大鼠肠道平滑肌胶原条带构建及周期性拉伸培养的体外评价

背景:肠道平滑肌层是肠道管壁结构的重要组成部分,在组织工程化肠道的仿生构建中备受关注。目的:探索周期性机械拉伸对胶原条带内肠道平滑肌细胞生长活性以及功能基因表达的影响。方法:以自制鼠尾胶原为支架,以大鼠原代肠道平滑肌细胞为种子细胞,同时结合自主设计的胶原条带拉伸培养装置,构建肠道平滑肌细胞胶原条带培养体系,采用Eth D-1/Calcein-AM细胞活性染色、洋红染色、细胞骨架-Ki67免疫荧光染色观察细胞的生长活性与增殖情况,定量RT-PCR检测desmin、α-sma、vimentin功能基因的表达。结果与结论:(1)成功构建肠道平滑肌细胞胶原条带培养体系,条带内肠道平滑肌细胞具有良好的细胞活性;(2)与静态培养相比,周期性拉伸动态培养条件下Ki67阳性表达的细胞数量增多且显著高表达标志性基因desmin、α-sma、vimentin(P<0.001);(3)结果表明:机械力学刺激有利于肠道平滑肌细胞在体外培养过程中维持生长状态,并促进其功能性分化。

ERK/Smad通路在BMP2介导的牙髓干细胞增殖、分化中的作用

目的探讨细胞外调节蛋白激酶(ERK)/SMAD家族(Smad)通路在骨形态蛋白(BMP)-2诱导的人牙髓干细胞(hDPSCs)增殖、分化中的调节作用。方法将前磨牙hDPSCs分为空白组、荧光蛋白(GFP)组、BMP2组(80 ng/ml)、BMP2+ERK通路抑制剂(U0126)组(80 ng/ml+25μmol/L);空白组正常培养不做任何处理,GFP组转染重组腺病毒空载体溶液作为对照,BMP2组转染BMP2重组腺病毒溶液,BMP2+U0126组在BMP2组基础上加入U0126溶液进行干预培养。各组均培养7 d后,用CCK-8检测hDPSCs细胞的增殖能力;用碱性磷酸酶(ALP)染色法及茜素红染色法检测其分化能力;用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测BMP2、Runt转录因子蛋白(Runx)2、牙本质涎磷蛋白(DSPP)和骨唾液蛋白(BSP)基因表达;用蛋白Western印迹法检测各组细胞中ERK1/2及其磷酸化(p)-ERK1/2、Smad1/5/8及其磷酸化蛋白(p-Smad1/5/8)、Runx2、DSPP、BSP蛋白表达水平。结果hDPSCs分离培养的第3代hDPSCs呈长梭形且阳性表达CD29、CD44及波形蛋白,阴性表达CD34及角蛋白。与空白组比较,BMP2组细胞ALP染色区域所占百分比、矿化结节能力和BMP2、Runx2、DSPP、BSP mRNA表达水平及p-ERK1/2/ERK1/2、p-Smad1/5/8/Smad1/5/8、Runx2、DSPP、BSP蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);与BMP2组比较,BMP2+U0126组除BMP2 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)外,其余上述指标均明显降低(P<0.05);GFP组和空白组相比上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论ERK/Smad通路在BMP2介导的hDPSCs细胞增殖、分化作用中处于激活活化状态,发挥重要作用。

佛甲草正丁醇提取物抗炎镇痛作用的实验研究

目的:研究佛甲草正丁醇提取物抗炎、镇痛作用,并初步探讨其机制。方法:采用二甲苯诱导的小鼠耳廓肿胀急性炎症模型、小鼠肉芽增生慢性炎症模型、完全弗氏佐剂诱导的大鼠关节炎模型、坐骨神经分支结扎所致的大鼠神经病理性疼痛模型、冰醋酸诱导的小鼠疼痛模型和热辐射痛模型,检测小鼠胸腺指数、脾脏指数、足趾肿胀度、耳廓肿胀率、热缩足反应、机械缩足反应、扭体次数、甩尾时间,酶联免疫学方法检测小鼠血清IL-10和IL-6含量,化学比色法检测SOD、GSH-Px和MDA含量。结果:佛甲草正丁醇提取物能有效减轻小鼠耳廓肿胀度、棉球所致的肉芽肿增生及佐剂性关节炎大鼠足趾肿胀度(P<0.05);明显提高神经病理性痛大鼠机械痛阈值(P<0.01),显著延长辐射热引起的小鼠疼痛甩尾反应潜伏期(P<0.001),抑制冰醋酸刺激小鼠腹腔黏膜引起的疼痛反应(P<0.01);下调小鼠脾及胸腺指数(P<0.01);降低小鼠血清IL-6和MDA含量(P<0.01),升高IL-10(P<0.01)、SOD及GSH-px含量(P<0.05)。结论:佛甲草正丁醇提取物具有抗炎镇痛作用,其作用机制可能与调节机体免疫功能、抑制炎症反应和抗氧化功能有关。

