TGF-β1对脐血体外扩增中造血祖细胞生物学特性影响

为了了解TGF β1对扩增中脐血 (UCB)造血祖细胞 (HPC)增殖和分化等生物学特性的影响 ,探讨利用其进行UCB HPC体外扩增的可行性 ,在含有若干细胞因子的UCBCD133+ 细胞体外扩增体系中加入不同浓度的TGF β1,对扩增细胞的有核细胞 (NC)数、免疫表型、细胞周期、祖细胞集落及粘附分子表达等进行了动态观察。结果显示 ,TGF β1各组NC总数及其扩增倍数均低于对照组 ,且呈明显的剂量负相关性。扩增中TGF β1各组的CD34+ 、CD133+ 、CD34+ CD38-细胞的比例、细胞总数及其扩增倍数均明显高于对照组。在扩增早期 ,TGF β1各组的CFU GM ,CFU mix和HPP CFC集落的产率均高于对照组。高浓度TGF β1组的S期细胞比例明显减少 ,而G1/G0 期的细胞明显增加。对粘附分子表达的检测表明 ,TGF β1能够上调CD4 9d ,CD11a ,和CD5 4的表达 ;TGF β1各组表达CD4 9d ,CD11a和CD5 4细胞的比例明显高于对照组 ,而表达这些粘附分子的CD34+ 细胞的比例也明显高于对照组。结论 :适当剂量的TGF β1能够促进CD133+ 细胞的扩增 ,延缓和减少扩增中HPC的过度分化 ,提高扩增细胞中造血祖细胞的含量 ,同时还能上调扩增细胞的部分粘附分子的表达 ,从而提高扩增细胞的植入能力 ,对提高UCB体外扩增的质量具有重要意义。

脐血CD44^+细胞成骨转化的研究

目的从人脐血中分离可以作为骨组织工程的种子细胞。方法采用免疫磁珠法应用干细胞分离系统分离出脐血CD44+细胞,细胞贴壁后取P2代细胞进行成骨诱导。观察细胞形态学特征、生长情况,流式细胞仪检测细胞周期及表型。诱导后碱性磷酸酶染色和Von-Kossa染色法检测成骨能力。结果贴壁细胞形态呈长梭形,需3周长满瓶底,传代后细胞增殖速度增快,细胞表型为CD44+。诱导细胞增殖速度均明显减慢。碱性磷酸酶染色细胞阳性率为66.0%。Von-Kossa染色提示细胞成骨诱导后有钙化结节形成。结论脐血CD44+细胞可以向成骨细胞分化。

人骨髓间充质干细胞与脐血CD34^+细胞体外扩增

为了研究骨髓间充质干细胞(MSC)及细胞因子对脐血CD34+造血祖细胞体外扩增的作用,及其扩增作用 对细胞黏附分子的影响,用免疫磁珠富集脐血CD34+细胞,然后接种到含有或不含有MSC和细胞因子的24孔培 养板,体外培养1周,观察不同指标并进行组间比较。结果表明:①SDF-1α+SCF+TPO+FL因子组合与SCF+ TPO+FL因子组合对脐血CD34+细胞的扩增作用无显著性差异(无论有无MSC细胞层存在)(P>0.05);②MSC 与上述细胞因子共存的培养体系优于相应的单纯细胞因子培养体系(P<0.05);③扩增前与扩增后脐血造血祖 细胞黏附分子CD44的表达没有明显变化。结论:趋化因子SDF-1α对SCF+TPO+FL因子组合的扩增作用无显 著影响;MSC增加细胞因子的脐血细胞体外扩增的作用;体外扩增不影响跻血细胞黏附分子CD44的表达。

间充质干细胞对脐血CD34^＋细胞扩增及其细胞特性变化的影响

本研究探讨脐带间充质干细胞(MSC)对CD34+细胞(HSPC)体外扩增的支持作用及对CD34+细胞表面标志、归巢黏附分子、集落形成能力等干细胞特征变化的影响。用免疫磁珠法从新鲜分离的脐血单个核细胞分离CD34+造血干祖细胞(HSPC);用MSC饲养层(feeder)制备经137Cs照射的间充质干细胞饲养细胞(MSC feedercells)。将CD34+细胞接种在不同的培养体系中,实验分为3组:HSPC+CK组为培养液中加入细胞因子组合(SCF、FL和TPO),HSPC+MSC组为CD34+细胞接种在MSC feeder上,HSPC+MSC+CK组同时加入细胞因子组合及MSC饲养细胞。培养后4、7、10、14天计数有核细胞总数(MNC),计算细胞扩增情况;用流式细胞术检测不同处理组间CD34+细胞及亚群免疫表型、归巢黏附分子和集落形成能力。结果表明:在2周的培养时间里,3组MNC和CD34+细胞均明显增加,MNC扩增数依次HSPC+MSC+CK组>HSPC+CK组>HSPC+MSC组。体外扩增10天内HSPC+MSC+CK组MNC得到大量的扩增,同时CD34+细胞的扩增亦较高。培养4天3组细胞CD34+比例较0天有明显下降(p<0.01);扩增后CD34+细胞比例:HSPC+MSC组>HSPC+MSC+CK组>HSPC+CK组(p<0.01);各组CD34+细胞亚型细胞比例有所不同,HSPC+CK组4天时CD34+CD38-细胞有一过性升高(62.71%),之后迅速降低,7天时为0.05%;HSPC+MSC组7天时CD34+CD38-细胞比例为18.92%,与HSPC+CK组比较差异有统计学意义(p<0.05)。从集落形成分析结果看出:MSC、细胞因子混合组扩增后细胞集落形成能力在不同时间点均维持在较高水平。结论:脐血CD34+细胞在体外短期培养(<7天)下,MSC和细胞因子联合应用能同时使CD34+细胞得到明显的扩增并维持造血干祖细胞的生物学特征。