肿瘤坏死因子-α和骨形成发生蛋白_2诱导成纤维细胞成骨表型表达的体外研究

成纤维细胞的成骨作用已在体内外得到证实。为进一步探索诱导成纤维细胞成骨潜能得以表现的调控因素，以实现体外获取大量成骨型成纤维细胞、形成骨修复材料的设想，采用分离、纯化人皮肤成纤维细胞，使其生长在含不同浓度的ＥＧＦ、ＩＬ６、ＴＮＦα、ＢＭＰ２培养液的干预条件下，采用生物化学、组织化学和电镜观察方法，检测成纤维细胞成骨性标志物形成状况。发现：ＴＮＦα和ＢＭＰ２联合应用，可使成纤维细胞分泌碱性磷酸酶、骨钙素及胶原的量增加；成纤维细胞由梭形向圆形或多突形转化，蛋白分泌旺盛；细胞外基质中，丰富的胶原纤丝定向或杂乱排列，其间散在较多的钙颗粒；成纤维细胞可重叠交织形成多层结构，其表面分泌颗粒和钙盐结晶堆积，并不断融合扩大成骨结节。认为。

骨巨细胞瘤M-CSF、IL-1和TNF-α免疫组织化学研究

本实验应用免疫组织化学方法，检测巨噬细胞相关抗原、巨噬细胞集落刺激因子（Ｍ┐ＣＳＦ）、白细胞介素┐１（ＩＬ┐１）和肿瘤坏死因子┐α（ＴＮＦ┐α）在骨巨细胞瘤（ＧＣＴ）中的表达，结果表明，在ＧＣＴ中，Ｍ┐ＣＳＦ主要由纤维母细胞样基质细胞（ＦＣ）分泌；巨噬细胞样基质细胞（ＨＣ）是单核┐巨噬细胞系早期的未成熟细胞，主要分泌ＩＬ┐１和ＴＮＦ┐α，少数多核巨细胞（ＭＧＣ）也可产生ＴＮＦ┐α。本文提示，ＧＣＴ中的三种主要细胞能分泌Ｍ┐ＣＳＦ、ＩＬ┐１和ＴＮＦ┐α细胞因子，通过自分泌或旁分泌作用相互影响，共同促进ＧＣＴ的发生。

Ramos免疫组织化学技术的敏感性研究

观察快速微波一步法（Ｒａｍｏｓ法）免疫组织化学技术的敏感性。选用１５种辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记的特异性抗体（ＥＰＯＳ），对５９例相应的恶性肿瘤组织进行快速微波免疫组织化学一步法标记。结果显示５８例为阳性（９８．３％），其中弱阳性４例，中度阳性和强阳性为５４例。结果表明，Ｒａｍｏｓ法具有敏感性高、特异性强、快速而简便等特点。

人椎间盘软骨细胞外基质小分子蛋白的双向电泳和质谱鉴定

目的初步研究双向电泳和质谱鉴定在人椎间盘的蛋白质组特性研究中的价值和作用．为进一步研究椎间盘疾病寻找有效途径。方法取人的正常椎间盘组织（包括纤维环和髓核），针对细胞外基厦分子蛋白进行蛋白萃取，通过氯化铯梯度离心去除蛋白多糖，通过固相pH梯度（IPG）等电聚焦和梯度聚丙烯酰胺双向电泳分别分离纤维环和髓核的蛋白质．分析电泳图像．使用基质辅助激光解吸附飞行时间质谱仪对蛋白质点进行分析鉴定。结果双向电泳显示。纤维环和髓核的细胞外基质小分子蛋白无明显差异．纤维环和髓核中的小分子蛋白在pH3～10、分子量16～250kd范围内能被很好地分离。对各蛋白质点行质谱仪鉴定．分别确定了萁中相同的19种蛋白质。结论双向电泳可有效地分离准间盘组织中细胞外基质小分子蛋白，通过质谱仪鉴定可以确定其组成成分，为进一步研究椎间盘软骨细胞外基质小分子蛋白的功能及在准间盘病变中的改变和所起的作用打下基础。

