大鼠胚胎胰腺发育后期基因表达谱的研究

目的:研究大鼠胚胎发育至第15.5和18.5天胰腺基因表达谱,探讨特异性基因表达在正常内外分泌胰腺发育及糖尿病中所起的作用。方法:①实验于2003-09/2004-06在南京医科大学生化与分子生物学实验室完成。选用SD大鼠,雌雄各10只,将雌雄鼠按1∶2合笼,分别于胚胎发育至第15.5和18.5天,剖腹取出孕子宫,分离胚胎。②应用显微分离及提取技术获得胚胎发育不同阶段胰腺组织并提取RNA,采用高密度寡核苷酸芯片(Affemetrix芯片)对胚胎发育至第15.5天和第18.5胚胎胰腺进行基因转录水平分析,用生物信息学方法分析具体基因的表达情况。结果:胚胎发育至第18.5天与胚胎发育至第15.5天相比,差异表达2倍以上的基因共1319条。其中表达上升的基因664条,表达下降的基因655条,功能已知基因占63%,表达序列标识占37%。控制胰腺细胞分化的转录因子明显下调,与功能代谢相关的转录因子有上升趋势,内外分泌酶类、激素类表达有上升趋势,骨架蛋白有下降趋势,与激素、酶类分泌相关的因子基本无表达。结论:大鼠胚胎胰腺发育至第15.5～18.5天,内分泌典型胰岛结构及外分泌腺泡、导管结构已基本形成,功能细胞分化基因表达下降,而细胞代谢调节功能基因表达上升,因此,在大鼠胚胎发育至第15.5天胰腺,功能细胞的代谢调节功能开始完善。

低温冷冻对皮肤组织桥粒芯糖蛋白2表达的影响

目的:观察桥粒芯糖蛋白2(desmoglein2,Dsg2)在不同温度保存皮肤组织中的分布,以探讨其与皮肤冷冻损伤的关系。方法:用Dsg2抗体对5种保存条件下的皮肤组织作免疫组化染色,采用计算机图像定量分析方法测定表皮组织中的含量,并用H.E染色观察皮肤的组织结构变化。结果:与新鲜皮片组相比,-196℃温度条件下保存皮肤组织结构保存较好,Dsg2含量变化不明显,而4℃、-20℃、-80℃保存皮肤组织结构破坏明显,含量亦明显下降。结论:皮肤低温保存冷冻损伤可能与Dsg2破坏有关。

氯氮平对雄性C57BL/6小鼠胰腺β细胞凋亡的影响

目的:探讨氯氮平对雄性C57BL/6小鼠胰腺β细胞凋亡的影响。方法:实验于2004-03/09在南京医科大学第一附属医院中心实验室完成。选择清洁级雄性C57BL/6小鼠63只,体质量(20±2)g,由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供[许可证号:SCXK(沪)2003-0003]。随机分为空白组21只、氯氮平4mg/kg组21只、氯氮平20mg/kg组21只,各组小鼠的体质量和基础血糖值无显著差异(P>0.05)。所有动物每7只分笼饲养于光照12h(7Am～7Pm),相对湿度45%的普通设施中,普通全价鼠饲料喂养,自由进食及饮水。①模型制作:氯氮平充分研磨后加入蒸馏水,配成浓度为2g/L和0.4g/L的悬浊液,灌胃前充分匀。氯氮平4mg/kg组灌胃0.4g/L的悬浊液0.2mL,氯氮平20mg/kg组灌胃2g/L的悬浊液0.2mL,空白组灌胃同样剂量的蒸馏水。按发病不同时间每组再分为3组,各7只,超急性期组灌胃1次;急性期组灌胃1次/d,共7次;慢性期组灌胃1次/d,共28次。②标本的处理:禁食12h(8Pm～8Am)后,超急性期组在第1次灌胃后3h,急性期组(1周)和慢性期组(4周)灌胃1次/d,最后一次灌胃后3h,摘眼球取血后颈椎脱臼处死小鼠,立即取小鼠的胰腺置体积分数为0.1的中性甲醛液中固定24h,常规制作石蜡切片,厚4μm。采用苏木精-伊红染色,光镜下观察胰岛炎的情况。应用原位末端转移酶标记法染凋亡细胞,用链霉亲合素-生物素化过氧化物酶复合物免疫组织化学法染β细胞,进行β细胞凋亡计数。结果:纳入动物63只,均进入结果分析。①苏木精-伊红染色显微镜观察显示:空白对照组、氯氮平4mg/kg组、氯氮平20mg/kg组小鼠胰岛均位于胰腺外分泌部之中,其岛形丰满,轮廓清晰,胰岛细胞分布均匀,均未见淋巴细胞浸润。②免疫组织化学染色显微镜观察显示:空白对照组、氯氮平4mg/kg组、氯氮平20mg/kg组小鼠胰岛轮廓清晰,胰岛细胞分布均匀,内外分泌部界限清楚,大量的β细胞胞浆呈棕黄色的胰岛素阳性表达,未见β细胞凋亡,可见少量散在的胰腺腺泡细胞凋亡。结论:氯氮平对胰腺β细胞没有明显的毒害作用,不诱导β细胞的凋亡。