松果体及其褪黑素影响胸腺T细胞发育周期

目的 探讨松果体对胸腺分化发育时细胞周期的影响。 方法 选用清洁级SD大鼠 ,分为正常对照组、假手术对照组、松果体摘除、松果体摘除 +褪黑素腹腔注射 7 5mg kg组和松果体摘除 +褪黑素腹腔注射15mg kg组。术后 4、8周取材。用ABC法染胸腺cyclinA、cyclinE阳性细胞 ,计算机图像分析仪测量各阳性细胞面积及其染色强度。以碘化丙啶 (PI)一步插入性DNA定量荧光染色法 ,流式细胞术测定胸腺T淋巴细胞不同细胞周期的分布状况。以RT PCR法检测褪黑素对胸腺细胞周期依赖性激酶 1β表达的影响。 结果 松果体摘除对胸腺cyclinE表达的影响甚于对cyclinA的影响 ,促进cyclinE的合成 ,松果体摘除后胸腺细胞周期的变化表现为G1 期减少 ,S期和G2 +M期百分比增多。补充褪黑素后上述改变有所恢复 ,但与剂量不成线性关系 ,且对皮髓质影响有所不同。褪黑素能促进胸腺细胞表达细胞周期依赖性激酶 1β。 结论 松果体摘除能显著影响胸腺细胞分化发育 ,补充褪黑素能缓解相关影响。

肝细胞生长因子对四氯化碳损伤肝细胞的保护作用及相关基因表达

利用无血清原代培养大鼠肝细胞 ,观察重组人肝细胞生长因子 (rhHGF)对CCl4染毒肝细胞的保护作用。结果表明 :( 1)rhHGF ( 5ng/ml)预处理后可显著提高CCl4( 15mmol/L)染毒肝细胞存活率 ,降低细胞内丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、K+的漏出 ;( 2 )表皮生长因子 (EGF ,5 0ng/ml)和rhHGF ( 5ng/ml)合用预处理肝细胞 ,CCl4染毒后细胞内ALT、K+漏出较rhHGF和EGF单独保护组进一步降低 ;( 3 )大鼠肝部分切除和CCl4( 5 0 % ,2 5ml/kgbw)染毒后 ,再生肝内HGF基因及其受体基因 /c met的表达分别较假手术和盐水对照组显著升高。结果提示 ,rhHGF对CCl4染毒大鼠肝细胞具有保护作用 ;EGF和rhHGF有协同保护作用 ;

树突状细胞电转染的优化条件及影响因素

目的探讨树突状细胞(DC)电转染的方法、优化条件以及影响DC电转染率和存活率的主要因素。方法提取人肝癌细胞(Bel 7402)RNA,利用淋巴细胞分离液密度梯度法分离人外周血单个核细胞(PBMC),并通过贴壁法获取单核细胞作为树突状细胞前体(pDC)。将pDC置含rhGM-CSF和rIL-4的RPMI-1640培养液内联合培养诱导7d,使之充分分化为未成熟的DC(imDC)。应用电穿孔仪(electroporation apparatus)分别将人肝癌细胞总RNA和绿色荧光蛋白(GFP)电转染至imDC,并设定不同的电压、脉冲时间、细胞浓度、温度和电转染缓冲液等条件。荧光镜下和光镜下分别计算绿色荧光阳性细胞数和总细胞数。电转染1d后,用0.4%锥虫蓝染色分别计算其电转染率和存活率。结果当imDC浓度为5×106/ml与40μg的人肝癌细胞总RNA混合,设定电转染仪电压为300V、脉冲时间为500μs时,其电转染率达到最高值,imDC存活率约49.07%。结论电转染提供了一种使人肝癌细胞RNA电转染至imDC的可行技术。影响imDC电转染率的最主要因素是受体细胞imDC的生长状况、电转染的电压及脉冲时间。