小鼠胚胎整体原位杂交实用技术的建立

目的 优化小鼠胚胎整体原位杂交及数据分析方法。 方法 小鼠胚胎用 4 %多聚甲醛 4℃固定过夜 ,10mg L蛋白酶K(PK)室温消化 30min ,预杂交 2h后 ,加入探针 6 3℃反应 16～ 18h ,用盐溶液高温洗涤多次 ,RNA酶 37℃消化 1h ,封闭 4h后加入地高辛抗体 4℃过夜。抗体反应后反复洗涤并在水平摇床上振摇 ,NBT和BCIP显色系统避光显色。提取图像灰度值 ,扣除背景、对照等假阳性信号。 结果 KIAA170 8探针在脑、脊髓等 8个区域有杂交信号 ,对图像数据分析结果表明 ,只有 1个区域的信号在 95 %可信限范围内 ,为阳性信号。 结论 通过控制蛋白酶K消化时间、探针和地高辛抗体浓度 ,以及洗涤、显色过程 ,得到了低本底、着色清晰的杂交结果 ,结合图像的数据分析步骤 ,消除假阳性结果。建立了一套实用的小鼠胚胎整体原位杂交方法。

大鼠胃肌间神经丛中NOS阳性神经元的组织化学研究

采用ＮＡＤＰＨ┐黄递酶（ＮＤＰ）组织化学技术在整装铺片上对大鼠胃肌间神经丛中一氧化氮合酶（ＮＯＳ）阳性神经元进行定量和定位研究。结果显示：大鼠胃肌间神经丛中ＮＯＳ阳性神经元密度（个／ｍｍ２）分别为：６２．１±３７．７（幽门部）、４３．４±３１．７（胃体）、３１．６±２７．８（胃底）。胃底部神经节内神经元数量较少，神经元胞体较大，染色较深；幽门部神经节内神经元数量较多，胞体大小不等，染色深浅不一；胃体部的则介于两者之间，呈过渡态。

胃印戒细胞癌的粘液组织化学和免疫组织化学研究

应用粘液组化及免疫组化技术对１５例胃印戒细胞癌进行了研究。结果：癌细胞可分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三型，三型细胞常混合存在；癌细胞以分泌酸性粘液为主，部分癌细胞分泌中性粘液，全部含有硫酸粘液；胃印戒细胞癌ＣＥＡ阳性率１００％，ＣＥＡ分布丧失了极性；电镜下癌细胞ＣＥＡ同时分布于细胞膜及胞浆内膜结构中。上述结果进一步支持了癌细胞起源于胃原始干细胞的看法；而癌细胞分泌的大量粘液及ＣＥＡ的异常分布可能易于导致印戒细胞癌的浸润及转移。

实验性肝硬化酶组织化学变化的研究

实验选用Ｗｉｓｔａｒ大鼠１５只，随机分为正常组５只，实验组（４０％ＣＣｌ４植物油皮下注射组）１０只，同时喂养９周。断头法快速处死动物，立即取肝，冰冻切片，用酶组织化学和图像分析法观察肝内主要代谢酶活性变化。结果显示：实验组肝内ＳＤＨ、ＣＣＯ活性降低，ＬＤＨ、ＮＯＳ活性升高。

介绍一种非放射性标记的原位杂交新方法

在病理诊断和科研工作中，原位杂交是一种常用的检测技术。原位杂交组织化学方法是将核酸分子杂交技术与组织细胞原位显示某种特定ＤＮＡｍＲＮＡ及其产物的定性定量及变化规律相结合的一种新技术。目前，在检测特异ｍＲＮＡ的原位杂交组织细胞化学中多采用同位素标记的探...