低温储存对皮肤组织α辅肌动蛋白和纽蛋白表达的影响

目的:观察α辅肌动蛋白和纽蛋白在不同温度保存皮肤组织中的分布,以探讨其与皮肤冷冻损伤的关系。方法:用α-actinin、vinculin抗体对5种保存条件下的皮肤组织作免疫组化染色,用图像分析仪测定表皮组织中的含量,并用HE染色观察皮肤的组织结构变化。结果:与新鲜皮片组相比,-196℃H抗冻液中保存皮肤组织结构保存较好,α-actinin、vinculin含量变化不明显,而4℃、-20℃、-80℃保存皮肤组织结构破坏明显,含量亦明显下降。结论:皮肤低温保存冷冻损伤与黏附分子α-actinin、vinculin破坏有关。

人体大网膜血管生长作用的研究

采用人体大网膜进行分离纯化提取物（LAF）注射在免角膜基质层，出现了丰富的新生血管；而在免角膜上采用石炭酸烧灼伤，针刺损伤和用人体脂肪、血浆、脓液注射免角膜基质层作对照组，均未出现新生血管。同时又对大网膜纯化物进行了光谱分位，结果表明有吸收峰在255nm处．证明此物质为脂质。高效薄层层所（HPTLC）见有一条特异的条带，其Rf值为0．14，研究结果证实大网膜存在丰富的血管生长物质一胎质血管生长因子（LAF）。

胰抑素在人、猪和豚鼠胰腺分布的免疫组织化学研究

胰抑素(pancreastatin,PS)是一种具有抑制胰岛分泌作用的新肽。本研究用ABC免疫染色法,在Bouin液固定的常规石蜡切片上,研究了胰抑素在豚鼠,猪和人胰腺内的定位和分布,并用相邻切片双标记法,观察了它与胰岛素的共存关系。结果发现,在人胰腺胰抑素样免疫反应(PLI)细胞主要分布于胰岛的周边部。在猪和豚鼠,大部分胰岛细胞呈阳性胰抑素样免疫反应。用相邻薄切片免疫染色技术证明,猪和豚鼠的PLI细胞主要是B细胞。在3个种属胰腺外分泌部的导管和腺泡等处,也均见有PLI细胞分布,在豚鼠胰腺尤为多见。本文对胰抑素在3个种属胰腺不同分布方式的意义进行了讨论。

豚鼠胰腺生长抑素和高血糖素免疫反应细胞形态学观察

作者利用石蜡组织切片的HRP-SPA-GDN和HRP-SPA染色技术,对豚鼠胰腺生长抑素(somatostatin,SOM)和高血糖素(glucagon,Gluc)免疫反应细胞的分布及形态学作了初步观察。结果表明,SOM免疫反应细胞主要分布在胰岛的中央和周边部,而Gluc细胞则主要位于胰岛的周边部,胰岛内SOM免疫反应细胞形态各异,多数细胞伸出较长的细胞突起,而Gluc免疫反应细胞则形态均一,呈圆形或椭圆形。在胰外分泌部有散在分布的SOM阳性细胞,位于腺泡及导管上皮细胞间,或结缔组织中。在外分泌部木见到Gluc阳性细胞。