芦荟苦素对体外培养的黑素细胞影响的实验研究

目的:研究芦荟苦素对体外培养的正常人表皮黑素细胞的作用效应。方法:利用碱性成纤维细胞生长因子为主要有丝分裂原建立正常人表皮黑素细胞培养系,MTT法测定芦荟苦素对黑素细胞活力的影响,以左旋多巴为底物测定酪氨酸酶活性,图像信号采集与分析系统测定黑素含量,并与熊果苷及茶多酚的结果进行比较。结果:芦荟苦素对体外培养的正常人黑素细胞酪氨酸酶活性呈浓度依赖性抑制,可显著减少黑素生成量,对黑素细胞活力影响很小。结论:芦荟苦素对体外培养的人黑素细胞的酪氨酸酶活性及黑素生成有显著抑制作用,且细胞毒性很低,值得进一步研究。

Olig对少突胶质细胞介导脱髓鞘大鼠髓鞘再生的影响

目的探讨Olig在少突胶质细胞介导的脱髓鞘大鼠髓鞘再生中的作用。方法 40只健康Wistar大鼠,随机分成正常组、模型对照组、模型组、实验组,用形态学观察和免疫组织化学检测Olig1和Olig2的表达。结果正常组Olig1位于少突胶质细胞的胞质,模型组胞核表达明显增多,实验组Oligl又重新转移至胞质;正常组Olig2表达位于胞核,模型组中有少量表达于胞质。结论在Olig1和Olig2同时缺失时,导致全脑不能形成少突胶质细胞,严重影响髓鞘的再生。

士兵人体成分对心肺功能及体能的影响

目的 :了解部队战士人体成分与心肺功能及体能的关系 ,以探讨提高士兵体能的有效途径。方法 :研究对象为某部队步兵连士兵及卫生员训练队学员 ;应用生物电阻抗法测定人体成份 ;心肺功能及体能指标包括血压、晨脉、心功能指数、肺活量、10 0m跑、立定跳远、立定投弹、引体向上、俯卧撑 ,其中的体能指标按GJB 1337- 92进行测定和评价。结果 :连队士兵体重、生物电阻抗、体脂重、体脂含量明显低于卫训队学员 ,而瘦体重、瘦体含量明显高于卫训队 ;两组舒张压、晨脉、心功能指数有明显差别 ,连队心脏功能明显优于卫训队 ;除 10 0m跑和立定跳远外 ,其它运动能力连队均明显高于卫训队 ;肥胖及运动能力平均分 <50的人数 ,卫训队明显多于连队 ;瘦体组织与连队及卫训队运动能力平均分均为显著正相关 ,而卫训队体脂含量与运动能力为显著负相关。结论 :士兵人体成分对心肺功能及体能有一定影响 ,增加士兵的瘦体组织成分 。

桩道预备时机及剩余根充物长度对根管冠向微渗漏的影响

背景:根管治疗后进行桩核冠修复牙齿的过程中,根管充填不理想或是不良的桩核冠修复可造成材料与牙体间的微渗漏,导致根尖周组织二次感染,影响牙体修复远期效果。目的:通过葡萄糖微渗漏模型比较不同桩道预备时机及剩余根充物长度对微渗漏的影响。方法:收集中山大学孙逸仙纪念医院正畸科近期拔除的单、直根管下颌前磨牙86颗,分8组干预:阳性对照组(n=10)行根管预备;阴性对照组(n=10)根管预备、充填后不进行桩道预备;A1组(n=11)根管充填后即刻进行桩道预备,保留根管内4 mm充填物;B1组(n=11)根管充填后即刻进行桩道预备,保留根管内5 mm充填物;C1组(n=11)根管充填后即刻进行桩道预备,保留根管内6mm充填物;A2组(n=11)根管充填后1周进行桩道预备,保留根管内4mm充填物;B2组(n=11)根管充填后1周进行桩道预备(即延迟桩道预备),保留根管内5 mm充填物;C2组(n=11)根管充填后1周进行桩道预备,保留根管内6 mm充填物。桩道预备48 h后,扫描电镜观察根管壁与充填物结合情况,采用葡萄糖微渗漏模型检测各组样本从冠方向根方渗漏的葡萄糖量。结果与结论:(1)扫描电镜显示,C1组充填物与根管壁连接最紧密,A2组充填物与根管壁间微缝隙最明显;(2)葡萄糖微渗漏量测定显示,A2组微渗漏量大于A1组(P <0.05),B2组微渗漏量大于B1组(P <0.05),C1组微渗漏量与C2组比较无差异(P> 0.05);A1组、B1组、C1组微渗漏量比较无差异(P> 0.05),B2组微渗漏量与A2组、C2组比较无差异(P> 0.05),A2组微渗漏量大于C2组(P′<0.017);(3)结果表明,即刻桩道预备在减少微渗漏方面优于延迟桩道预备;即刻桩道预备后,保留不同长度充填物对微渗漏无影响,而延迟桩道预备时应至少保留5 mm根充物,以减少微渗漏的发生。

