Bcl-2蛋白家族和p53基因在细胞凋亡中的调控效应

目的:细胞凋亡是个体发育过程中由一系列基因控制的细胞主动死亡过程。在多数细胞类型中,原癌基因Bcl-2蛋白家族与p53是重要的细胞凋亡调节因子,在细胞凋亡中相互联系,相互作用,从而调控细胞凋亡。文章探讨Bcl-2蛋白家族和p53基因对细胞凋亡的调控机制。资料来源:引用计算机检索1995/2006PubMed、Springer link的相关文章,检索词“apoptosis,Bcl-2protein family,p53”,并限定文章语言种类为English。同时计算机检索1995/2006中国期刊全文数据库或万方数据库的相关文章,检索词为“凋亡,Bcl-2,Bax”,限定文章语言种类为中文。并手工检索《细胞凋亡基础与临床》。资料选择:对资料进行初审,被选文献符合以下标准:①Bcl-2蛋白家族与凋亡的关系。②p53基因与凋亡的关系。③细胞凋亡基因调控的研究。④Bcl-2蛋白家族、p53基因调节细胞凋亡的机制研究。排除重复研究。资料提炼:共收集到70篇相关文献,中文文献均为全文,大部分外文文献为全文,其他为摘要。入选关于Bcl-2蛋白家族、p53基因与凋亡的关系及机制,细胞凋亡基因调控的相关文献32篇。资料综合:①Bcl-2蛋白家族是细胞凋亡相关基因研究得最多的一类蛋白质。包含抑制和促进细胞凋亡两类功能相反的蛋白质。Bcl-2蛋白家族及其家族成员共同构成一个异常复杂的相互作用网络,调控细胞凋亡。其调节细胞凋亡的机制可能于Bcl-2蛋白家族与线粒体、Bcl-2蛋白的相互作用、细胞内Ca2+;及氧自由基有关。②p53基因对防止细胞增生和保持DNA受损基因组的完整性有重要作用。p53调控细胞凋亡包括对外源性凋亡途径的调节和内源性凋亡途径的调控,p53基因究竟通过什么样的途径调控细胞凋亡?不同的实验因为不同的遗传学背景和微环境而不同。③目前主要有3种实验方法来研究p53基因对细胞凋亡的调控作用:第1种方法是通过识别p53激活的基因组的DNA断片,或者是启动所包含的依赖p53激活的因子。第2种方法是系统地识别受p53基因分别调控的基因组(或DNA组)。第3种方法是识别受p53调控的基本凋亡因子。结论:大量的凋亡因子是依赖p53激活调节细胞凋亡的,细胞凋亡中Bcl-2蛋白家族、p53基因的调控机制的分析,充分发挥细胞凋亡对机体有利的方面,对治疗各种癌症和心血管疾病具有广阔的应用前景。

内质网应激与细胞凋亡研究进展

内质网应激主要表现为蛋白质合成障碍,会扰乱细胞稳态并最终导致细胞凋亡。该机制在神经变性性疾病、糖尿病、心血管类疾病及细胞肿瘤类疾病等领域研究进展迅速,在口腔疾病领域研究相对滞后。深入研究内质网应激机制在口腔疾病中发挥的作用,有助于该类疾病的预防与治疗。现就内质网应激机制作一阐述。

不同浓度氟化物对体外培养成釉细胞活性的影响

目的建立大鼠成釉细胞原代培养技术,观察不同浓度氟化钠对成釉细胞活性的影响,为研究氟斑牙的形成提供依据。方法取10~15 d的Wistar大鼠磨牙牙胚组织进行原代培养,通过酶消化法,分离培养成釉细胞。加入不同浓度(0、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4 mmol/L)的氟化钠作用于成釉细胞,分别培养24、48、72 h后,采用CCK-8法检测各组细胞的活性情况。结果①当氟化物浓度为0.4、0.8 mmol/L时,对成釉细胞的增殖有促进作用,且随着时间的增加而增强。②当氟化物浓度为1.6、3.2、6.4 mmol/L时,对成釉细胞的增殖有抑制作用,随着氟化钠浓度的增加,对细胞的抑制作用也逐渐增强,并且抑制作用随着时间的延长愈发明显。结论不同浓度的氟化物对体外培养成釉细胞的活性具有促进和抑制双向作用。