bulge区毛囊组织块培养结合酶消化法分离大鼠毛囊隆突部细胞的生物学特征

背景：目前毛囊隆突部细胞的分离培养方法多存在细胞分离纯度不高、活力差等缺点，采用组织块法和酶消化法分离培养大鼠毛囊隆突部细胞能否克服上述缺点？目的：本实验采用组织块法和酶消化法分离培养大鼠毛囊隆突部细胞并对其进行鉴定。设计、时间及单位：单一样本设计，体外细胞培养实验。于2007—03／08在中国医科大学组织工程学实验室完成。材料：选用15只雌性Wistar大鼠，由中国医科大学实验动物中心提供。实验用表皮生长因子、Hoechst33342购白美国Sigma公司，SAB-小鼠IgG抗体免疫组化试剂盒、SABC—Cy3免疫荧光组织化学试剂盒、DAB显色剂、SABC—FITC免疫荧光组化试剂盒均购白武汉博士德公司。方法：利用显微分离的方法将大鼠触须部皮肤分离，剪开真皮和皮下组织，将毛囊与周围组织钝性分离取出毛囊，剪开结缔组织鞘，用显微外科镊取出毛囊外根鞘bulge区，移入培养板中进行组织块培养，应用0．25％胰酶＋0．02％EDTA消化分离大鼠毛囊bulge区细胞，倒置相差显微镜下观察其增殖能力，免疫荧光法检测毛囊隆突部细胞K15、β1整合索和P63的表达情况。主要观察指标：①大鼠隆突部细胞增殖能力。②毛囊隆突部细胞K15、β1整合索和P63的表达。结果：①大鼠隆突部细胞胞体积较大，胞核大，核仁明显，细胞生长迅速，活力好，3-4d即可传代，具有增殖能力强、细胞纯度高等特性。②细胞免疫荧光结果显示培养的细胞胞浆角蛋白15阳性，细胞的胞膜β1整合索阳性，细胞的胞核P63阳性。结论：组织块法结合酶消化法可成功分离培养毛囊隆突部细胞，细胞可同时表达K15、β1整合索和P63，纯度高，活力好。

豚鼠胰腺5-羟色胺免疫细胞化学定位

作者利用自制的5-羟色胺(5-HT)抗血清,成功地对豚鼠胰腺进行了免疫细胞化学定位。结果表明,应用PAP-GDN和PAP染色技术,观察到在豚鼠胰腺的内、外分泌部均有5-HT免疫反应细胞分布。在胰腺内分泌部(胰岛)5-HT免疫反应细胞分布均匀,形态多样,大小不等。在外分泌部,5-HT免疫反应细胞呈单个分散或聚集分布,主要位于腺上皮或导管上皮之间,或位于腺泡之间或导管旁的结缔组织之中。作者对其意义进行了讨论。

胰腺微循环的解剖和生理

目的:揭示胰腺微循环的解剖学特征、动力学特点及相关的机能和临床意义.方法:采用保留动态和组织信息于静态样本的微循环光镜和扫描电镜研究法、FITC红细胞标记胰腺微循环活体荧光显微观察法,对猴、狗、鼠、兔胰腺微循环通道的构筑特征、胰腺活体微循环的动力学特点进行了研究.结果:①胰腺小叶内动脉与小叶内静脉之间包括了胰腺内分泌部和外分泌部两极毛细血管床;②胰腺门脉循环流向是由内分泌部流向外分泌部;③胰腺小叶多由独支的小叶内动脉供血,相邻小叶内动脉及其分支间无吻合存在,属终末动脉;④生理状态下胰腺微循环表现为稳定的毛细血管灌注形式,灌流量约1.18±0.05nl/min;急性胰腺炎早期出现FITC-RBC流量减少、微循环灌流不足和机能毛细血管密度减少.结论:胰腺小叶为胰腺微循环形态与机能的基本单位:胰岛-腺泡门脉循环是胰腺微循环的基本特征;胰腺小叶内动脉具终末动脉的特性,是急性胰腺炎局部微循环紊乱的解剖学基础.