小鼠下颔下腺中肥大细胞异质性研究

取小鼠下颌下腺,用甲苯胺蓝染色、Alcian蓝一藏红染色及免疫组织化学ABC法显示肥大细胞的异质性.结果表明;肥大细胞主要分布于间质的小血管、小叶间导管及神经节周围.此外还发现有些肥大细胞沿腺实质表面排列,有些肥大细胞伸出突起与相邻的神经元或肥大细胞接触.肥大细胞呈降钙素基因相关肽免疫反应阳性,但仅为相邻切片甲苯胺蓝染色的14 %.提示下颌下腺中肥大细胞的存在可能与腺体分泌活动及血流调节有关.

银杏叶提取物对大鼠局灶性脑缺血再灌注组织中缺氧诱导因子-1α表达的影响

目的研究大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤时银杏叶提取物(EGB)对缺氧诱导因子(HIF)-1α表达的影响。方法随机将大鼠分为假手术组、模型组和EGB治疗组,用线栓法建立大鼠脑缺血再灌注模型。观察局灶性脑缺血2 h再灌注24 h后大鼠神经病学行为、神经元病理学变化及HIF-1α表达。结果与模型组相比,EGB治疗组神经行为学评分改善;神经元损伤减轻;假手术组未见HIF-1α表达,EGB治疗组较模型组HIF-1α表达明显增多(P<0.05)。结论EGB可能通过增加HIF-1α表达减轻局灶性脑缺血再灌注组织神经元损伤从而发挥保护作用。

SARS患者脾淋巴细胞免疫组织化学的定量分析

目的对严重急性呼吸综合征(SARS)患者脾淋巴细胞进行定量分析,为SARS的病理变化和发病机制的探讨提供证据。方法通过免疫组织化学技术对6例SARS死亡患者脾和6例意外死亡者正常脾CD3+、CD4+、CD8+T细胞及CD20+B细胞的分布进行观察,并进行图像分析。结果SARS患者脾内的脾小体及动脉周围淋巴鞘(白髓)均遭到严重损害。动脉周围淋巴鞘的数量减少90·39%;脾小体减少80%左右,有的甚至完全消失;脾红髓广泛出血坏死。红髓内的CD3+T细胞平均数较正常减少71·76%,有的甚至完全消失,CD4+T细胞和CD8+T细胞分别平均减少86%和84%。CD20+B细胞减少80%以上。结论定量分析显示,SARS死亡患者脾中T细胞和B细胞普遍严重减少,提示SARS患者免疫系统遭到严重破坏,并可能是疾病的原发性损伤。

体外膜肺氧合支持治疗期间机体凝血功能的动态变化

目的观察成人体外膜肺氧合(ECMO)支持治疗期间凝血指标的动态变化。方法 42例成人心脏术后ECMO支持患者,于ECMO建立时,建立24 h及撤机前检测血小板计数。分别在ECMO建立前,ECMO建立1、6、24、48、72 h及撤机前测定全血激活凝血时间(ACT)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶原时间(APTT)及纤维蛋白原(FIB)等指标。按发生院内死亡将患者分为存活组与死亡组,比较2组各时点上述指标的差异。结果血小板计数在ECMO期间明显下降(P<0.05)。PT、APTT与ECMO前相比均明显延长(P<0.05),纤维蛋白原在ECMO建立后一过性降低,6 h后逐渐升高,撤机前达峰值。结论ECMO支持治疗期间通过激活内外源性凝血途径,导致凝血功能紊乱。

茉莉花提取液对老龄小鼠的抗氧化作用

目的:探讨茉莉花提取液对老龄小鼠的抗氧化作用。方法:将老龄小鼠随机分为老龄茉莉花提取液组和老龄生理盐水组,每组8只,另设8只青年小鼠作为青年生理盐水组,三组连续灌胃28d,1次/d,第29天处死小鼠,迅速取其心、脑组织测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量。结果:老龄茉莉花提取液组比老龄生理盐水组SOD的含量有显著升高(P<0.01),比青年生理盐水组低(P<0.01);老龄茉莉花提取液组比老龄生理盐水组MDA的含量有显著的降低(P<0.01),与青年生理盐水组无明显差异(P>0.05)。结论:茉莉花提取液对老龄小鼠机体能起到显著的抗氧化作用,具有一定的抗衰老作用。