烟草影响人成骨细胞生物学性能机制的研究

目的探讨尼古丁对体外培养的人成骨样细胞(MG63)生物学性能的影响。方法用含不同浓度尼古丁(1×10-4mol/L和1×10-3mol/L)的DMEM高糖培养基体外培养MG63细胞,分别于第3、5、7、10、14天采用MTT比色法检测MG63细胞的增殖力;用Trizol提取总RNA,Real-Time PCR法检测MG63细胞骨桥蛋白、骨唾液磷酸蛋白的基因表达情况。结果与对照组相比,体外尼古丁处理对MG63细胞的增殖起抑制作用;高浓度尼古丁在第5、7天对细胞骨桥蛋白的基因表达起促进作用;并且尼古丁促进了骨唾液磷酸蛋白的基因表达。结论尼古丁可抑制成骨细胞的增殖,但不是通过抑制骨桥蛋白与骨唾液磷酸蛋白的分泌起作用。

细胞凋亡相关因子与耐药性的关系研究进展

细胞凋亡和肿瘤多药耐药是目前制约肿瘤临床疗效的两个重要因素，多数抗肿瘤药物通过诱导细胞凋亡而发挥作用，如果发生凋亡逃逸即细胞抗凋亡能力提高如抗凋亡基因过表达或促凋亡基因丢失等，可能导致肿瘤细胞产生耐药性。细胞凋亡功能的异常不仅在肿瘤的发生与发展过程中发挥重要作用，还参与介导肿瘤细胞的MDR，使肿瘤细胞对多种化疗药物诱导的凋亡耐受而产生耐药性。许多调节细胞凋亡的因子如SIRTl、Survivin、PUMA等可参与耐药的发生。

周期性牵张力对人牙周膜成纤维细胞Ⅲ型胶原和纤维连接蛋白表达影响的研究

目的观察周期性牵张力对人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)Ⅲ型胶原和纤维连接蛋白表达的影响。方法对培养在弹性膜培养板上的HPDLF施加0.2 Hz、12%形变率的周期性牵张力,利用免疫荧光技术观察Ⅲ型胶原的表达情况;ELISA检测试剂盒检测Ⅲ型胶原和纤维连接蛋白的表达变化。结果对照组HPDLFⅢ型胶原免疫荧光染色弱阳性,实验组加载周期性牵张力后染色明显增强,Ⅲ型胶原合成分泌增加;ELISA检测显示加载周期性牵张力后纤维连接蛋白的表达明显强于对照组。结论周期性牵张力促进HPDLF的Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白等细胞外基质的表达。

脱氢表雄酮在体外对成骨细胞代谢和IL-1β的影响

目的探讨脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)对离体大鼠成骨细胞和IL-1β的影响。方法体外分离培养大鼠成骨细胞,取传一代细胞,分别给予10-5mmol/L、10-7mmol/L、10-9mmol/L DHEA培养72h,以10-8mmol/L雌二醇(estradiol,E2)为阳性对照,另设空白对照组。碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色鉴定成骨细胞,MTT法检测成骨细胞的增殖能力,PNPP法测定ALP活性。ELISA法测定不同浓度DHEA培养液中IL-1β的水平。结果不同浓度DHEA组成骨细胞增殖能力和ALP的活性均有上升,其中以10-7mmol/L DHEA组最显著(P<0.01),其作用和E2相似(P>0.05);10-9mmol/L DHEA组单位细胞数的ALP活性高于空白对照组(P<0.05)。不同浓度的DHEA组IL-1β呈下降趋势,成骨细胞增殖能力及ALP活性和IL-1β成负相关。结论DHEA在体外促进大鼠成骨细胞生长和增殖,提高ALP活性,其作用可能和抑制IL-1β有关。

小儿病毒性心肌炎外周血淋巴细胞凋亡的研究及意义

目的:探讨外周血淋巴细胞凋亡在病毒性心肌炎发病中的作用。方法:选择临床诊断病毒性心肌炎患儿和正常小儿各25例,采用Annexin V/PI双参数法经流式细胞仪定量检测两组小儿外周血淋巴细胞凋亡百分率。结果:心肌炎组患儿外周血淋巴细胞凋亡百分率(0.6976±0.1109)%较正常对照组(0.1288±0.1069)%明显升高(t=18.459,P<0.001)。结论:病毒性心肌炎患儿外周血淋巴细胞凋亡增加,可能为细胞免疫功能下降的原因之一,并在病毒性心肌炎发病中起着重要作用。

