减少,基质细胞相对增多,并发生形态学改变,主要表现为胸腺大小、胸腺重量指数逐渐减小,胸腺细胞和胸腺上皮细胞的不同程度破坏,而胸腺中巨噬细胞随鼠龄增加而增多。随着鼠龄增加,胸腺成熟T细胞总数减少,CD4+细胞变化始终不明显,CD+细胞从12个月开始逐渐减少,16个月时CD+/CD+比值已上升。结论随着鼠龄增加,小鼠胸腺结构呈退化趋势。

重症肌无力胸腺细胞凋亡与Fas基因表达的研究

目的 探讨胸腺细胞凋亡及相关基因Fas FasL在MG发病中的作用和意义。方法 采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记 (TUNEL)技术检测胸腺组织中凋亡细胞 ,免疫组织化学S P法与原位杂交组织化学检测Fas FasL及其mRNA的表达。结果 重症肌无力胸腺中细胞凋亡数与Fas、FasmRNA表达阳性率均显著低于正常胸腺。Fas阳性表达与重症肌无力胸腺组织中细胞凋亡数呈负相关。胸腺切除术后有效组的胸腺细胞凋亡数显著低于无效组。结论胸腺细胞凋亡减少及相关基因Fas表达异常可能与重症肌无力的发病有关 。

经皮穿刺胸腺介入治疗重症肌无力的应用解剖

目的 :为经皮穿刺胸腺介入治疗重症肌无力提供应用解剖基础。方法 :童尸 15具 (男 12 ,女 3 )解剖观测胸腺的形态、血供和毗邻关系以及胸骨的前突角度。结果 :胸腺左叶和右叶长、宽、厚度分别为 :60 .7、16.7、5 .5mm和 80 .3、18.6、4.9mm ,胸腺上极伸至颈部的占 93 % ( 14例 ) ,左叶上极伸至颈部的长为 2 9.5mm ;右叶长度为 2 5 .1mm。胸腺上极与甲状腺下极的关系为 :左侧两者相距平均为 2 1.5mm ;右侧相距为 2 3 .8mm。胸腺在左头臂静脉的前面长度 :左叶为 14 .4mm ,右叶为 13 .7mm。胸骨前突的角度为10 .9°。结论 :经皮穿刺胸腺时为防止伤及左头臂静脉、上腔静脉以及胸膜腔 ,在颈部可在第 3～ 4气管软骨环 (甲状腺的峡部 )的下方进针 ;在胸部 ,沿胸骨后方上翘 10°左右的角度穿入胸腺 ,距正中线左右不超过 2 0mm处进针 ,穿刺深度左侧 40mm ,右侧 5 0mm为宜。

γ线诱发的白血病小鼠胸腺细胞SHP-2 mRNA变化的研究

目的 探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP 2mRNA在γ射线体外诱发的白血病小鼠胸腺细胞中的变化情况 ,为进一步从细胞信号转导途径入手研究辐射致癌的分子机制奠定一定的基础。方法 实验分为癌变组、未癌变组及对照组 ,应用PCR SSCP、DNA测序、荧光定量PCR法分别检测各组胸腺细胞SHP 2mRNA的突变及含量变化情况。结果 ①PCR SSCP示 9/14例癌变组胸腺细胞SHP 2mRNA的第 70 0～ 10 96bp间可能发生突变 ,但DNA测序结果不支持 ;②癌变组胸腺细胞SHP 2mRNA的含量与对照组及未癌变组比无明显变化。结论 在γ射线诱发的白血病小鼠胸腺细胞中存在SHP 2的翻译异常 ,表现为翻译增强现象。

胶体金法研究胎儿胸腺上皮网状细胞的细胞学观察

为了探讨胎儿胸腺上皮网状细胞发育过程的结构特点,用胶体金免疫组化法及电镜观察60例胎龄12～42周胸腺。结果表明:不同类型的上皮网状细胞中间丝有多寡之别并含有不同类型角蛋白;中间丝多者细胞器相对减少。角蛋白阳性反应细胞体积随胎龄增长而增大,但阳性细胞出现率与胎龄关系不大。角蛋白阴性反应细胞电镜下可见丰富的内质网、线粒体及核糖体,提示该细胞主要有分泌胸腺激素功能。

人胸腺上皮细胞类型及分布的超微结构研究

对10例成人胸腺微环境作超微结构观察.结果显示,根据胸腺上皮细胞超微结构形态和分布特征,可将其分为四种类型.Ⅰ型为包膜下-血管旁上皮细胞,分布于胸腺包膜下及皮筋交界区血管周围.Ⅱ型上皮主要要布于外皮质和整个胸腺实质,部分胞浆含分泌颗粒.Ⅲ型上皮分布于髓质,胞浆有形态多样的囊泡.Ⅳ型仅存在于髓质,数量极少.提示胸腺上皮细胞是异质性的,并且在胸腺内形成不同的局部微坏境.

国人正常胸腺CT研究

国人正常胸腺ＣＴ研究王培军①葛建立②吕桃珍①左长京田建明杨继金本文对不同年龄组正常胸腺的位置、形状和边缘、大小、内部结构进行全面的研究，测定有关径线的正常值范围，旨在提高对正常胸腺ＣＴ表现的全面认识，减少误诊率。１材料和方法收集１９８５～１９９７年正...