两种咬合板对大鼠脊柱形态的影响

【目的】比较大鼠佩戴两种咬合板升高咬合垂直距离(OVD)后脊柱形态的变化。【方法】24只成年Wistar大鼠随机分为C组(对照组)、Full-S组(戴上颌全牙列咬合板),Post-S组(戴上颌双侧后牙咬合板)。咬合板采用印模和模型技术在体外制作、口内衬垫、调牙合粘接。戴牙后观察大鼠咬合关系及行为、体重变化,并在正位X线片上测量颈椎C4、胸椎T1、T6、T10和腰椎L4中点偏离脊柱中线的距离,侧位片上观察胸椎曲度(θ)角的变化。体重及定点测量数据作统计学分析。【结果】Full-S组大鼠与其他两组比较出现咬合偏斜,生长受抑制;正位片上T10和L4偏离中线值及侧位片上θ角Full-S组显著大于Post-S大鼠组和对照组(P<0.05),而Post-S组与对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】全牙列咬合板可能导致大鼠脊柱排列形态的改变;双侧后牙咬合板用于大鼠咬合垂直距离升高对脊柱形态无明显影响。

人颌下腺cDNA文库的构建

本研究从新鲜的人颌下腺组织中提取总ＲＮＡ，从中分离出带ｐｏｌｙ（Ａ）尾的信使ＲＮＡ［ｐｏｌｙ（Ａ）〕ｍＲＮＡ］，并合成带ＮｏｔＩ位点的双链ｃＤＮＡ后，接上ＥｏｃＲＩ接头定向插入λｇｔ１１表达载体，经体外包装后转染Ｙ１０９０宿主菌，遂构建成人颌下腺ｃＤＮＡ文库。该文库有４．１×１０５个噬菌体，重组率为１００％，可供寡核苷酸探针和单克隆抗体两种方法筛选目的基因。

大鼠睾丸间质细胞体外培养方法及钒对间质细胞毒性的初步研究

以大鼠睾丸间质细胞为受试对象，观察了五氧化二钒（Ｖ＿２Ｏ＿５）对该细胞分泌睾酮的影响。结果表明：Ｖ＿２Ｏ＿５各浓度组（０．１２５、０．２５、０５、２、３ｍｍｏｌ／Ｌ）与对照组细胞培养液的睾酮含量无显著性差异。结合有关的整体动物实验结果可以认为，睾丸间质细胞不是钒作用的靶细胞。

硒拮抗氟对肾脏损害的酶组织化学观察

本实验以酶组织化学方法（ＳＤＨ、ＬＤＨ、ＡＣＰ、ＡＬＰ）探讨硒对氟引起肾脏损害的拮抗作用。大鼠分为六组，Ａ组常规饮水；Ｂ组饮水含亚硒酸钠２ｍｇ／Ｌ；Ｃ组饮水中含氟化钠１５０ｍｇ／Ｌ；Ｄ、Ｅ、Ｆ组饮水中分别含氟化钠１５０ｍｇ／Ｌ，依次含亚硒酸钠０．５ｍｇ／Ｌ、２ｍｇ／Ｌ、４ｍｇ／Ｌ。８周后断头处死，观察肾脏组织中ＳＤＨ、ＬＤＨ、ＡＣＰ、ＡＬＰ的活性。结果表明，与Ａ组相比，Ｃ组近曲小管ＳＤＨ、ＡＬＰ活性减弱，ＬＤＨ、ＡＣＰ活性明显增加；Ｂ组ＳＤＨ、ＡＣＰ活性正常，基底膜清晰；Ｄ、Ｅ、Ｆ组均能提高ＳＤＨ活性，其中Ｅ组较稳定；Ｆ组ＡＣＰ活性较高。结果说明了氟引起肾近曲小管溶酶体的破坏，而硒（２ｍｇ／Ｌ）能稳定溶酶体膜。