动态检测活细胞内泛素-蛋白酶体系统活性方法的建立

目的建立一种动态检测活细胞内泛素-蛋白酶体系统活性的方法。方法将表达绿色荧光蛋白(GFP)或红色荧光蛋白(DsRed_2)的质粒分别改建为表达带有内泛素-蛋白酶体系统降解信号CL1的GFP或DsRed_2的pGFP^u或pDsRed_2~u质粒,然后转染HEK293细胞,通过G418筛选得到稳定表达GFP^u或DsRed_2~u的细胞系。在蛋白酶体抑制剂N-Acetyl-Leu-Leu-Norleu-al(ALLN)处理GFP^u或DsRed_2~u细胞后,应用免疫印记技术检测细胞内GFP或DsRed_2含量的变化,应用荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜技术观察GFP或DsRed_2荧光强度的变化。结果ALLN处理能使GFP^u和DsRed_2~u细胞内GFP和DsRed_2含量明显增加,荧光强度显著增强,并呈现明显的剂量/时间-效应关系。结论本文成功地建立了检测内泛素-蛋白酶体系统活性的方法,该方法能有效地对活细胞的内泛素-蛋白酶体系统活性进行实时动态检测。

大鼠颅底软骨联合细胞凋亡信号传导途径的研究

目的研究大鼠生长发育过程中颅底细胞的凋亡活动,探讨软骨联合细胞凋亡途径相关信号因子iNOS、Fas的表达及分布规律。方法选用出生后4、8、16、32、48、64、128 d的SD大鼠的颅底软骨联合组织。通过末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL),iNOS及Fas的免疫组化法来检测颅底软骨联合细胞凋亡途径的时空特征,和各途径之间的相关性。结果各期标本均可见黄色荧光TUNEL凋亡软骨细胞,出生后4、8 d大鼠软骨联合的肥大区、交界区发现少量细胞凋亡现象;随时间推移细胞凋亡主要出现在肥大区、交界区和两侧的骨小梁,且细胞数逐渐增多。iNOS主要在出生后4、8、16 d的大鼠颅底软骨联合中间静止区、增殖区表达。Fas则存在于几乎各个时期的软骨联合各层,以肥大区、交界区表达为多。结论颅底软骨联合的生长发育与软骨细胞凋亡密切相关并存在Fas和NO两种凋亡途径。Fas途径发挥主要作用,NO途径对静止区和增殖区的生长意义更大。

炎症小体介导的焦亡在宿主细胞抵御病毒感染中的作用及机制

细胞死亡是机体抗感染免疫反应过程中重要的组成部分,可分为程序性死亡和被动性死亡。前者需要代谢能量,由特定的细胞信号和效应分子介导,主要包括焦亡(pyroptosis)、自噬(autophagy)及凋亡(apoptosis)等;后者由外力失控诱导,主要包括坏死(necrosis)[1]。细胞焦亡是由Zychlinsky等[2]于1992年研究弗氏志贺菌感染的巨噬细胞时观察到的一种细胞溶解死亡形式。