内皮素-1反义脱氧寡核苷酸对糖尿病肾病大鼠肾组织形态学的影响

目的:研究内皮素-1反义脱氧寡核苷酸(ET-1AS-ODN)对链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导的糖尿病大鼠肾组织形态学的保护作用及其机制.方法:一次性腹腔注射STZ(60mg/kg),建立大鼠糖尿病模型,观察ET-1AS-ODN预防性给药对大鼠肾组织形态结构的保护作用.结果:ET-1AS-ODN可明显减轻糖尿病大鼠肾肥大指数,改善肾组织形态学损伤.结论:内皮素-1反义寡核苷酸可减轻STZ诱导的糖尿病肾病大鼠的肾损伤,对肾组织具有保护作用.其机制与减少内源性内皮素的产生有关.

成人和成体羊心脏组织动力学比较

目的:比较正常成人和成体羊心脏的组织动力学过程,探讨心脏组织演化的规律。方法:取12只山羊和6例人尸检心脏组织标本及羊心脏传导系统标本,常规石蜡切片,HE染色,光学显微镜观察。结果:正常成人与成体羊心脏组织演化均包括心内膜-心肌演化体系、房室间区-心肌演化体系和肌层内心肌演化体系,但在羊心内膜-心肌演化体系中的优势演化途径是心内膜细胞-心肌生成单位-心肌细胞演化系,人的优势演化途径是心内膜细胞-非心肌生成单位-心肌细胞演化系;在肌层内心肌演化体系中有细胞重建的重要演化方式。结论:正常成人和成体羊心肌演化总体模式基本相似,但各自具有不同优势演化途径。

羊心脏蒲肯野纤维和蒲肯野纤维-心肌束连接观察

目的:观察羊心脏蒲肯野纤维的演化过程和蒲肯野纤维与心肌束连接及其演化关系。方法:12只山羊取心脏后,常规石蜡切片,HE染色,光学显微镜观察。结果:正常成体羊心室肌层内蒲肯野纤维,按组成细胞的演化程度不同分为6级。蒲肯野纤维-心肌束的连接方式随连接所在部位、蒲肯野纤维的演化程度而不同。结论:正常成体羊心室肌层内的蒲肯野纤维为束细胞和(或)心肌细胞组成的动态结构。蒲肯野纤维与心肌束有多种连接方式,但均反映2者存在演化关系。

米非司酮对大鼠输卵管粘膜上皮生长的影响

目的 :利用米非司酮 (RU4 86 )阻断孕激素受体 ,观察孕激素作用被抑制后雌激素对输卵管的效应。方法 :实验动物选用成年SD雌鼠 ,体重 2 0 0～ 2 5 0g,随机分为RU4 86处理组和对照组 ,对照组动物根据阴道脱落细胞学检查又分为动情前期 (PE)组、动情期 (E)组、动情后期 (ME)组和动情间期 (DE)组。结果 :①光镜观察见RU4 86处理组输卵管粘膜上皮为假复层柱状 ,粘膜上皮细胞分化完全 ,由纤毛细胞和分泌细胞构成。经检测计量分析RU4 86处理组输卵管壶腹部粘膜上皮细胞高度较对照组各组明显增高 ,峡部粘膜上皮细胞高度未见明显变化。②增殖细胞核抗原 (PCNA)免疫组化实验结果发现大鼠输卵管壶腹部粘膜上皮细胞PCNA面积阳性率以RU4 86处理组最高 ,对照组中各组变化趋势为动情期 >动情前期 >动情间期 >动情后期 ,各组峡部粘膜上皮仅偶见PCNA阳性细胞。结论 :当孕激素效应被RU4 86拮抗后 ,雌激素对输卵管壶腹部粘膜上皮持续发挥了促细胞增长、增殖作用 ,继而可能导致输卵管的功能活动增强 ,并与正常生理状态具有一定的差异 ,但这一效应在峡部体现并不明显。提示雌、孕激素的相互拮抗作用对维持输卵管的正常功能活动 ,尤其对于壶腹部具有不容忽视的作用 。