Foxn1在小鼠胸腺增龄性萎缩中的作用

目的探讨Foxn1在小鼠胸腺增龄性萎缩中的作用。方法 SPF级C57BL/6小鼠分成老龄组(18个月)、中龄组(12个月)、中青龄组(6个月,4个月)、青龄组(1个月),每组雌雄各6只。无菌取胸腺,比较小鼠胸腺重量、胸腺指数及胸腺细胞数;应用Real-time PCR技术检测胸腺组织中Foxn1基因的表达。结果小鼠胸腺重量及胸腺细胞数随年龄增长显著减少(P<0.05,P<0.01);C57BL/6小鼠胸腺Foxn1相对表达量分别为:1月龄(0.909±0.119),6月龄(0.689±0.108),12月龄(0.240±0.063),18月龄(0.047±0.010),表现为随年龄增长显著下调(P<0.05)。结论Foxn1参与了胸腺的发育、成熟和退化萎缩各个阶段,Foxn1表达降低破坏了胸腺微环境,导致胸腺增龄性萎缩。

小鼠胸腺上皮细胞系的细胞学鉴定

本文报道小鼠胸腺上皮细胞系(MTEC_1系)的细胞学鉴定。细胞为多角形,呈上皮样排列,用抗角蛋白抗体显示细胞胞质内均含角蛋白。电镜观察可见胞质内含成束的张力细丝,相邻细胞间有桥粒结构。用抗小鼠上皮细胞单克隆抗体进行免疫组织化学染色,几乎全部MTEC_1细胞均为MTS33阳性,提示MTEC_1细胞是来源于胸腺體质的上皮样细胞。大多数MTEC_1细胞有正常小鼠染色体数(40)条。本文结果表明,MTEC_1细胞系属正常小鼠胸腺上皮细胞。

阻断p38途径对地塞米松诱导的胸腺细胞凋亡的影响

目的研究阻断p38途径对地塞米松(dexamethasone,DEX)诱导的胸腺细胞凋亡的影响。方法WesternBlott检测DEX对p38途径的阻断作用。以SB203580(SB)阻断BALB/c小鼠胸腺细胞p38途径,在3、5和7h,利用An-nexinV-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;利用DiOC6(3)/PI双染流式细胞术检测线粒体膜电势(△ψm)和细胞膜完整性变化。结果DEX显著减少了胸腺细胞p38蛋白含量;阻断p38后DEX诱导小鼠胸腺细胞晚期凋亡率显著增加(P<0.01);DEX诱导了胸腺细胞△ψm降低,同时阻断p38途径后,DiOC6(3)阴性PI阳性细胞显著增多(P<0.01)。结论阻断p38后加速了DEX介导的小鼠胸腺细胞凋亡中细胞膜完整性的破坏,该现象可能与线粒体功能有关。

用显示非特异性酯酶的半透膜技术对小鼠胸腺基质细胞的观察

成年BALB/c小鼠胸腺,新鲜组织恒冷箱切片,用半透膜技术显示非特异性酯酶。由于该技术能保存全部酶活性,故可显示各类基质细胞及其分布。上皮网状细胞、胸腺哺育细胞及交错突细胞的酶活性呈弱阳性,巨噬细胞呈强阳性。胸腺T细胞呈微弱阳性或阴性。皮质的上皮网状细胞形成海绵状支架;髓质上皮网状细胞可分为低酶活性和高酶活性细胞两种类型,后者可呈灶状分布。皮、髓质内均可见巨噬细胞,皮-髓交界区尤多,并可见与胸腺T细胞形成玫瑰花环状。同时用大鼠抗小鼠基质细胞的单克隆抗体进行了免疫组织化学观察。本文结果有助于在光镜下研究胸腺微环境的结构和功能。

重症肌无力胸腺Foxp3基因转录表达水平及其临床意义

目的探讨抑制性转录调节因子Foxp3在重症肌无力(myasthenia gravis,MG)胸腺内表达及其临床意义。方法收集本科2003年1月至2006年6月手术切除的MG胸腺组织50例,采用免疫组织化学、Western blot以及RT-PCR技术,检测Foxp3在胸腺内组织定位,蛋白及mRNA转录表达水平以及与MG胸腺病理、临床特征间关系。结果Foxp3阳性细胞主要位于胸腺内髓质及血管周围间质,少量见于皮质区;MG胸腺组织中Foxp3显著低于对照胸腺组织;其中胸腺瘤组织中仅有少量表达,与增生胸腺差异显著;Foxp3表达水平与MG临床分型负相关。结论MG胸腺Foxp3基因转录与表达异常,可能参与MG自身免疫的发生。

混合胸腺裸小鼠移植模型的建立及重建T细胞功能的体外研究

目的 建立混合胸腺移植模型 ,并在体外观察重建T细胞的功能状况。方法 首先建立混合胸腺裸小鼠左肾包膜下移植模型 ,流式细胞仪检测受体动物外周血中T细胞的重建情况 ,并利用刀豆素A(concanavalinA ,ConA)增殖实验和混合淋巴细胞培养检测其体外功能状态。结果 混合胸腺移植 3个月后 ,移植的胸腺组织在裸小鼠肾包膜下能够正常发育 ,并有效重建了受体外周血中的CD4+ T和CD8+ T细胞。体外功能检测显示 ,受体的脾细胞对ConA的刺激有良好的反应性 ,并对供体胸腺来源的F3Q44大鼠抗原刺激表现为特异性的低反应。结论 混合胸腺移植不仅在数量上可重建受体裸小鼠外周血中CD4+ T和CD8+ T细胞 。