壬二酸对阿霉素诱导的心肌细胞损伤的保护作用及其机制

目的探讨壬二酸对阿霉素诱导的心肌细胞损伤的保护作用及其机制。方法取生长融合度达80%以上的H9c2心肌细胞随机分为正常组、模型组、壬二酸组,正常组以高糖DMEM培养基培养,模型组以5μmol/L阿霉素处理24 h,壬二酸组以10μmol/L壬二酸和5μmol/L阿霉素共处理24 h,采用CCK-8法和微量酶标法检测心肌细胞活力及乳酸脱氢酶(LDH)漏出量,采用化学荧光法检测细胞内活性氧(ROS)水平及线粒体膜电位(ΔΨm)变化,采用荧光素酶法检测H9c2心肌细胞内三磷酸腺苷(ATP)水平,采用透射电子显微镜观察H9c2心肌细胞中自噬体的数量,采用免疫荧光染色分析细胞中Bcl-2/腺病毒E1B相互作用蛋白3(BNIP3)与线粒体荧光探针(Mitotracker)共定位的情况,采用Western blot实验检测H9c2心肌细胞中自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3-Ⅰ(LC3-Ⅰ)、LC3-Ⅱ、泛素结合蛋白(P62)、凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2基因相关启动子(Bad)及BNIP3的表达水平。24只C57BL/6J小鼠随机分为正常组、模型组(仅第1天腹腔注射阿霉素10 mg/kg)、壬二酸组(在模型组处理基础上壬二酸20 mg/kg连续灌胃7 d),每组8只小鼠,采用超声心电图检测小鼠心功能的变化,采用Masson染色法检测小鼠心脏组织中心肌纤维化的情况。结果两组细胞LDH漏出量、ROS水平、ATP含量、ΔΨm、BNIP3与Mitotracker的Pearson系数、自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值及Bad、BNIP3、P62蛋白表达水平与模型组比较,差异均具有显著性(t=2.54~17.37,P<0.05)。正常组、壬二酸组小鼠与模型组小鼠比较,EF%、FS%差异均具有显著性(t=3.41~6.49,P<0.05)。结论壬二酸对阿霉素诱导的心肌细胞损伤具有保护作用,其作用可能是通过抑制细胞中BNIP3介导的线粒体自噬实现的。

来曲唑抑制大鼠生长板软骨细胞凋亡的最适药物浓度筛选

目的:筛选来曲唑(letrozole,LE)抑制大鼠生长板软骨细胞凋亡的最适药物浓度。方法:解剖取大鼠胫骨及股骨生长板软骨,采用二步酶消法体外分离获得生长板软骨细胞并进行培养,分别利用倒置相差显微镜及Ⅱ型胶原免疫荧光实验对生长板软骨细胞进行形态学观察和鉴定。用IL^(-1)β诱发生长板软骨细胞凋亡,分别加入药物浓度为2.5、5、10、15、20μmol·L^(-1)来曲唑的培养基进行培养,流式细胞仪检测来曲唑抑制细胞凋亡情况。同样以IL^(-1)β诱发生长板软骨细胞凋亡,分别加入药物浓度为1、2.5、5、10、15μmol·L^(-1)来曲唑的培养基进行培养,MTT法筛选来曲唑抑制细胞凋亡的最适药物浓度。结果:来曲唑浓度为2.5、5、10、15μmol·L^(-1)时均可以不同程度抑制生长板软骨细胞凋亡。模型对照组细胞OD值较正常对照组降低(P<0.01)。DMSO组与非造模组与正常对照组细胞OD值差异无统计学意义。结论:药物浓度为2.5μmol·L^(-1)的来曲唑抑制生长板软骨细胞凋亡效果最好,可以做为今后其他抑制细胞凋亡药物的阳性对照药物。

阿霉素对大鼠原代心肌细胞凋亡的影响

目的探讨阿霉素对大鼠原代心肌细胞凋亡的影响,并探讨其作用机理。方法取培养72 h原代心肌细胞,随机分为空白对照组(C组)和阿霉素处理组(D组),空白对照组(C组)不给予任何药物、阿霉素组(D组)用1μmol/L阿霉素处理24 h。对原代心肌细胞的存活率进行6次测定,取平均值;采用免疫荧光法对心肌纯度进行检测;采用吸光光度法对两组的MTT值进行检测;采用ELISA法对两组的心肌肌钙蛋白(cTnI)和氨基末端B型利钠肽前体(NT-proBNP)的含量进行测定。结果原代心肌细胞6次测定的平均成活率为95.38%,免疫荧光法鉴定心肌纯度为82.25%。与C组相比,D组MTT值显著降低,cTnI值和NT-proBNP值显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论阿霉素能够导致大鼠原代心肌细胞发生凋亡,具有明显的心脏毒性。

线粒体自噬与肺动脉高压的关系及其在巨噬细胞代谢重编程中作用的研究进展

肺动脉高压的发病率及死亡率均较高,巨噬细胞极化在其发生发展中发挥重要作用,并且可能与线粒体功能及线粒体自噬有关。本文介绍了线粒体自噬相关内容,叙述了线粒体自噬与肺动脉高压的关系及其在巨噬细胞代谢重编程中的作用,并指出线粒体自噬可能通过促进巨噬细胞代谢向糖酵解方向转化而在肺动脉高压的发生发展中发挥作用。