地高辛标记探针电镜原位杂交技术探讨

应用ＬｏｗｉｃｒｙｌＫ４Ｍ低温包埋，Ｄｉｇ标记ｃ－ｆｏｓｃＤＮＡ探针对人肝癌组织进行原位杂交，用金标抗Ｄｉｇ抗体进行检测，银增强放大信号处理。电镜观察表明，免疫胶体金颗粒特异性地标记在肝癌细胞胞浆及核内，呈散在分布，金颗粒大小基本一致，背景清晰。

肿瘤坏死因子和酯多糖对培养脑微血管内皮细胞NOS的影响

一氧化氮合酶（ＮＯＳ）活性与一氧化氮（ＮＯ）合成及血管功能关系密切，为了研究脑血管内皮细胞ＮＯＳ表达及其调节作用，本文采用脑微血管内皮细胞培养技术和组织化学方法，观察了内皮细胞ＮＯＳ的表达。未加刺激物对照组的脑微血管内皮细胞染色淡，阳性反应物主要聚集在细胞核周围胞浆中。加入肿瘤坏死因子－α（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ－α，ＴＮＦ－α）或酯多糖（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＬＰＳ）５ｍｉｎ后，ＮＯＳ染色开始增加，１ｈ达顶峰。以后呈下降趋势。ＬＰＳ比ＴＮＦ－α作用时间较长。

脑缺血再灌流诱导的巨噬细胞增加的组织化学研究

用组织化学方法显示非特异性酯酶，观察了大鼠脑缺血再灌流脑组织巨噬细胞数量的变化。结果显示，大鼠脑缺血１ｈ再灌流２ｈ巨噬细胞数量明显高于正常对照组（Ｐ＜０．０５），再灌流１６ｈ，巨噬细胞数量最多。缺血侧皮质区与基底节区比较，后者巨噬细胞计数明显高于前者（Ｐ＜０．０５）。结果提示。

用石蜡切片显示腺苷酸环化酶的组化技术

用石蜡切片显示腺苷酸环化酶的组化技术黄安培，崔成虎（川北医学院组胚教研室）腺苷酸环化酶广泛分布于动物细胞膜上，其作用是使ＡＴＰ转变为ｃＡＭＰ，后者是蛋白质和肽类激素等对靶细胞作用的第二信使。Ｒｅｉｋ等￣［１］（１９７０）最早建立显示腺苷酸环化酶的组化...

脑血管的一氧化氮合酶分布的组织化学研究

本研究用ＮＡＤＰＨ－ｄ组织化学方法观察了脑表面及脑实质（皮质、纹状体）血管壁的ＮＯＳ阳性细胞。结果发现，在正常脑大于５０μｍ的血管壁上可见有内皮型一氧化氮合酶（ｅＮＯＳ）阳性内皮细胞，并有神经元型一氧化氮合酶（ｎＮＯＳ）阳性细胞紧贴于管壁或发出突起布于管壁。在神经毒损伤的纹状体中，可见有诱导型一氧化氮阳性胶质细胞，终足附于脑血管壁上。

一氧化氮合酶(NOS)等活性变化对肺癌早期诊断的研究——纤支镜活检组织50例的观察

用酶组织化学方法探讨经支气管纤维镜（简称纤支镜）活检组织，对肺癌的早期诊断。包括一氧化氮合酶（ＮＯＳ）、细胞色素氧化酶（ＣＣＯ）、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）、琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）、酸性磷酸酶（ＡＣＰ）等。酶组织化学反应结果显示为肺癌组病人ＮＯＳ、ＬＤＨ、ＣＣＯ、ＡＣＰ的活性显著增高，分别为强阳性（），少数呈最强阳性（）；而ＳＯＨ活性为弱阳性（＋），较正常人组显著下降。可疑组病人ＳＤＨ活性增高呈强阳性（）或最强阳性（），但ＮＯＳ、ＬＤＨ、ＡＣＰ的活性较肺癌组下降，分别为弱阳性（＋）或中等阳性（）。上述结果提示：ＮＯＳ等活性的变化，可作为提高肺癌早期诊断的重要指标之一。